杜红俊[1]2000年在《柔红霉素和Bax过表达对培养人视网膜色素上皮细胞凋亡和兔实验性增生性玻璃体视网膜病变的影响》文中研究说明目的 孔源性视网膜脱离并发的增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy，PVR)为一系列的细胞活动，即去分化细胞的形成、迁移、粘附及增殖，形成视网膜表面膜并收缩，导致视网膜脱离手术失败。PVR是一过度的创伤愈合过程，存在细胞增殖和死亡的失衡。视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial cell，RPE)是主要的增殖细胞，它的凋亡对于PVR的发生和发展有着重要的意义。已经证明，bcl-2癌基因家族和蛋白水解酶对于细胞的凋亡起着重要的调节作用。本实验主要包括以下四部分：(1)检测PVR玻璃体切除液和增殖膜标本中bak和bcl-XL基因的表达和细胞凋亡的情况，两种基因的表达和凋亡的关系；(2)用人的bax基因转染培养的人RPE，并诱导其表达；(3)观察柔红霉素和bax过表达对RPE的bak和bcl-XL基因表达、Caspase-3蛋白酶活性以及调亡的影响；(4)观察正常和经bax基因转染的RPE诱发兔眼PVR的形成能力，同时比较柔红霉素对两种PVR形成的抑制作用的差异，探讨Bax过表达对柔红霉素发挥抑制作用有无影响。 方法 (1)对12例PVR新鲜玻璃体切除液细胞和18例增殖膜标本行免疫组织化学染色，检测CK、bak和bcl-XL基因的表达，TUNEL染色检测凋亡细胞的比例；(2)通过脂质体转染人bax基因到人RPE中，G418进行筛选阳性克隆。细胞经200μg／L柔红霉素处理12h后，通过免疫细胞化学方法和TUNEL染色法检测bak和bcl-XL基因的表达和凋亡的变化。同时采用专用试剂盒，经荧光比色法检测细胞Caspase-3蛋白酶活性的变化；(3)将2.5×10~5个正常RPE和3.5×10~5个bax基因转染的RPE注入兔眼玻璃体内，观察诱发兔PVR形成的能力，同时观察10nmol柔红霉素玻璃体内注射对PVR形成的防治作用。实验结束后兔眼标本进行光镜和透射电镜观察。 结果 (1)12例PVR B级玻璃体切割液中，免疫组织化学染色显示CK、Bak和Bcl-XL阳性细胞的百分比分别为84.5±6.6(76.8％～91.4％)、
杜红俊, 王雨生, 惠延年[2]2005年在《增生性玻璃体视网膜病变的药物治疗进展》文中研究说明孔源性视网膜脱离并发的增生性玻璃体视网膜病变(proliferativevitreoretinopathy ,PVR)为一系列的细胞活动 ,即去分化细胞的形成、迁移、粘附及增殖 ,形成视网膜表面膜并收缩 ,导致视网膜脱离手术失败。临床上对于PVR的手术治疗效果尚不理想。药物治疗包括柔红霉素、5 氟尿嘧啶和维甲酸等的应用。文章就PVR药物治疗的种类和不同给药途径作一简要回顾。
王海燕[3]2001年在《金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡的影响》文中研究指明目的 孔源性视网膜脱离或视网膜脱离手术后并发的增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy，PVR），其病理改变的特征是一系列的细胞活动，主要是视网膜色素上皮细胞（retinalpigment epithelial cell，RPE）发生迁移，增生，形态变化，合成某些蛋白质和细胞外基质，形成可以收缩的膜，属于临床上的难治性疾病。已有的研究发现，PVR是一种过度的创伤愈合过程，存在着RPE的异常增殖和死亡的失衡。如何抑制RPE增殖和诱导其向凋亡方向发展，对PVR的转规有着重要的意义。金雀异黄素是一种天然的酪氨酸激酶抑制剂，可以抑制多种肿瘤细胞的增殖，并诱发细胞凋亡。本实验旨在研究金雀异黄素对RPE的增殖和凋亡的影响。 方法 通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析，观察金雀异黄素对RPE增殖的影响；通过TUNEL染色和形态学观察，研究金雀异黄素对RPE凋亡的诱导作用。 结果 （1）不同浓度的金雀异黄素可以抑制RPE增殖，在25mg/L—100mg/L的范围内呈现剂量效应关系，抑制率为12.0％—64.6％（P＜0.05）；并随时间的延长，抑制效应增强。嗜银蛋白染色结果：50mg/L金雀异黄素作用12h即有胞核内AgNORs的减少，平均数为2.7（P=0.034），25mg/L金雀异黄素作用24h后，其胞核内AgNORs的数量平均为3.9（P=0.023）。并随着剂量的增加和时间的延长，胞核内AgNORs的数量减少。 （2）不同浓度的金雀异黄素可以诱导RPE凋亡，50mg/L浓度作用24h即有TUNEL阳性的凋亡细胞出现，其凋亡细胞百分数的中位数为7.6％，48h此值为9.8％，72h此值为13.7％；75mg/L浓度作用24h 10.3％，48h 16.4％，72h 23.4％；100mg/L浓度作用24h15.4％，48h 21.2％，72h35.8％。透射电镜观察，50mg/L浓度作用于细胞，胞核内染色体出现边集，但胞膜完整，表现凋亡的早期征象，75mg/L作用可见明显的染色体凝结成块，出现凋亡小体， 第－琴至大甘川士晋值估上 一 呈现典型的凋亡特征。100m叭作用于细胞，除凋亡细胞外，部分 细胞出现胞浆的进行性溶解，有胞膜破坏现象，坏死细胞比例增 多。 结论 不同浓度的金雀异黄素作用于培养人yE，抑制RPE 的增生，有剂量效应关系和时间效应关系，随着剂量增加和时间 的延长，抑制作用越明显。一定浓度的金雀异黄素可以诱导RPE 凋亡的发生，也有一定的量效和时效关系，然而高浓度＊） 作用时坏死细胞增多。提示金雀异黄素可以为PW的机理和防治 研究提供新的出路。国内未见相关报道。
参考文献：
[1]. 柔红霉素和Bax过表达对培养人视网膜色素上皮细胞凋亡和兔实验性增生性玻璃体视网膜病变的影响[D]. 杜红俊. 第四军医大学. 2000
[2]. 增生性玻璃体视网膜病变的药物治疗进展[J]. 杜红俊, 王雨生, 惠延年. 眼科新进展. 2005
[3]. 金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡的影响[D]. 王海燕. 第四军医大学. 2001
标签：眼科与耳鼻咽喉科论文; 柔红霉素论文; 视网膜论文; 玻璃体论文; 细胞增殖论文; 上皮细胞论文; 视网膜脱离论文; 药品论文;