沈艳
四川基因格司法鉴定所 610000
摘要：在法医医学鉴定过程中经常会遇到基因丢失的情况，导致亲子代在基因鉴定过程中出现不符合遗传规律的情况，在一定程度上增加了被错误排除的风险。由于等位基因的缺失在一定程度上和模板的DNA多态性、碱基的插入或缺失有关，因此正确识别和分析等位基因对鉴定结果会产生直接的影响。基于此，本文作者结合自身实践就TH01基因座丢失的相关问题进行相关阐述。
关键词：法医物证学；亲子鉴定；TH01基因座丢失
引言：短串联重复序列本身是由2-6个碱基序列构成，本身具有高度多态性，其在亲权鉴定过程中被广泛应用。在实践中由于多个STR基因座的联合使用，能够有效提高个体的识别性。在目前医学中常用的STR能检验出大部分的等位基因，但是仍然有部分基因出现丢失现象。 尤其在亲权鉴定过程中发现有部分的TH01基因座的基因分型出现不符合遗传学，存在丢失现象，基于此，本文作者就等位基因的缺失进行进一步分析。
1对象与方法
1.1对象
本次实验需要亲权鉴定的父子两人，且抽取父子指尖血备用。
1.2.1试剂与仪器
在本次实验中，所用的试剂为POWER PLEX，AmpFISTRIdentifiler试剂，所用的仪器为：ABI9700型PCR扩增仪，ABI 3730XL遗传分析仪（AB公司）。
1.2.2提取DNA
本次实验按照中华人民共和国公共安全行业标准GA/T383-2014《法庭科学DNA实验室检验规范》附录A中的Chelex 法对被检样本进行抽提DNA。
1.2.3STR基因座检验
按照AmpFISTRIdentifiler试剂以及Powerplex21试剂说明书对已经抽提的DNA进行PCR扩增，扩增产物用ABI3730XL遗传分析仪（AB公司）进行电泳实验，最后使用GeneMapper IDx软件对基因型进行分析和处理。
2结果
2.1STR基因座电泳分型结果
使用Powerplex21系统对父子的基因座检验，通过检验不难看出，在父子的基因座中，除了TH01基因座以外，其余的基因均符合遗传规律。在TH01基因座中，父亲的基因分型为“9”，儿子的基因分型为“7”，父亲的片段大小为94.91，儿子的基因片段大小为86.69.通过对比分析，父子的基因型相差两个序列，这和遗传规律相违背。针对这种情况，使用Identified试剂进行重复验证，通过重复验证，证实父子的基因座均是杂合子基因型，因此判断父亲的基因型为OL/9,儿子的基因型为OL/7，这符合遗传学的规律。
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2.2TH01单基因克隆测序结果
对父亲的TH01基因进行扩增，并进一步进行测序，通过TH01基因引出目的基因片段，目的基因本身的长度约为760bp，通过进一步的分析和检验，得出该基因座的基因型为9，这和上述的结果吻合。另外，由于该部分检出的测序结果在位点处有相似的结果，因此难以完成序列的测定。
因此如果亲代和子代之间的基因均是纯合子，因此需要对基因座是否出现变异的情况进行考虑，以便防止错误分型对亲权关系的判定造成影响。
一旦发现TH01基因座出现异常分型，需要使用POWER PLEX16分型系统对亲代和子代之间的基因座进行分型处理，通过处理，不难看出，该基因座在亲代和子代之间均显示为纯合子，且亲代和子代之间的基因相差2个单位。在一般情况下，TH01基因座一旦出现变异突变的步数为两步，但是由于在基因突变概率本身占到总的90%以上，两步突变的几率下降到1%。
为了进一步确定基因座是否出现推按，需要使用Identifier分型系统进行分型处理，通过分型处理，发现亲代和子代之间均是杂合子，都存在一个稀有的等位基因。该情况符合遗传学规律。
3讨论
在使用STR对基因进检测的过程中，如果发现1个或者2个基因不符合遗传学的规律，则证明基因在遗传的过程中可能会出现变异，总的来说。基因座丢失现象的研究并不是我国的首创，在我国根据相关文献证实基因座发生等位基因丢失的现象，通过相关基因座丢失的现象表面反向结合物丢失的碱基会引起结合区的碱基变异会造型引物和模板难以结合，进而导致扩增失败。也有相关文献证实，POWER PLEX16系统中存在基因丢失的现象，因此也证明了单碱基变异是引起等位基因丢失的主要原因。随着国内外相关研究的不断增多，人们对于基因座丢失现象的认识也越来越深，随着金银做引物设计的差异的不断加大，使得基因座丢失和漏检的可能性也进一步增加。在使用POWER PLEX21进行检测的时候不难看出，Identifiler分型系统能够及时纠正TH01基因座丢失现象，这与我国国内的某些报道相反。主要是因为POWER PLEX21本身和TH01基因难以有效结合，导致基因本身分型失败。但是事实上，Identifiler系统中的TH01基因座和POWER PLEX21不相同，使得基因分型较为成功。根据相关文献证实，可以使用单基因座来扩展引物，但是注意在扩展的过程中可能出现检验出正常的基因，进而在检测结果中出现完整的碱基序列，但是由于等位基因本身结构特殊，导致难以得到完整的测定结果，因此相关研究需要进一步证实。
总结：随着我国亲权鉴定数量的日益增多以及基因座检测体系的逐渐多样化的形成，能够获得的遗传信息也相应增多，因此导致STR基因座丢失现象也相应增多，这就要求在对基因座进行验证的过程中需要进行重复验证，降低漏检的可能性，及时发现稀有的等位基因，保证鉴定结果本身的准确性。
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论文作者:沈艳
论文发表刊物:《医师在线》2018年第13期
论文发表时间:2018/11/9
标签：基因论文; 碱基论文; 子代论文; 亲代论文; 现象论文; 鉴定论文; 过程中论文; 《医师在线》2018年第13期论文;