陕西省咸阳市疾病预防控制中心 陕西咸阳 712000
摘要：目的 为了及时追查食物中毒发生的原因，查清致病菌污染食品的来源，为临床用药治疗提供依据。方法 根据GB789.4-2010《食品微生物学检验 沙门氏菌检验》、GB4789.10-2010《食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》、GB4789.30-2010《食品微生物学检验 单核增生李斯特菌检验》和GB4789.14-2014《食品微生物学检验 蜡样芽孢杆菌检验》[1]的方法和有关的参考资料，对可疑食品进行致病性肠道杆菌、球菌检验。结果 经培养鉴定，从食品荷叶饼夹肉及2名患者呕吐物中检出金黄色葡萄球菌，并进行了葡萄球菌肠毒素检测，3株致病菌产肠毒素检测均为阳性。结论 根据病原学检测结果及流行病学调查，这是一起由荷叶饼夹肉受金黄色葡萄球菌污染而引起的食物中毒。
关键词：金黄色葡萄球菌；肠毒素检测；食物中毒
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此，食品受其污染的机会很多，金黄色葡萄球菌能产生数中引起急性胃肠炎的蛋白质肠毒素，由其导致的食物中毒多见于春夏季节，且中毒食品种类繁多[2-5]，金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大占45%，而在我国由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占细菌性食物中毒的25%[6]。
2017年2月16日渭城区某幼儿园两个班级学生饭后出现不适，主要症状为恶心、呕吐。随后我实验室接到渭城区疾控中心送来学校餐厅食物留样及中心医院留取的病人呕吐物，经过数天培养与最后的生化鉴定，从患者呕吐物及食品荷叶饼夹肉中检出3株金黄色葡萄球菌，并进行了葡萄球菌肠毒素检测，证实该菌产生了肠毒素现将结果分析如下。
1 材料和方法
1.1 样品来源
现场采取餐厅食物留样：荷叶饼夹肉1份，约70g，南瓜粥1份，约110g患者呕吐物2份，患者肛拭子1份。
1.2检验项目
根据流行病学调查情况，将可疑样品根据GB789.4-2010《食品微生物学检验 沙门氏菌检验》、GB4789.10-2010《食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》、GB4789.30-2010《食品微生物学检验 单核增生李斯特菌检验》和GB4789.14-2014《食品微生物学检验 蜡样芽孢杆菌检验》的方法进行增菌分离鉴定。同时将食品样品的增菌液及患者的咽拭子、肛拭子标本按要求处理后提取核酸，进行分子生物学检测。
1.3培养基及试剂
缓冲蛋白胨水（BPW）、沙门显色平板、7.5%氯化钠肉汤、金黄色葡萄球菌显色平板、单核增生李斯特菌显色平板、磷酸盐缓冲液、蜡样芽孢杆菌平板（MYP）、血平板均采用青岛海博生物有限公司；Baird-Parker（BP）平板、LB增菌液、营养琼脂均采用北京路桥生物有限公司；VITEK2阳性杆菌鉴定卡、VITEK2阴性鉴定卡、VITEK2芽孢鉴定卡均采用法国梅里埃生物有限公司；金黄色葡萄球菌荧光定量PCR试剂盒采用江苏硕世生物有限公司；ELISA金黄色葡萄球菌肠毒素检测试剂盒采用德国拜发生物分析系统有限公司。
1.4检测方法
（1）增菌：①将食品荷叶饼夹肉、南瓜粥按比例称取样品分别进行沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特菌及蜡样芽孢杆菌增菌培养，将样品充分混匀，除单增菌外（单核增生李斯特菌30℃培养24小时），其它增菌液置于37℃培养24小时。②将2份呕吐物及1份肛拭子接种血平板、营养琼脂平板。
（2）分离培养：将上述增菌液分别取一接种环接种于相应的分离培养基（沙门显色平板、单增显色平板、MYP平板、金葡显色平板、BP平板、血平板）作平板划线，经37℃培养24小时后观察各平板上菌落，同时将剩余增菌液及患者咽拭子、肛拭子进行处理，用手工法提取核酸进行PCR分子生物学实验。
（3）各平板菌落生长形态：①食品荷叶饼夹肉及南瓜粥：沙门氏菌、单核增生李斯特菌、蜡样芽孢杆菌分离平板均无可疑菌落生长，食品南瓜粥中，金黄色葡萄球菌分离平板也无可疑菌落生长，故排除该菌污染食物的可能性。②食品荷叶饼夹肉：金黄色葡萄球菌显色平板上可见蓝绿色中等大小光滑湿润菌落；BP平板上可见灰黑色光滑湿润，周围有一混浊带边缘透明的小圆形菌落；血平板：圆形，菌落较大，乳黄色光滑湿润，周围有完全透明溶血圈。③呕吐物及肛拭子：2份呕吐物：血平板：圆形，菌落较大，乳黄色光滑湿润，周围有完全透明溶血圈；营养琼脂平板：乳黄色中等大小，光滑湿润的圆形菌落；1份肛拭子：血平板及营养琼脂平板均无可疑菌落生长。
（4）鉴定试验：将可疑的菌进行革兰染色、生化试验及分子生物学试验。
食品荷叶饼夹肉及2份呕吐物的金黄色葡萄球菌的鉴定试验
①生化试验见表1
②分子生物学试验：对荷叶饼夹肉的增菌液及2份呕吐物样品进行处理，用手工法提取核酸，进行了荧光定量PCR的检测，在PCR结果中也显示出食品荷叶饼夹肉中金黄色葡萄球菌结果为阳性，2份呕吐物样品结果也为阳性。
③肠毒素检测试验：由于金黄色葡萄球菌对人的治病因子主要为肠毒素，所以我实验室对分离出的金葡菌株是否产肠毒进行了检测，我们分别采用了PCR方法和ELISA方法对5种金葡菌肠毒素进行了检测，结果见表2和表3。
2 结果
根据以上各平板菌落生长形态、生化鉴定、分子生物学试验及葡萄球菌肠毒素检测试验结果，上述3株菌均鉴定为金黄色葡萄球菌，同时根据PCR方法和ELISA方法对金黄色葡萄球菌5种肠毒素进行的检测结果（见表一、表二）均显示为B型阳性，提示此次金黄色葡萄球菌引发的食物中毒中，肠毒素B型是主要的治病因子。
3 讨论
一般来说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。同时我们需要定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。
根据本次食物中毒的分析，建议必须加大卫生科普知识的宣传力度，提高人民群众卫生知识，为防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成，应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6h，并且食用前要彻底加热。同时卫生监督人员要严格执法，对于集体食堂炊事员要加强卫生知识培训和健康体检工作，严防类似食物中毒事件的发生。
参考文献：
[1]中华人民共和国国家标准；食品卫生检验方法（微生物学部分）[M]北京；中国标准出版社.2010.
[2]吴坤. 营养与食品卫生学[M].北京：人民卫生出版社.2008：427-439.
[3]吕秋月、栾明春、博志坚等一起由金黄色葡萄球菌引起的疑似食物中毒的病原学分析[J]中国卫生检验杂质.2009，19（12）：2983-2984.
[4]胡艳.一起由金黄色葡萄球菌引起食物中毒的实验室检测[J].现代预防医学.2010.37（6）：1034-1035.
[5]张丽荣、朱海明、李罗少等，一起由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的幼儿园食物中毒的病原学分析[J]中国卫生检验杂志.2009.19（2）：433-435.
[6]姜延龙、张宇、田波等，PCR技术检测金黄色葡萄球菌进展[J]食品科学.2006.27（5）：265-269.
[7]白杰，金黄色葡萄球菌引起的食物中毒案例的调查分析[J].包头医学院学报.2011年第27卷第3期：40-41.
论文作者:杨囡,张俊君,王丽娟,王莹莹,陈斌
论文发表刊物:《健康世界》2017年24期
论文发表时间:2018/1/21
标签：葡萄球菌论文; 金黄色论文; 平板论文; 毒素论文; 食物中毒论文; 食品论文; 菌落论文; 《健康世界》2017年24期论文;