李进 肖静坤 汪大红
湖南师范大学附属湘东医院 湖南醴陵 412200
【摘 要】目的：探讨研究免疫学检验在中枢神经系统疾病中的应用。方法：分别选取48例中枢神经系统炎性疾病患者（研究组）及48例非中枢神经系统疾病患者（参照组），取其血清及脑脊液标本，应用琼脂糖等电聚焦法检测OCB及免疫散射比浊法计算IgG指数，并进行数据比较分析。结果：中枢神经系统炎性疾病组中，除病毒性脑炎外，其余均有脑脊液OCB阳性患者，而参照组中均为阴性。中枢神经系统疾病各组中的IgG指数均高于参照组，但仅有多发性硬化症组与参照组间的差异具有统计学意义。结论：检测患者的脑脊液OCB及IgG指数，可用于了解内源性免疫球蛋白的合成情况，其对中枢神经系统疾病的诊断很有意义。
【关键词】中枢神经系统疾病、血脑屏障、鞘内合成免疫球蛋白、寡克隆区带
中枢神经系统（Central Nervous System，CNS）内可以发生很强的免疫应答，会导致细胞和抗体介导的免疫损伤，其病原体具有多元性的特点，这是一些自身免疫神经系统疾病发生、发展的病理学基础[1]。因此脑脊髓液（cerebrospinal fluid，CSF）免疫学检验特别是其中免疫球蛋白成分及含量的检测至关重要，对某些CNS疾病的诊断、治疗和预后判断均具有重要的临床意义[2]。研究显示，血脑屏障（Blood Brain Barrier，BBB）受损，急性局灶性炎性脱髓鞘及轴索破坏，伴髓鞘再生和慢性多灶性硬化斑形成，也伴有细胞免疫介导、体液免疫参与其中，血液中的蛋白质进入脑脊液将引发患者脑脊液中蛋白质水平升高。另外由于神经系统受到抗原刺激后发生体液免疫，导致免疫球蛋白鞘内合成增加，这类免疫球蛋白在高分辨率电泳过程中出现寡克隆区带（oligoclonalbands，OCB）[3]。即IgG指数可定量反应鞘内合成的免疫球蛋白，同时OCB可定性反应鞘内免疫球蛋白的合成。本研究通过检测OCB及IgG指数，研究探讨免疫学检验在中枢神经系统疾病中的临床诊断价值，为临床提供参考。
1资料与方法
1.1一般资料选取2015年2月—2016年4月入住我院的CNS疾病患者48例（研究组），其中男性患者23名，女性患者25例，年龄为16~78岁，平均年龄为42.54岁±4.26岁；包括急性脊髓炎患者7例，视神经脊髓炎患者5例，病毒性脑炎患者6例，吉兰巴雷综合征患者10例，多发性硬化症患者15例及其他中枢神经系统炎症性疾病5例。另外选取48例非中枢神经系统炎性疾病患者（参照组），其中男性患者27名，女性患者21名，年龄为13~81岁，平均年龄为44.37岁±3.68岁；包括偏头痛患者10例，头晕和眩晕患者5例，周围神经病患者16例，肌无力患者14例及颅内静脉窦血栓患者3例。随机抽样的两组患者在性别、年龄及身体条件等方面的差异符合统计学要求（p＞0.05）。
1.2方法
1.2.1标本采集同一天采集患者的脑脊液及血清标本，并配对送检。静脉血标本需经过3000r/min离心5min，分离得血清。所有脑脊液及血清标本都需进行免疫球蛋白G含量测定，剩余标本中各收集1ml，冷冻在—20℃待检，行OCB电泳分析。
1.2.2仪器与试剂 IgG测定和白蛋白测定采用免疫散射比浊法（Turbidimetric inhibition immunoassay），仪器为德国西门子BNII系统免疫散射比浊仪，试剂、质控及校准品均由原厂家配套。脑髓液寡克隆区带及血清采用琼脂糖等电聚焦法检测，仪器为SEBIA HYDRAGEL电泳分析仪，试剂与质控均有原厂配套。
1.3测定指标
1.3.1OCB阳性率 OCB电泳分析的结果分为5型。I型血清和脑脊液中均未检出IgG寡克隆区带；II型仅在脑脊液中检出IgG寡克隆区带，属鞘内合成IgG寡克隆区带；III型脑脊液和血清中均检出了IgG寡克隆区带，脑脊液中检出更多，属鞘内合成及血脑屏障（BBB）受损共同导致的IgG寡克隆区带；IV型脑脊液及血清中检出相同数量的寡克隆区带，且成镜像分布，属于BBB受损导致的寡克隆区带；V型脑脊液和血清中均检出了单克隆区带。其中II型和III型为OCB阳性结果，其余为OCB阴性结果。
2结果
2.1质控结果
3讨论
自首次发现多发性硬化症患者脑脊液中存在OCB以来，检测OCB已经得到了广泛应用。现今，临床诊断CNS疾病主要是依靠影像学与临床分析结合，可是在病变早期，常规检查及影像学通常无法诊断。然而在CNS病变患者的脑脊液中IgG增加发生较早，所以，对患者配对的脑脊液及血清标本进行电泳分析，以检测OCB存在与否，对CNS疾病的早期诊断而言，必不可少。用琼脂糖等电聚焦法及双抗体过氧化物酶免疫标记的方法共同检测脑脊液OCB，如今已成为国际公认的判定是否存在鞘内IgG的金标准[4]。OCB是数个克隆B淋巴细胞在CNS局部产生的特异抗体，是CNS针对特定抗原刺激后发生的体液免疫后IgG的异常合成。脑脊液中IgG指标检测室反映神经系统病变的重要线索。24h内鞘内IgG合成率与IgG指数的临床意义基本一致，通常与脑脊液OCB检测联合使用，以判定是否存在IgG鞘内合成[5]。
本研究中，急性脊髓炎患者组中2例，古兰巴雷综合征患者3例，多发性硬化症患者组中13例及其他组5例的OCB阳性病例中都属于II型或III型；病毒性脑炎患者所有OCB都属于阴性。本研究中未检测出IV型阳性病例，所有非中枢神经系统炎性疾病患者都属于I型脑脊液OCB阴性。临床研究证明，多发性硬化症早期、急性期及进展期OCB阳性率均较高，活动期多发性硬化症患者的OCB阳性率也明显高于非活动期患者。
本研究中，CNS炎性疾病各组IgG指数均高于参照组，且结果显示急性脊髓炎患者组、病毒性脑炎组及吉兰巴雷综合征患者组的IgG指数与参照组间差异无统计学意义，这与之前的相关研究报道相符合，但也可能与参照组的选择及样本例数存在一定的关系。
脑脊液的IgG含量测定及OCB检测对某些CNS疾病的诊断、治疗及预后判断都具有十分重要的临床意义，在国外发达国家都已成为常规检测项目。现今，我国还处于起步阶段，应在加强临床脑脊液OCB检测同时，更应尽快建立统一方法及我国的诊断标准，并展开更多相应的多中心研究，相信一定可以取得更大的实效，并为临床医生带去更多帮助。
参考文献：
[1] 陈莎，黄永国，李长振，胡珊，艾洪武，等.中枢神经系统感染患儿免疫学检测、脑电图及影像学分析. 中华实用儿科临床杂志，2012，27（21）：1677-1678.
[2] 姜川，方旭，苏萍萍等. 中枢神经感染患者脑脊液免疫指标探讨. 中国医药科学，2015（11）：32-34.
[3] 包蕊，杜德奎. 脑脊液检测在中枢神经系统疾病中的诊断价值，科学时代，2013（1）.
[4] 胡文彬，薛本春，吴君霞，韩咏竹. 脑脊液寡克隆区带及IgG指数的检测方法临床应用与研究进展. 安徽医学，2010，31（12）：1534-1537.
[5] 孟俊，朱巍巍，彭奕冰，等. 脑脊液寡克隆区带检测联合IgG指数在中枢神经系统疾病诊断中的意义. 诊断学理论与实践，2015（4）：334-337.
论文作者:李进,肖静坤,汪大红
论文发表刊物:《中国蒙医药》2016年1月第1期
论文发表时间:2016/6/15
标签：脑脊液论文; 患者论文; 血清论文; 中枢神经论文; 免疫论文; 硬化症论文; 检出论文; 《中国蒙医药》2016年1月第1期论文;