成霄 朱佳茜
（湖州市食品药品检验研究院 浙江 湖州 313000）
【摘要】 目的：建立消食健胃片中绿原酸含量测定的方法。方法：采用高效液相色谱法，以ZORBAX SB-C18（4.6mm×150mm,5μ）为色谱柱，流动相为乙腈-0.4%磷酸（13:87），流速1.0 mL?min-1，检测波长为327nm。结果 绿原酸在0.0050mg?mL-1～0.0500 mg?mL-1范围内线性关系良好（r=1.0000）,平均回收率为99.59%,RSD=0.94%。结论：该方法准确、可靠、重复性好、专一性强，可用于消食健胃片中绿原酸的含量测定。
【关键词】 消食健胃片；绿原酸；高效液相色谱
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）26-0372-02
Quantitative Determination of Chlorogenic acid In Xiao Shi Jian Wei Pian by HPLC Cheng Xiao,Zhu Jiaxi.
Huzhou Institutes for Food and Drug Control,Huzhou,313000,China
【Abstract】Objective To study and establish the reversed phased high performance liquid chromatography method for determination of Chlorogenic acid in Xiao Shi Jian Wei Pian. Method The chromatographic conditions were as follows: Agilent ZORBAX SB-C18（4.6×150mm，5μ），column was used as stationary phase，the mobile phase was composed of Acetonitrile and 0.4% phosphoric acid solution (13:87)，the flow rate was 1.0 mL?min-1;the UV absorbance detection wavelength was set at 327nm. Results The Chlorogenic acid curve was linear within the range of 0.0050-0.0500 mg?mL-1（r=1.0000）;The average recovery of Chlorogenic acid was 99.59%. Conclusion The result showed that this method was convenient、rapid 、sensitive、reproducible and accurate. It can be used in determination of Chlorogenic acid in Xiao Shi Jian Wei Pian.
【Key words】Chlorogenic acid; Xiao Shi Jian Wei Pian ; HPLC
消食健胃片是一种常见的胃肠道消化药，有山楂、麦芽、六神曲、槟榔组成，一直以来都未对其含量进行控制。山楂是其主要的有效成分，而山楂中的绿原酸具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用，对消食也有一定的功效。为控制其含量，笔者采用高效液相色谱法（HPLC）对其进行了含量测定。
1.仪器与试药
高效液相色谱仪（Agilent 1260）；紫外检测器；电子分析天平（XS 205 DU型）；0.45μm微孔滤膜；DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所提供)；消食健胃片(天津和治药业有限公司，批号为100715、100917、111233)；乙腈（色谱纯，美国Fisher公司）；磷酸（国药集团化试有限公司）；纯化水（自制）。
2.方法与结果
2.1色谱分析条件与系统适用性试验
色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（4.6mm×150mm,5μ）；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液(13:87)；检测波长：327 nm；流速：1.0 mL?min-1；柱温：25℃；进样量：10μL。理论板数按绿原酸峰计算应不低于2000，分离度应大于2.0。
A 绿原酸对照品溶液
B 供试品溶液
2.2 溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品12.50mg，置于100mL量瓶中，加50%甲醇使溶解，稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（浓度为0.1250mg?mL-1）；另精密吸取适量，加50%甲醇稀释成浓度为10.00μg?mL-1的绿原酸对照品溶液。
供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约1.5g），置锥形瓶中，精密加入50%甲醇10mL，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
2.3方法学验证
2.3.1标准曲线的绘制 精密吸取绿原酸对照品贮备液（浓度为0.1250mg?mL-1)用50%甲醇稀释成质量浓度分别为0.0050,0.0100,0.0150,0.0250,0.0500mg?mL-1的溶液，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以绿原酸峰面积值为纵坐标,对照品浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=30950X+2.9016，r=1.0000，结果表明绿原酸在0.0050～0.0500mg?mL-1的范围内，具有良好的线性关系。
2.3.2精密度试验 取同一绿原酸对照品溶液（浓度为0.0100mg?mL-1）10μL，重复进样6次，记录峰面积，结果的RSD为0.24%,表明精密度符合要求。
2.3.3重复性实验 取消食健胃片样品（批号111233）,制备6份样品，按照色谱条件注入高效液相色谱仪，测定绿原酸的含量，结果表明：采用本方法测定消食健胃片中绿原酸的含量，结果6份样品的峰面积积分值RSD为0.77%，重现性符合要求。
2.3.4稳定性试验 取同一供试品溶液（批号：111233），分别在0、2、4、8、12、24小时内测定绿原酸的峰面积值，结果RSD为0.87%，表明消食健胃片样品在24小时内稳定.
2.3.5加样回收试验 准确称取已知绿原酸含量的消食健胃片6份，每份约1.5g，每份精密加绿原酸对照品溶液适量，依法处理提取液，取10μL进样。结果表明：本方法测定消食健胃片的绿原酸含量加样回收率良好。
表1 样品的加样回收试验(n=6)
平均回收率（%）=99.59%RSD（%）=0.94%
2.3.6最低检出限 取绿原酸对照品溶液，用50%甲醇逐步稀释，上机测定，至峰高为基线噪音的3～5倍。结果绿原酸最低检测量为1.31μg?mL-1。
2.4 样品测定
精密称取本品3个批号的供试品（100715、100917、111233）依法处理，进样，测得含量分别为0.196、0.199、0.201mg?g-1
2.5 高效液相测定绿原酸含量的结论
消食健胃片中绿原酸含量测定方法经过方法学验证试验结果表明，线性、精密度、重复性均符合《中国药典》2010年版一部的有关规定，样品在24小时内稳定，平均回收率为99.59%，RSD%=0.94%，此方法可以用于消食健胃片中绿原酸的含量测定方法。
3.讨论
3.1 本品中的山楂含有较多的芦丁等黄酮类成分，经DAD检测，在327nm附近绿原酸有较大的吸收，且干扰较小，选择327nm波长为绿原酸的检测波长。
3.2 HPLC法，操作简单，结果准确，重现性好，可作为消食健胃片中山楂的质控方法，对于消食健胃片的产品质量，安全性及稳定性有重大意义。
【参考文献】
[1] 中华人民共和国药典：[S].2010年版一部：205-206
[2] 胡志国，王远兴，陈振桂等.反相高效液相色谱法测定山楂中绿原酸的含量[J].食品科学，2007，11（28）；408-409
[3] 任丽平.HPLC法测定山楂叶中绿原酸的含量[J].安徽农业科学.2010，38（32）；18164-18165
论文作者:成霄,朱佳茜
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第26期供稿
论文发表时间:2015/10/30
标签：溶液论文; 含量论文; 高效论文; 色谱论文; 精密论文; 山楂论文; 液相论文; 《医药前沿》2015年第26期供稿论文;