（四川省凉山洲雷波县疾病预防控制中心检验科 616550）
摘要：目的 对一起在夏季因奔丧聚餐后吃了可疑剩余米饭菜导致食物中毒的病原菌展开实验室检验，分析其流行因素及病原学，为之后的卫生防控作参考。方法 采用现场调查方法进行生物样本采集及流行病学调查，采集剩余米饭，回锅肉，炒莲白各250克。呕吐物.肛拭.排泄物现场接种葡萄糖肉汤，并利用荧光PCR法及细菌培养方法对采集的12份生物样本进行测定。结果 经荧光PCR法检验后，在剩余米饭中检出蜡样芽胞菌及HBL毒素阳性；经细菌培养检验出剩余米饭中的蜡样芽胞菌计数15*106cfu/g.结论 本次食物中毒是因食用被蜡样芽胞杆菌污染的剩余米饭所导致。因此，少数民族偏远地区在夏季，尤其是在缺少冷藏条件下应做好剩余食品的管理工作，食用前应充分加热，减少此类事件的发生。
关键词：夏季；食物中毒；蜡样芽胞菌；荧光PCR法；标准菌株：CMCC质控菌株；细菌微生物培养法。
Objective：To carry out laboratory tests on pathogenic bacteria that ate food poisoning caused by suspicious surplus rice meals after a funeral dinner in summer.Methods：the method of field investigation was used to collect biological samples and epidemiological survey，and 250 grams each of the remaining rice，pork and fried Lotus were collected.Spitter.Anal swab.Excretion inoculation of glucose broth on site.12 biological samples collected were determined by fluorescence PCR method and bacterial culture method.RESULTS：After the fluorescence PCR test，the wax-like Bacillus and HBL toxin were positive in the remaining rice.Bacterial culture showed that the wax-like Bacillus in the remaining rice counted 15 * 106cfu/g，vomit-excrement-no wax-like Bacillus was detected in the anal swab test；No other biological samples were detected.Conclusion：The food poisoning was caused by the consumption of the remaining rice contaminated by Bacillus waxiformis.Therefore，the management of surplus food in remote areas of ethnic minorities should be done in summer，especially in the absence of cold storage conditions，and should be fully heated before consumption，preferably after hot consumption，or should be avoided to reduce the occurrence of such incidents.
[Keywords] Summer；Food poisoning；Fluorescence PCR method of Bacillus wax-like；Standard strain：CMCC quality control strain；Bacterial microorganism culture method.
2017年7月23日19：20，我县某村发生一起因奔丧聚餐后吃了可疑剩余米饭，蔬菜导致食物中毒事件，并对中毒者的临床症状和流行病学进行调查后，采集可疑饭菜进行荧光PCR法及细菌培养方法检验后，明确为米饭中污染蜡样芽胞菌导致的细菌性食物中毒，研究报告详情如下所述。
1.资料与方法
1.1一般资料
本次的研究对象为我县某地区于2017年7月23日19：20发生的一起因奔丧聚餐后吃了剩余米饭，回锅肉，炒莲白村民，餐后1~6h内接连产生急性病例。根据流行病学调查，发现当天中午12点吃午饭，剩下的饭菜直接暴晒于阳光下，当日下午5点有20名村民食用了剩余米饭，回锅肉，炒莲白之后，分别有12名村民发生了不同程度的腹痛、恶心、呕吐、发热等症状。其中，儿童腹泻，呕吐症状较严重。询问未食用者未发生病例[1]。对奔丧聚餐卫生条件、布局调查，食物食物制作均由村民自行完成，且均无正规健康合格证明，参与制作的村民近期内均未发生腹泻、渗出性及化脓性皮肤病。食物制作处于室外简易场地，周围卫生环境较差，米饭菜煮熟后直接放于外界温度条件下存储，未使用防蝇罩.
1.2检验方法
采用现场调查方法进行生物样本采集及流行病学调查，并利用荧光PCR法检验及细菌培养方法对采集的12份生物样本进行测定。包括了4份病人的肛拭子，3份呕吐物，2份排泄物，1份米饭，1份回锅肉，1份炒莲白。
本次检验中所使用的仪器及试剂分别为荧光定量PCR仪、蜡样芽胞杆菌标准菌株、血琼脂、甘露醇卵黄多粘菌素、葡萄糖营养肉汤，细菌微量生化管，使用均处于有效期内 [2]。荧光定量PCR仪配套试剂均处于有效期内。
荧光PCR检验法：将所有采集的样本使用葡萄糖营养肉汤增菌处理，即进行志贺氏菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、大肠埃希菌0157：H7、蜡样芽孢杆菌等增菌处理，35℃培养时间为6h，之后提取各样本进行DNA检测，提取1ml增菌液。在离心机13000rpm离心5min，将上层血清舍弃，取其沉积物。将沉积物与100μl提取液进行混合，待充分摇匀后，进行10min沸水浴，再进行13000rpm离心5min，提取上层清液用于样本计算。将24μl内部对照品、9.6μl酶与864μl核酸混合液进行混合并充分摇匀，之后再进行13000rpm离心5~10s。将样本36μl分装加模板上层清液4μl按37℃120s，之后再按95℃60s，50℃60s，72℃60s的顺序进行，反复进行40次，最后在60℃时进行单点荧光检验，开展核酸检验[3]。
细菌培养方法 根据《预防医学微生物及检验技术》[4]以及GB4789.14-2014[5]检验规范开展检验工作。细菌法的初期检验要求，将米饭，回锅肉，炒莲白样本遵循GB4789.14-2014要求进行，取样量为25g，将其置于无菌均乳钵中进行均质处理，然后置于225ml无菌生理盐水中将其稀释1：10，1：100，1：1000后，选取3个稀释度的样本分别接种于MYP琼脂平板，血平板，普通营养琼脂，置35摄氏度恒温培养24小时。肛拭子，呕吐物，排泄物样本使用葡萄糖营养肉汤增菌处理后分别接种MYP琼脂平板，血平板，普通营养琼脂，置35摄氏度恒温培养24小时。培养结果为米饭样品生长出可疑菌落，记录菌落形态为：普通营养琼脂上圆形，隆起，灰白色，菌落较大，表面粗糙，有蜡样光泽，呈腊滴样，不透明。血平板上呈浅灰白色，似毛玻璃样菌落，有完全溶血或不完全溶血环。MYP琼脂平板菌落周围呈白色浑浊环，呈乳光反应或卵黄反应。分别作菌落计数和菌落形态及溶血情况记录，挑取可疑菌落作革兰氏染色镜检，并作相应生化鉴定实验。
2.结果
2.1荧光PCR检验法检验结果
经荧光PCR法检验后，在剩余米饭中检出蜡样芽胞菌及HBL毒素阳性。
2.2细菌培养方法检验结果
经细菌培养检验出剩余米饭中的蜡样芽胞菌计数15*106cfu/g，呕吐物，排泄物，肛拭子检验中并未检出蜡样芽胞杆菌。检验结果如下表所示。
3.讨论
蜡样芽胞杆菌在自然环境中广泛存在，有较强的抵抗能力，作为导致污染食物中毒的主要致病菌，在我国细菌性食物中毒中居于3位[7]。该菌在有氧环境下生长，有鞭毛（动力阳性）、无荚膜、有芽胞的革兰氏阳性杆菌。它所形成的肠毒素能够使人引发恶心，呕吐、腹泻等症状。可在15~45℃的环境下生存并繁殖，其中35℃为最佳繁殖温度，PH值4.9-9.3环境中均可生长，芽孢能耐受100℃30分钟才能杀死，耐干热120℃60分钟。值得留意的是，因蜡样芽胞杆菌导致中毒的食物，其变质情况并不明显，所以不易被人们轻易察觉，因此应提高人们对该致病菌导致食物中毒的重视程度。将食物暴露于空气中放置于30℃左右的环境下进行保管或者是放置时间过长，导致食物中蜡样芽胞杆菌大量繁殖，并且摄入量>106cfu/g，就会导致中毒。本次研究中导致村民引发食物中毒的特点如下：①导致此次食物中毒的剩余米饭中的蜡样芽胞菌计数>106cfu/g，剩饭在30摄氏度温度状态下保管时间均>5h，并且在未完全加热情况下食用进而使得蜡样芽胞菌超标导致村民引发食物中毒。②将采集的生物检测样本经荧光PCR法检验及细菌培养检测后，检测结果显示，剩余米饭中检出蜡样芽胞菌及HBL毒素阳性。③因为丧礼聚餐，所有存在着共同进餐史，村民均于7月23日17点晚餐进食被污染的剩饭后发病，未食用的未发生发病现象。④潜伏期时间不长，平均为1~6h，发病急，病程时间短，并且临床症状表现类似，多为腹痛、呕吐、腹泻等症状，以临床表现、流行病学检测、实验室检验结果为依据，明确其为蜡样芽胞杆菌导致的食物中毒。
蜡样芽胞菌导致食物中毒具有明显季节性，多发生于夏秋季节。今年本地区多高温天气，有助于蜡样芽胞菌繁。因此，为减少此类中毒情况的再次发生，食品药品监督部门应做好县乡村食品安全监督监管工作，增强食品安全监管力度，婚丧嫁娶应事先向政府部门提出申请，到相关部门领取消毒药片，食物操作制度上墙，对盛放食物的器具，碗筷等应做好严格的消毒管理工作，将剩余的饭菜置于冷藏环境下进行保管，食用时应加热完全，减少凉菜的食用，生熟菜板要分开，加强环境卫生管理，加强生活饮用水管理，厕所管理，个人卫生管理。加强群众健康教育宣传工作。
本文通过研究得出，本次所采集的样本经荧光PCR法检验后，在剩余米饭中检出蜡样芽胞菌及HBL毒素阳性；经细菌培养检验出剩余米饭中的蜡样芽胞菌计数15*106cfu/g，达到中毒标准量级。
参考文献
[1]倪刚，倪文玲，何美红，等.一起蜡样芽胞杆菌食物中毒分离株的毒力基因分析研究[J].现代预防医学，2016，43（13）：2439-2441.
[2]王蒋丽，李彩云，王伟，张聪，曾皎箭.一起蜡样芽胞杆菌食物中毒的病原菌检测分析[J].医学动物防制，2017，33（04）：468-469.
[3]许阳.一起由蜡样芽胞杆菌引起的食物中毒病原学检测[J].疾病监测与控制，2017，11（2）：139-139.
[4]王晓东，赵艳军，徐晔红.一起蜡样芽胞杆菌污染食品引起食物中毒的调查[J].医学动物防制，2017，33（06）：684-685+688.
[5]管辉日，范光，吴光渠.一起蜡样芽胞杆菌食物中毒的流行病学分析[J].海峡预防医学杂志，2018，24（01）：91-93.
[6]刘泽春.一起蜡样芽胞杆菌污染多种多餐食物引起中毒的调查分析[J].河南预防医学杂志，2015，26（01）：89-90+101.
[7]周帼萍，Niels Bohse Hendriksen，Kai Bester，等.一蜡样芽胞杆菌食物中毒分离株的表型与基因型[J].中国食品卫生杂志，2015，27（1）：10-14.
[8]]陆湘华，崔昌，王远萍，朱渭萍.蜡样芽孢杆菌食物中毒的研究进展[J].传染病信息，2015，28（04）：251-254.
论文作者:杨蓉
论文发表刊物:《航空军医》2018年15期
论文发表时间:2018/10/31
标签：食物中毒论文; 杆菌论文; 米饭论文; 剩余论文; 荧光论文; 样本论文; 细菌论文; 《航空军医》2018年15期论文;