张青碧[1]2003年在《小鼠原代细胞彗星试验的建立及应用》文中研究指明彗星试验(comet assay)又称单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis assay，SCGE)，是一种在单细胞水平上检测DNA损伤与修复的方法。该方法具有简便、快速、灵敏、所需样品量少、重复性好、无需放射性标记等优点，可用于体内外各种实验，已迅速成为近年最广泛应用的DNA损伤检测方法。随着该技术的发展、成熟和完善，已被引进环境卫生学领域，在检测和评价环境因素的遗传毒性、环境与职业人群的生物监测、环境生态监测、环境流行病调查等方面，发挥着重要的作用。 目前彗星试验多采用细胞株，细胞株可以通过细胞培养获得，相对说，细胞培养技术复杂、试验周期长、费用高。因此本研究试图筛选一种取材方便、制作简单、价格低廉、省时、经济、实用的动物原代细胞应用于彗星试验，同时与彗星试验常用的受试细胞V79细胞进行对比研究，拟建立小鼠原代细胞彗星试验，并用新建方法对泸州市饮用水遗传毒性进行检测，对新方法的可靠性和实用性进行初步评价。 本研究以小鼠肝、脾、肾细胞作为受试细胞，用重铬酸钾作为受试物进行彗星试验。其结果显示叁种细胞在彗星试验中均有 小鼠原代细胞彗星试验的建立及应用一定的敏感性，但肝细胞的敏感性更高，且细胞自身具有一定的活化能力，因此筛选出小鼠原代肝细胞作为彗星试验的受试细胞。并与V79细胞进行对比研究，结果小鼠原代肝细胞比V79细胞更为敏感。 沪州市区位于长江上游、沱江下游，受到上游城市工农业废水、生活污水的严重污染，但对该地区饮水遗传毒性研究未见报道。本研究拟用已建立的小鼠肝细胞彗星试验对沪州市主要供水水厂南郊水厂的水源水、出厂水、自来水的致突变性进行研究，同时用AmeS试验对同一水样进行了对比研究，初步验证小鼠肝细胞彗星试验在饮水遗传毒性监测方面的可靠性和优越性。结果显示:Ames试验只都能检测出消毒后饮用水的致突变性，而彗星试验能同时检测出水源水和氯化消毒饮用水的致突变性，且检测闭值远远低于AmeS试验(彗星试验为0.IL/皿，Ames试验为3.OL/皿)，其敏感性提高近30倍。结果证明肝细胞彗星试验用于饮水遗传毒性检测比AmeS试验更为敏感、简便、快速、经济。 综上所述，本研究建立的小鼠肝细胞彗星试验具有取材方便、细胞制备简单、不需细胞培养和细菌培养、不需体外活化、经济、快速、敏感等优点，该试验在环境生态的遗传毒性检测方面具有广泛的应用前景。
张青碧, 陈志群, 甘仲霖, 李祥, 衡正昌[2]2004年在《用Ames试验和小鼠原代细胞彗星试验检测A市生活饮用水遗传毒性》文中研究说明目的 用Ames试验和小鼠原代肝细胞彗星试验检测A市生活饮用水遗传毒性并比较两种方法的敏感性。方法 采用Ames试验和彗星试验分别对A市南郊水厂的水源水、出厂水、自来水的有机浓集物的诱变性进行检测。结果 出厂水和自来水的Ames试验于试样浓度为 3 0L/皿时才表现为阳性结果 ,而肝细胞的彗星试验在水样量为0 1L时就出现明显的阳性结果 (与阴性对照比P <0 0 1) ,后者的浓度比前者低 3 0倍。水源水的Ames试验于试样浓度为 6 0L/皿时仍表现为阴性结果 ,而原代肝细胞的彗星试验在水样量为 0 5L时就出现明确的阳性结果。结论 Ames试验只能检测出氯化消毒后饮用水的致突变阳性 ,而彗星试验能同时检测出水源水和氯化消毒后饮用水的致突变性 ,后者的敏感性远远高于前者。
杨媛[3]2004年在《饮水消毒副产物氯代乙酸类遗传毒性研究》文中研究说明饮用水氯化消毒副产物对人的潜在致癌危害一直是人们十分关注的问题。目前已检测出消毒副产物有200多种。张晓建等估算,这些氯化消毒副产物中卤乙酸类的总致癌风险最大,达到90%以上。美国环境保护局(USEPA)长期致癌试验研究报告,二氯乙酸(dichloroacetic acid, DCA)可分别导致大鼠和小鼠肝癌,叁氯乙酸(Trichloroacetic acid, TCA)可导致大鼠肝癌。但是,氯代乙酸类消毒副产物的致癌机理尚不明确,尚不能根据现阶段已有的毒理学试验结果确定二氯乙酸和叁氯乙酸是否为遗传致癌物。 我们应用Ames试验、内、体外彗星试验和本实验室建立的RDPCR试验从细胞水平和分子水平研究二氯乙酸和叁氯乙酸的遗传毒性并探讨其致癌机理。 第一部分 二氯乙酸、叁氯乙酸致突变性研究 在Ames试验中,我们应用TA97、TA98、TA100、TA102四种细菌作为受试对象,根据不同菌的要求采用相应的阳性物质作为阳性对照,不加入受试物和阳性物质的试验组作为阴性对照。其结果均为阴性结果,说明不同浓度的受试物在Ames试验中未检测到致突变作用,即使浓度达到细胞毒性仍然未出现阳性结果。 第二部分 二氯乙酸、叁氯乙酸DNA链断裂效应研究 在本部分采用V79细胞、小鼠肝原代细胞染毒和小鼠体内染毒
参考文献：
[1]. 小鼠原代细胞彗星试验的建立及应用[D]. 张青碧. 四川大学. 2003
[2]. 用Ames试验和小鼠原代细胞彗星试验检测A市生活饮用水遗传毒性[J]. 张青碧, 陈志群, 甘仲霖, 李祥, 衡正昌. 中国工业医学杂志. 2004
[3]. 饮水消毒副产物氯代乙酸类遗传毒性研究[D]. 杨媛. 四川大学. 2004
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