焦作市中心血站 454000
【摘 要】目的 分析比较酶联免疫吸附试验（ELISA）和核酸检测技术（NAT）这两种方法对无偿献血者乙肝标志物的检测结果。方法采用高灵敏度进口和国产ELISA试剂对焦作地区2015年6~12月无偿献血者共22588名进行HBsAg血液定性筛查，将乙肝表面抗原（HBsAg）检测非反应性和弱反应性标本再进行核酸检测技术（NAT）检测。结论检测HBsAg弱反应性标本时存在比较高的假阴性率和假阳性率，NAT和ELISA灵敏度和特异性接近，NAT与ELISA技术的方法学差异主要是检测的对象不同，且ELISA与NAT检测各有优劣，因此2种方法进行双检可以有效提高灵敏度和特异性。
根据流行病学的调查，我国乙型肝炎病毒的感染率在10%左右（1）。按照《献血者健康检查要求》（2），血站应对无偿献血者进行乙肝表面抗原（HBsAg）初检复检两次检测。为进一步保障用血安全，我站采用ELISA和NAT两种方法进行检测，现将报告如下。
1.材料和方法
1.1调查对象：2015年6月至2015年12月，本市无偿献血者22588名，年龄18-55岁。使用ELISA对所有无偿献血者血液标本进行HBsAg检测，再使用NAT对ELISA检测阴性和弱反应性的无偿献血者血液标本进行HBV DNA检测。
1.2试剂：HBsAgELISA试剂盒（初检北京万泰生物技术有限公司、复检法国BIO-RAD生物技术有限公司），HBV NAT试剂盒（上海浩源科技有限公司）。所有试剂均由合格供方提供，进货检验合格，有效期内使用。
1.3主要仪器：UranusAE全自动酶免疫分析仪（深圳爱康电子有限公司）。ChiTasBSS1200核酸血液筛查系统（上海浩源科技有限公司），ABI7500实时荧光定量PCR系统（美国ABI公司），TDL5B台式大容量低温离心机（长沙英泰公司）。
1.4方法
1.4.1ELISA检测流程：每位无偿献血者均留取初检，复检2份标本，应用ELISA法，按照说明书要求，进行初检、复检2次检测。
1.4.2ELISA法结果判读规则：反应性，S/C.O≥1；弱反应性，1＞S/C.O≥0.7；非反应性，S/C.O＜0.7
1.4.3NAT检测流程：每位无偿献血者均留取1份标本，将ELISA检测非反应性和弱反应性的标本应用NAT法，按照说明书要求，进行检测。
1.4.4NAT法结果判读规则：按照试剂盒说明书要求，筛选ELISA检测合格和弱反应性的标本进行8个标本混样核酸检测，无反应性汇集池（pooling）的8个标本视为该项目核酸检测合格，有反应性pooling的进行标本的拆分单检，拆分无反应性的标本判为合格，拆分亦有反应性的标本判为该项目核酸检测不合格。
1.5质量控制：ELISA法检测每板均按实际说明书要求，设置相应的空白、阴性对照、阳性对照及室内质控，并按时参加室间质评活动。NAT法检测每板均按实际说明书要求，设置相应的阴性对照、阳性对照及室内质控，每个检测孔设置内标。
2.结果
3.讨论
乙型肝炎是由乙肝病毒（HBV）引起的，以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种广泛传染病，HBsAg是乙肝患者血清中首先出现的病毒标志物，所以HBsAg对于乙型肝炎的早期诊断和保障用血安全具有很高的价值。ELISA实验灵敏度高，特异性好，试剂稳定，操作简单快速，无放射性污染，可利用全自动酶免分析仪进行自动化检测，检测通量大，特别适合用于大批量无偿献血者血液标本的传染性指标检测，在采供血机构得到广泛应用（3-4）。但是，多种因素包括献血者体内原因、标本质量原因、检测试剂、仪器设备、实验环境、人员因素等，可影响ELISA实验结果（5）。NAT灵敏度与特异性高，在病毒感染23天左右即能检查，可明显缩短HBV感染的“窗口期”，可有效弥补ELISA方法存在的“窗口期”较长，降低输血者通过输血感染HBV的风险。ELISA和NAT两种方法的检测原理和检测对象不同，ELISA的检测对象是抗原或抗体，NAT检测对象是病毒核酸，对实验环境、设备、标本留样和处理要求更高，灵敏度和特异性高，重复性好。因此，两种方法存在一定的互补性。
参考文献：
[1]李立明，流行病学[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2004：481-484.
[2]中华人民共和国国家标准.GB18467-2011献血者健康检查要求[S].
[3]中华人民共和国国家卫计委.血站技术操作规程.国卫医发[2015]95号
[4]蔡丽娜，朱绍汶，周春，等.2010-2013年中国南京地区无偿献血人群HBV、HCV、HIV感染情况分析[J].中国实验血液学杂志，2014，22（4）：1089-1093.
[5]谭立明.ELISA法检测的影响因素及其对策[J].实验与检验医学，2013，31（4）：300-305.
论文作者:关茵,郭美英,李渝
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2016年6月第5期
论文发表时间:2016/6/28
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