(1福建福州神经精神病防治院 福建 福州 350000)
（2福建协和医院 福建 福州 350000)
【摘要】 脑梗塞所致脑缺血以至脑梗死，为临床脑卒中（中风）的主要病因之一。脑缺血再灌注损伤是多数缺血性脑血管疾病的主要病理生理过程，其中主要的发病机制之一是细胞凋亡[1]。本研究是通过毛冬青甲素干预对大鼠脑缺血再灌注急性损伤的影响。
【关键词】毛冬青甲素；脑缺血；神经功能缺损；caspase-3；神经保护
【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）09-0016-02
Pubescent Holly root shell element in acute injury after ischemia-reperfusion rats Caspase 3 expression Wang Zhijian. Neuropsychiatric Hospital of Fuzhou City, Fujian Province, Fuzhou 350000, China; Zheng Guanyi. Union Hospital of Fujian Province, Fuzhou 350000, China
【Abstract】Cerebral ischemia and cerebral infarction is one of the leading causes of stroke. Cerebral ischemia reperfusion injury is the most main pathophysiological process of ischemic cerebrovascular disease, apoptosis is one of the main pathogenesis. This study is about the hairy Holly a element to ischemia-reperfusion rats acute injury of the effect of intervention.
【Key words】pubescent Holly root shell element; Cerebral ischemia; Nerve function defect; Caspase 3; Nerve protection.
脑梗塞所致脑缺血以至脑梗死，为临床脑卒中（中风）的主要病因之一。脑缺血再灌注损伤是多数缺血性脑血管疾病的主要病理生理过程，其中主要的发病机制之一是细胞凋亡[1]。毛冬青甲素（Ilexonin A）是中药毛冬青提纯的18-去氢乌索酸经琥珀酰化所得的五环三萜类化合物，近些年的研究表明其具有抗炎、抗血栓形成、改善血液循环等广泛的药理作用[2]。抗凋亡是治疗缺血性脑血管病的新靶点。本研究是通过毛冬青甲素干预对大鼠脑缺血再灌注急性损伤的影响。
1.材料与方法
1.1 实验动物及材料
线栓（直径0.26mm）购自北京沙东生物技术有限公司。选择健康的成年Sprauge-Dawley雄性大鼠30只，体重245～270g，清洁级,分假手术组、模型组、毛冬青甲素干预组（简称治疗组）3组，每组各10只。毛冬青甲素，广东省博罗先锋药业产品，规格20mg／2 mL；水合氯醛购自北京鼎国生物公司，加双蒸水配成10%。DAB显色剂，北京中杉金桥生物技术有限公司产品；兔抗大鼠caspase-3抗体购自Bioworld technology公司。
1.2 实验方法
1.2.1模型制备及神经病学评分 模型制作根据Longa法[3]进行改良。10％水合氯醛腹腔麻醉，参照Longa[3]线栓法，加以改进，自制直径为0.26mm的尼龙线栓子制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。缺血2h后拔除尼龙线10mm，造成脑缺血再灌注损伤模型。假手术组除不插入栓线外，其余手术过程皆同大脑中动脉线栓模型手术。神经病学评分采用Longa[3]5级4分法：1分～3分为模型成功标志，有呼吸困难、提前死亡及不符合标准的动物剔除。
1.2.2药物治疗 治疗组用毛冬青注射液腹腔给药，取最佳剂量40mg/kg[4]，连续7d,每天1次，末次给药1h后予造模手术,术后24h处死。假手术组和模型组注射等量生理盐水,连续7d,每天1次,末次注射生理盐水1 h后进行造模手术,术后24h处死。
1.2.3免疫组织化学 3组大鼠在术后24h取材。3组大鼠脱髓处死后，迅速取脑。石蜡切片常规脱蜡至水，用免疫组化SABC法规范操作。抗体稀释液1：100稀释caspase-3抗体，封片后显微镜观察计算caspase-3阳性细胞率。
1.3 统计学处理
所有数据采用均数±标准差(x-±s)表示， SPSS18.0软件包行单因素方差分析，组间比较采用t 检验，P<0.05表示差异有统计学意义。
2.结果
毛冬青甲素对大鼠脑组织神经功能缺损评分的影响及免疫组化检测。
各组大鼠在缺血再灌注并干预结束后皮质区脑缺血周围凋亡细胞率
（凋亡阳性细胞数/总的细胞数×100% ），#P＜0.01模型组vs假手术组，﹡P＜0.05模型组vs干预组；差异均有统计学意义。
3.讨论
急性脑缺血的中心梗死区的神经细胞以坏死为主，成为不可逆性死亡，而在梗死周围附近，细胞的丢失以凋亡为主，所以有效地减少细胞过度凋亡可以减轻缺血再灌注对阻滞器官的损伤。Caspase-3 是许多神经细胞凋亡的重要效应蛋白，也是凋亡的关键酶和执行者，亦是各种细胞凋亡蛋白酶级联反应的必经之路，故又称之为“死亡蛋白”[5]；在各种程序启动的凋亡程序中起最后枢纽的作用，促使细胞凋亡。陈根成等[6]通过毛冬青甲素对肾性高血压脑出血大鼠的实验研究结果表明其能够降低大鼠红细胞聚集性,降低血液黏度,促进毛细血管增生,改善微循环,加速血肿吸收和脑组织修复,从而改善脑出血的临床症状。
本实验结果显示，与假手术组对比，大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3的表达水平明显升高；与模型组对比，干预组的Caspase-3的表达水平减低。因此，对Caspase-3进行早期干预，有可能降低细胞凋亡，进而减轻缺血性损伤。证实了毛冬青甲素对大鼠脑缺血再灌注急性损伤后的细胞凋亡有抑制作用，可减小梗死范围，改善神经功能缺损症状。其神经保护作用可能与抑制caspase-3的表达有关。本研究为应用毛冬青甲素应对大鼠脑缺血再灌注急性损伤后细胞凋亡提供了依据，可能给广大脑缺血疾病患者提供更多的用药选择。
【参考文献】
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[2] 华海婴，李艳瑛.毛冬青甲素药理作用的研究[J].中国现代医药杂志，2006，8（11）：137-138.
[3] Longa EZ，Weinstein PR，Cansons,et al.Reveersible middle cerebral artery oeelusion without eranieetomy in rats[J].Andine P，et al.Neuropathological endpoints in experimental stroke pharmacotherapy：the importance of both early and late evaluation[J].Acta Neurochir，1994，129（1-2）：58-63.
[4] 石旺清，郑关毅.毛冬青甲素对大鼠脑缺血再灌注后GAP-43表达的影响[J]. 福建中医药，2010，41（2）：46-47.
[5] Broughton BR，Reutens DC，Sobey CG．Apoptotic mechanisms after cerebral ischemia[J]．Stroke，2009，4 0(5) :331-339．
[6] 陈根成,杨志敏,黄培新等.毛冬青甲素对实验性高血压性脑出血大鼠血压的影响[J].广州中医药大学学报,1996,13(3,4):61.
论文作者:王志坚1,郑关毅2
论文发表刊物:《医药前沿》2015年第9期供稿
论文发表时间:2015/7/21
标签：大鼠论文; 凋亡论文; 脑缺血论文; 细胞论文; 损伤论文; 模型论文; 福建论文; 《医药前沿》2015年第9期供稿论文;