李锦[1]2002年在《异丙酚对培养的大鼠缺氧/复氧心肌细胞内游离钙的影响》文中指出目的 建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧／复氧模型，从细胞形态学、细胞搏动频率及细胞内游离钙([Ca~(2+)]_i)来观察异丙酚对缺氧／复氧心肌细胞的保护作用。 方法 用1-3天Wistar大鼠心肌细胞，正常培养6-8天后分为四组。Ⅰ组为对照组，Ⅱ、Ⅲ、 Ⅳ组为缺氧／复氧加用药组。将Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组置于95％N_2+5％CO_2，37℃单向循环罐中培养40分钟，复氧(95％O_2+5％CO_2，37℃)20分钟，造成缺氧复氧模型。Ⅲ组加入3×10~(-5)mol／L异丙酚，Ⅳ组加入3×10~(-4)mol／L异丙酚，比较对照组(Ⅰ组)和实验组(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组)的细胞形态(倒置显微镜、透射电镜观察)、细胞搏动频率，[Ca~(2+)]_i(荧光分光光度计)的变化。 结果 形态学：倒置显微镜观察，Ⅰ组、Ⅲ组细胞搏动频率未见明显变化，Ⅱ组、Ⅳ组搏动频率均显着减弱；透射电镜观察，Ⅰ组、Ⅲ组可见细胞膜、细胞器破坏不明显，而Ⅱ组、Ⅳ组细胞膜损伤严重。细胞搏动频率：Ⅰ组(101.00±11.05次／分)、Ⅲ组(89.70±7.72次／分)细胞搏动频率明显高于Ⅱ组(56.50±10.86次／分)、Ⅳ组(60.50±9.00次／分)(P＜0.05)。心肌细胞[Ca~(2+)]_i：Ⅱ组(781.64±298.20nmol／L)与Ⅰ组(188.99±30.78nmol／L)比较有显着性差异(P＜0.05)，Ⅲ组(279.11山冠穿医科大学石页几七学位论文士106.11nmol/L)与I组无显着性差异(P>0.05)，11组与W组(469.cll士145.:35nmol/L)有显着性差异(I><0.05)，m组与lvr组有显着性差异(P<0.()5)。t匕较11组与IV组间原始荧光比率基础值(;弓1.478士2.022)与加入2。。mo1CaCI:后的荧光比率值(23.572士1.108)有显着性差异 (尸<0 .05)。 结论此缺氧/复氧模型可造成细胞内钙超载，临床剂量异丙酚(I且组)和超临床剂量异丙酚(IV组)均可抑制钙超载，但使用临床剂量效果优于超临床剂量。静脉麻醉药异丙酚可以通过抑制钙超载对抗缺氧所致的心肌细胞损伤。异丙酚尚司一认为具有钙拮抗剂作用。
祖剑宇[2]2006年在《异丙酚对人血管内皮细胞缺氧复氧损伤的影响与机制探讨》文中进行了进一步梳理异丙酚对人血管内皮细胞缺氧复氧损伤的影响与机制探讨前言近二十年来，防治缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury，IRI)成为组织和器官保护研究的主要方向。Murry等于1986年首先发现反复多次的短暂缺血可以对随后发生的致死性IRI产生显着保护作用，并提出缺血预适应(ischemic precondition，IPC)的概念。随着有关预适应研究的不断进展，发现药物预适应可产生类似于IPC的保护作用，激活G蛋白耦联受体、ATP敏感性钾通道以及抑制氧自由基产生等实现，而且安全、易控受到广泛重视。迄今为止有关麻醉药预适应的研究多集中在吸入麻醉药对神经细胞和心肌细胞的作用，而静脉麻醉药作为围术期重要的临床用药，关于其对IRI的报道较少，是否有保护作用存在争议，确切机理仍不清楚。在缺血性脑卒中、心肌梗塞等许多严重疾病及危重症发生循环障碍时，首先导致血管内皮细胞(vascular endothehM cell，VEC)死亡和功能紊乱，目前认为IRI早期VEC结构和功能改变是IRI发生、发展的病理生理基础，可进一步加重组织损伤和破坏。缺氧复氧损伤可模拟机体IRI，有关异丙酚(propofol，PF)对缺氧复氧损伤VEC的作用未见报道，因此本研究拟观察临床相关浓度的PF预处理对缺氧复氧损伤人VEC凋亡的影响以及细胞内调节因子如核因子κB(NF-κB)、诱生型氮氧合酶(iNOS)、蛋白激酶C(PKC)等的表达变化，探讨其对IRI的作用及相关细胞调节机制，为围术期组织器官功能保护提供新的理论依据。实验材料1、实验试剂异丙酚(阿斯利康，英国)；Bcl-2兔抗人多克隆抗体(即用型)(Santa，美国)；caspase-3、PKC-Epsilon兔抗人多克隆抗体(Neomarker，美国)；Histostain~(TM) plus kits SP 9000免疫组织化学试剂盒、DAB染色试剂盒、生物素标记羊抗兔IgG(北京中杉生物公司)；胰蛋白酶(1∶250)(Amresco，美国)；DMEM培养基(Gibco，美国)；极品胎牛血清(天津灏洋生物)；FITC-Annexin V(宝灵曼，德国)；Furo-2、碘化丙啶(Sigma，美国)；Trizol(Invitrogen，美国)；One step RT-PCR试剂盒(Promega，美国)；PVDF蛋白印迹膜(Bio-Rad，美国)；VEGF(血管内皮细胞生长因子，本校实验病理研究室自制)；其余化学试剂均为国产分析纯2、实验仪器振荡水浴箱(GFL THERMOLAB，美国)超低温冰箱(SANYO MDF-U，日本)旋涡振荡器(VORTEX-2 GENE，美国)水平板电泳系统(BIO-RAD Sub-cell GT，美国)通用电泳仪(BIO-RAD PowerPac200，美国)台式低温高速冷冻离心机(Sigma 3K30，美国)二氧化碳细胞培养箱(KENDRO／HERAEUS，德国)细胞培养专用超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司，中国)倒置显微镜(OLYMPUS AX70，日本)水平摇床(GFL，美国)显微图像分析系统(Qlympus AX70／Coolsnapfx／MetaMorph，日本)电热恒温鼓风干燥箱(余姚TDW，中国)自动电泳凝胶成像分析仪(Alphainnotech ChemiImager 5500，美国)小型垂直电泳仪(Bio-Rad Mini-Protein，美国)半干转印仪(Bio-Rad Seimidry transfer system，美国)FACS Calibur流式细胞仪(BD，美国)自动封膜仪(江苏仪器设备公司，中国)HEIDOLPH DIAX900型匀浆机(德国)PTC-100型PCR扩增仪(USA)GLS-700D型数码凝胶扫描分析系统(上海，中国)A-200 Ds电子天平(美国)B-Brown微量泵(德国)超纯水装置(MILLIPORE MILLI-Q，美国)实验室制冰机(ZIGERA 2BE-70-35，德国)恒温振荡培养箱(GFL，德国)小型台式离心机(SIGMA 1-13，美国)PH计(WTW InoLab，德国)电动高压消毒锅(HIRAYAMA HVE-50，美国)HSS-1数字超级恒温浴槽(成都仪器厂，中国)倒置相差显微镜(OLYMPUS，日本)培养皿、培养板、培养瓶、离心管等(Corning，美国)实验方法1、人脐静脉内皮细胞的继代培养0.125％胰蛋白酶消化法分离内皮细胞，用含20％胎牛血清、100μg／ml VEGF、50U／ml肝素的DMEM培养基接种于培养皿或培养瓶中，于37℃、5％CO_2、95％空气的培养箱中静置培养，待细胞生长至融合单层时，以细胞数为1×10~5／ml传代培养，选取第3～4代细胞进行实验。培养细胞采用免疫荧光化学方法检测人Ⅷ因子相关抗原呈阳性，鉴定为人血管内皮细胞。2、缺氧复氧模型的建立细胞培养至融合状态，用99.9％高纯氮气饱和15min的低糖DMEM培养液换液，然后将细胞置于密闭良好的缺氧复氧特殊装置中，充入高纯氮气置换装置内空气造成缺氧。气体通过滤过装置流速为5L／min，5min后关闭进出气阀门，放入5％CO_2培养箱37℃培养30min。复氧时迅速打开装置，用含20％胎牛血清的含糖DMEM营养液换液后置于培养箱中正常培养，实现VEC缺氧复氧损伤，各组按设计分别于复氧2h、6h、24h和48h后将一部分爬片细胞以冷丙酮固定备用，另一部分细胞消化离心后，液氮冷冻，-70℃保存备用。3、实验分组细胞培养至融合状态，随机分为3组。正常对照组(C组)、缺氧复氧组(HR组)和缺氧复氧+异丙酚组(PR组)，HR组依复氧时间不同(2、6、24、48h)又分为4个亚组(HR2、HR6、HR24、HR48组)，PR组按PF浓度不同(25、50、100μmol／L)分为12个亚组。PR组于缺氧前30min加入含不同浓度PF(25、50、100μmol／L)的培养液，于37℃、5％CO_2培养箱内孵育30min，再进行缺氧复氧处理。4、检测指标(1)流式细胞仪FITC-Annexin V／PI双标法检测细胞凋亡(2)免疫细胞化学染色检测Bcl-2、caspase-3蛋白表达(3)逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测iNOS及NF-kappaB mRNA表达(4)免疫蛋白印迹杂交(Western-blot)检测PKC蛋白表达(5) Fura-2／AM荧光标记测定细胞内钙离子浓度5、图像分析免疫细胞化学染色图片，在光学显微镜Olympus AX70下观察，从每组中选取8-10张切片，每张切片随机选取5～7个视野，通过MetaMorph4.5图像分析软件自动测定每个视野阳性细胞的光密度(Optical density，OD)，并计算其平均值。Western Blot和RT-PCR测定电泳条带密度值，在自动电泳凝胶成像分析仪上分析结果。流式细胞仪检测采用CellQUEST分析软件分析结果。6、统计学处理实验数据采用均数±标准差((?)±s)表示，采用SPSS12.0统计软件进行单因素方差分析，方差齐性采用LSD检验，方差不齐采用Dunnett T3检验，P＜0.05差异具有显着性。结果1、PF对缺氧复氧损伤VEC凋亡的影响随着缺氧复氧时间延长，细胞损伤加重，凋亡数量增多，至24h达高峰。不同浓度异丙酚预适应明显减轻缺氧复氧引起的细胞损伤，降低细胞凋亡；50、100μmol／L PR组形态改变更小，凋亡细胞明显减少，与相应的HR组比较有显着性差异(P＜0.01)。2、PF对缺氧复氧损伤VEC Bcl-2蛋白表达的影响C组细胞Bcl-2蛋白表达较低，缺氧复氧处理后，Bcl-2表达明显下调，复氧24h达低谷，48h部分恢复。PF对缺氧复氧损伤VEC Bcl-2蛋白表达的影响呈剂量依赖关系，25μmol／L PR组Bcl-2蛋白表达与相应的HR组比较有显着差异(P＜0.01)；50、100μmol／L PR组与相应HR组比较差异显着(P＜0.01)，且与25μmol／L PR组比较有显着差异(P＜0.05)。3、PF对缺氧复氧损伤VEC caspase-3蛋白表达的影响正常培养的VEC caspase-3蛋白表达较低，复氧2h后caspase-3表达轻度增强，6h达较高水平，24h处于高峰，48h有所下降。PF对缺氧复氧损伤VEC caspase-3蛋白表达的影响呈剂量依赖关系，25μmol／L PR组caspase-3蛋白表达与相应的HR组比较有显着差异(P＜0.01)；50、100μmol／L PR组与相应的HR组比较差异显着(P＜0.01)，且与25μmol／L PR组比较有显着差异(P＜0.05)。4、PF对缺氧复氧损伤人VEC细胞内钙稳态的影响缺氧复氧损伤可引起细胞内钙浓度明显升高，PF(25、50、100μmol／L)可显着降低细胞内钙超载，各亚组与相应的HR组比较差异显着(P＜0.01)。5、PF对缺氧复氧损伤人VEC内PKC表达的影响缺氧复氧使细胞内PKC蛋白表达降低(P＜0.01)；PF活化PKC蛋白表达，显着抑制由缺氧复氧引起的PKC表达下调，与HR组比较差异显着(P＜0.01)。6、PF对缺氧复氧损伤人VEC的iNOSmRNA表达的影响C组iNOS表达较低，缺氧复氧使iNOSmRNA表达明显升高；PF抑制iNOS mRNA活化，显着降低其表达，但未达正常水平。7、PF对缺氧复氧损伤人VEC的NF-kappaB表达的影响缺氧复氧激活NF-kappaB使其mRNA含量明显升高；PF预处理抑制NF-kappaB表达，与相应HR组比较差异显着(P＜0.01)。讨论在心肺复苏、器官移植、溶栓术、冠脉搭桥术等临床实践以及抢救存在血流灌注不足的危重病人时，防治器官IRI是医生面临的严峻问题。Murry等首先发现IPC现象，能显着减少心肌损伤，提高心脏耐受性，降低梗死范围，产生心肌保护作用，是有效防治IRI的方法之一。近年来，预适应成为组织及器官保护研究热点课题，药物预适应因其更易于应用而越来越受到关注，麻醉药预适应(Anesthetic precondition，APC)是药物预适应的重要组成部分。目前有关吸入麻醉药的研究较多，认为如异氟醚、七氟醚等对缺氧和IRI有保护作用，机理主要涉及ATP敏感性钾通道、自由基、腺苷等；而关于静脉麻醉药的报道不一致，认为硫贲妥钠、咪唑安定元保护作用，氯胺酮可逆转其它药物的保护作用，异丙酚虽具有抗氧化作用，但在IRI中作用争议颇多，确切机制尚不清楚。VEC分布广泛，是血液和组织间的第一道屏障。不仅如此VEC在IRI中具有十分重要的地位，其结构和功能异常早于实质细胞出现，恢复也早于实质细胞，其受刺激可产生多种细胞因子，作用于粒细胞等炎性细胞，预后影响组织损伤的进展。PF作为一种具有抗氧化作用的新型静脉麻醉药，广泛应用于临床麻醉及ICU镇静，关于其对缺氧复氧损伤人VEC的作用尚未见报道。因此本研究采用体外培养的人脐静脉内皮细胞建立缺氧复氧损伤模型，观察临床相关浓度的PF预处理对缺氧复氧损伤VEC的影响，并探讨其可能的作用机制。结果显示PF以剂量依赖方式削弱缺氧复氧引起的VEC凋亡，调节凋亡相关因子caspase-3、Bcl-2的表达，上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达，抑制caspase-3活化。同时发现PF能有效地降低缺氧30min复氧6h时VEC中钙离子浓度的升高，同时上调蛋白激酶C的表达，提示PF可激活PKC途径，减轻缺氧复氧引起的细胞内钙超载，达到保护细胞目的。这与应用PKC激活剂能产生类似于IPC对心肌的保护作用，而PKC抑制剂则阻断这一效果的结论相一致，表明PKC、Ca~(2+)是IRI和预适应中的重要环节，是维持细胞功能的有效调节因子。应用RT-PCR方法观察核因子NF-κB及诱生型氮氧合酶(iNOS)mRNA表达的变化，结果显示异丙酚能明显降低复氧6h时二者的表达。由于iNOS能诱导细胞产生大量的NO，对NO介导的细胞损伤起关键作用，提示抑制NF-κB活化，降低iNOS的表达，在PF防止细胞凋亡中占有重要地位。本研究选取人VEC的缺氧复氧模型能更好地模拟人体IRI状态并避免在体实验中其它混杂因素干扰；采用临床相关浓度的PF可以为临床应用提供有力的参考依据；对于NF-κB、iNOS及PKC、细胞内钙浓度调节与缺氧复氧引起凋亡的观察结果从细胞分子水平探讨了PF预处理的机制，为PF用于防治IRI奠定了理论基础。但临床上应用PF是否能发挥器官保护作用尚待实践，有关的细胞内触发和调节途径仍需进一步研究。结论1、缺氧复氧损伤使促凋亡因子caspase-3表达升高，凋亡抑制因子Bcl-2表达降低，导致VEC凋亡，二者变化与缺氧复氧损伤存在一定时相关系。2、PF预处理以剂量依赖方式抑制缺氧复氧引起的VEC凋亡，上调抗凋亡蛋白Bcl-2表达，降低casepase-3表达是效应因子。3、PF能降低缺氧复氧损伤所致的细胞内钙离子浓度升高，蛋白激酶C参与其抑制细胞内钙超载，是PF发挥保护作用的细胞内信号转导调节因子。4、抑制缺氧复氧损伤导致的NF-kappaB活化，减少iNOS的生成在PF预处理的保护作用中占重要地位。
佚名[3]2004年在《作者索引》文中进行了进一步梳理Vamla B抗BACP1抗体的制备及鉴定(1):30-33 Wernig A人源性成肌细胞和肌管细胞中β-Tubulin Ⅲ的表达(13):1157-1161 A 阿明长春瑞宾+顺铂治疗非小细胞肺癌48例(8):743 结肠镜诊断大肠癌632例(11):1024 沙培林+顺铂治疗恶性胸腔积液43例(12):1133 艾国平植入贫铀片大鼠血液和肝肾功能的变化(2):182-185 吸入贫铀粉尘和/或嵌入贫铀片大鼠体内铀的分布(6):503- 506
佚名[4]2003年在《作者索引》文中研究说明第四军医大学学报(J Fourth Milit Med Unsv)2003年24卷索引AAdrian T.TINGB细胞成熟抗原BCMA在细胞内诱导NF-KB的活化(19):1729一1732CClaus H.Schroder慢性乙肝病毒感染的诊断和治疗
佚名[5]2006年在《中华麻醉学杂志2006年第26卷主题词索引》文中进行了进一步梳理说明:(1)本索引按汉语拼音字母顺序排列。(2)在汉字相同的情况下,按数字、英文字母、希文字母顾序先后排列。(3)缩略词及未译出的原文按英文字母顺序排在各(字母)部之首。(4)文题、作者后括号内数字为期号,最后为起页。
佚名[6]2002年在《作者索引》文中研究指明(按汉语拼音字母顺序排列,索引论文前3位作者)AAdrian W Gelb Development 0f anaesthesiology (15):1 345一1346艾玉峰应用带蒂皮瓣、肌皮瓣修复小腿骨外露、骨髓炎创面 (2):183 组织工程骨复合骨
佚名[7]2006年在《《解放军医学杂志》2006年(第31卷)主题词索引》文中指出(按汉语拼音字母顺序排列)数字和字母17α羟化酶/17,20裂链酶联合缺乏CYP17基因新的突变导致两姐妹17α羟化酶/17,20裂链酶联合缺乏(栗夏莲等)31(12):118418F-FDG hPET/CT显像18F-FDGhPET/CT显像在非小细胞
张抗抗[8]2009年在《瑞芬太尼对肠缺血再灌注大鼠远隔器官的影响》文中研究指明目的:通过夹闭肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)建立大鼠肠缺血再灌注(ischemia reperfusion,I/R)模型,观察肠缺血再灌注所导致的远隔器官(肺、肝、肾)组织形态学改变以及与氧自由基损伤等相关的指标变化,并探讨瑞芬太尼对远隔器官损伤的影响,为揭示其作用机理提供实验研究资料,且为其临床应用提供基础理论依据。方法:选择健康清洁级雄性Wistar大鼠24只,随机分为3组,即假手术组(S组)、肠缺血再灌注组(I/R组)和瑞芬太尼处理组(R组)。每组均以肝素(2mg/kg)行全身抗凝。S组仅分离SMA,下腔静脉微量注射泵持续输注0.9%生理盐水10ml/(kg·h)。I/R组夹闭SMA 1h,下腔静脉微量注射泵持续输注0.9%生理盐水10ml/(kg·h)。R组夹闭SMA 1h,下腔静脉微量注射泵持续输注0.9%生理盐水10ml/(kg·h),再灌注前5min将生理盐水更换为等容瑞芬太尼3μg/(kg·h)。每组于再灌注2h后下腔静脉取血4ml,离心取其上清液测定谷丙转氨酶(glutamatepyruvate transaminase,GPT/ALT)、谷草转氨酶(glutamic oxalacetic transaminase,GOT/AST)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)及血肌酐(serum creatinine,Scr);采血完毕后迅速取右肺心叶、肝尾状叶及右肾皮质部,处理后保存在液氮罐中,以待日后制作组织匀浆测定一氧化氮(nitrogen monoxidum,NO)、一氧化氮合酶(nitricoxide synthase,NOS)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA);右肺尖叶、肝左内侧叶和左肾封存于10%福尔马林液中,待苏木素-伊红(hematoxylin eosine,HE)染色后光镜下观察组织形态学变化。数据应用SPSS16.0进行统计分析处理。结果:1.肺组织病理变化:与S组相比,I/R组肺组织毛细血管扩张、充血,肺间隔明显增宽,间质中有大量的中性粒细胞浸润、局部肺泡出现不张,肺泡水肿、出血;R组病理改变明显减轻,仅有轻度毛细血管扩张、充血,肺间质轻度增宽,少量中性粒细胞浸润,无肺不张。2.I/R组肺组织NO、NOS及MDA含量明显高于S组,SOD活性降低(p<0.05);R组与I/R组相比,NO、NOS及MDA含量降低,SOD活性升高(p<0.05)。3.肝组织病理变化:与S组相比,I/R组肝细胞体积增大,高度肿胀,胞浆淡染,胞核增大、淡染,呈严重水变性,肝血窦不清;R组细胞肿胀明显减轻。4.I/R组肝组织ALT、AST及MDA含量明显,SOD活性降低(p<0.05);R组与I/R组相比,ALT、AST及MDA含量降低,SOD活性升高(p<0.05)。5.肾组织病理变化:与S组相比,I/R组肾小球及球后毛细血管明显扩张,肾小管细胞严重水肿,球后毛细血管内堆积有大量破裂的红细胞;R组无明显变化。6.I/R组肾组织BUN、Scr及MDA含量明显,SOD活性降低(p<0.05);R组与I/R组相比,BUN、Scr及MDA含量降低,SOD活性升高(p<0.05)。结论:1.成功地复制大鼠肠缺血再灌注模型并观察到肠缺血再灌注后远隔器官(肺、肝、肾)组织形态明显受损,并引起机体抗氧化能力下降、氧自由基生成增多、脂质过氧化反应增强,相应指标变化明显。2.瑞芬太尼可以明显减轻缺血再灌注所致远隔器官的损伤,其机制可能与增强机体抗氧化能力、减少氧自由基生成、减轻脂质抗氧化损伤和激动阿片受体等有关。
佚名[9]2005年在《第叁军医大学学报2005年第27卷总目次》文中进行了进一步梳理专家论坛骨组织工程的研究与开发进展(许建中)(16):1625胸心外科技术向微创和复杂两极化发展(杨康)(24):2401论着专题报道兔骨髓间充质干细胞的分离计量和生物学特点观察(周强,李起鸿,许建中)(16):1628两种从骨髓中分离人间充质干细胞方法
参考文献：
[1]. 异丙酚对培养的大鼠缺氧/复氧心肌细胞内游离钙的影响[D]. 李锦. 山西医科大学. 2002
[2]. 异丙酚对人血管内皮细胞缺氧复氧损伤的影响与机制探讨[D]. 祖剑宇. 中国医科大学. 2006
[3]. 作者索引[J]. 佚名. 第四军医大学学报. 2004
[4]. 作者索引[J]. 佚名. 第四军医大学学报. 2003
[5]. 中华麻醉学杂志2006年第26卷主题词索引[J]. 佚名. 中华麻醉学杂志. 2006
[6]. 作者索引[J]. 佚名. 第四军医大学学报. 2002
[7]. 《解放军医学杂志》2006年(第31卷)主题词索引[J]. 佚名. 解放军医学杂志. 2006
[8]. 瑞芬太尼对肠缺血再灌注大鼠远隔器官的影响[D]. 张抗抗. 天津医科大学. 2009
[9]. 第叁军医大学学报2005年第27卷总目次[J]. 佚名. 第叁军医大学学报. 2005