关键词：氨苄西林；固相微萃取；顶空
[中图分类号]R927.11 [文献标识码]A [文章编号]1439-3768-（2019）-03-YS
本文将实验室合成、纯化后的Ampicillin采用固相微萃取方式，其内部残留溶剂经吸附、溶解、浓缩于萃取头涂层中，再通过顶空-气相色谱分离、检测其中甲醇和异丙醇的残留情况，为药品内残留有机溶剂检测体系构建提供可靠的参考。
1 实验部分
1.1 主要设备进和试剂
气相色谱仪（GC-2010 Plus，FID检测器，岛津）；顶空自动进样器（HS-10，岛津）；SPME装置(65μm PDMS萃取头，美国Supelco公司)；具塞顶空瓶(15 ml，安谱科学仪器公司)。
异丙醇、甲醇（色谱纯，阿拉丁）；氨苄西林标准品（>99.0%，华北制药）；氨苄西林（实验室自制）；其他试剂均为阿拉丁试剂分析纯；去离子水为实验室自制。
1.2 残留溶剂检测
1.2.1 顶空-色谱条件
顶空瓶的平衡温度：55℃；平衡时间：45min。
色谱柱：Inrtcap 624，0.25mm×30m，DF=1.4μm；柱温：60℃；气化室温度：175℃；检测器温度：175℃；载气：高纯N2流量：15ml/min；H2流量：30 mL/min；空气流量300 mL/min。
1.2.2 标准曲线测定
移液枪移取IPA和MeOH色谱纯溶液20μl，40μl，60μl，80μl，100μl定容于1000ml容量瓶，移液管移取10ml至15ml顶空瓶中，加入磁力搅拌子，盖紧旋塞并保证密封性；开启搅拌，置于55℃水浴中，PDMS萃取头恒温萃取45min；取出萃取头插入气相色谱气化室，热解吸2.5min，被萃取物（IPA/MeOH）在汽化室内解吸后，靠流动相将其导入色谱柱，完成提取、分离、浓缩、检测，气相色谱。按外标法峰面积分别折算IPA及MeOH标准溶液峰面积，对浓度线性拟合，得到标准工作曲线及方程，回归方程：MeOH Y=2.36171*C+1 R2=0.99878；IPA Y=5.95513*C-37.1 R2=0.99727。
1.2.3 样品测定
（1）Ampicillin标准品测定
精确称取Ampicillin标准品1g（称量至0.0001g）至15ml顶空瓶中，加入磁力搅拌子，移液管移入10ml去离子水，以下步骤操作同标准曲线，跟据异丙醇各自峰面积及相应的外标曲线，测得样品中有机挥发组分的含量。Ampicillin标准品共配制三组，测试其可靠度与回收率。
（2）实验室制备Ampicillin样品测定
称取Ampicillin标准品1g（精确至0.0001g）至15ml顶空瓶中，以下步骤操作同Ampicillin标准品测定，计算样品中MeOH、IPA残留。
2 结果与讨论
2.1固相微萃取条件筛选
固相微萃取技术几乎可以用于气体、液体、生物、固体等样品中各类挥发性或半挥发性物质的分析。萃取的准确性会直接影响气相残留物质的检测精准程度，因此，固相微萃取的条件选择非常重要。
2.1.1萃取温度
萃取温度对固相微萃取存在着双重作用，温度增加，可以加快待测物的分子扩散速率，有利于尽快达到平衡；温度的持续增加，平衡分配系数K将会逐步减小、涂层对待测物的吸附量降低，灵敏度受到负面影响，通过单因素试验确定最佳平衡-萃取温度。
MeOH-IPA混合标准溶液的萃取温度区间为35℃~75℃，在不同温度下观测气相出峰效果，数据见表1。综合考虑，当萃取时间一定，水浴温度55℃时，顶空-SPME萃取效果较为理想，因此选择55℃为萃取平衡温度。
表1 萃取温度对峰面积影响趋势
温度℃ 35 45 55 65 75 MeOH峰面积 13.49 17.12 41.27 35.96 24.35 IPA峰面积 18.52 20.76 63.71 61.26 42.37 2.1.2 萃取时间
萃取时间受多种因素影响，包括：萃取头的种类和膜厚、吸附能力、待测物的在基质与涂层之间的分配系数、扩散速度、基质的多少等。理论而言，分配系数小的物质需要的萃取时间长。为了提高实验的重现性，一般实验时要选择相同的萃取时间。 萃取温度确定为55℃，MeOH-IPA混合标准溶液的萃取时间范围15min~75min，由表2数据可知，45min时，MeOH-IPA混合标准溶液出峰较好。
表2 萃取时间对峰面积影响趋势
时间min 15 30 45 60 75 MeOH峰面积 19.54 24.26 55.65 48.75 33.66 IPA峰面积 35.04 59.67 65.44 63.03 53.84 2.2 标准曲线的精密度和回收率验证
Ampicillin标准品IPA浓度为0.184mg/g，甲醇浓度0.176mg/g，配制三组标准品，萃取水浴温度55℃，萃取时间45min，顶空-气相检测IPA含量，相关数据见表3。从分析角度来讲，一般RSD<2.0%，即认为精密度满足测试要求，结果判定可信。IPA的RSD为1.24，MeOH的RSD为0.99，符合要求；平均回收率在95%~105%之间，为准确度可接受的标准，IPA及MeOH平均回收率符合要求。因此可判定，使用顶空-SPME-气相的检测方法测定Ampicillin溶剂残留结果准确有效。
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表3 Ampicillin标准品验证
Ampicillin IPA（μg/g） MeOH（μg/g） m/g 标准量 测定值 RSD% 平均回收率/% 标准量 测定值 RSD% 平均回收率/% 0.9874 182 181 1.24 100.73 174 172 0.99 99.79 0.9926 183 185 175 176 1.0034 185 187 177 176 2.3 Ampicillin样品测定
对实验室制备Ampicillin进行残留溶剂含量检测，配制三组待测样品，依据1.3.3小节检测方法进行操作，所得数据见表4。
表4 实验室制备 Ampicillin溶剂残留测定
Ampicillin IPA（μg/g） MeOH（μg/g） m/g 测定值 平均值 测定值 平均值 0.9957 236 235 197 198 0.9843 227 191 1.0028 241 206 3 结论
本文将实验室合成、纯化后的Ampicillin采用固相微萃取方式，平衡萃取温度55℃，萃取时间45min，检测其中甲醇和异丙醇的残留情况。对Ampicillin标准品进行三次检测，IPA测定均值为184μg/g，RSD 1.24，平均回收率100.73%；MeOH测定均值为175μg/g，RSD 0.99，平均回收率99.79%，符合准确性标准。对实验室制备Ampicillin残留溶剂测定，IPA 235μg/g，MeOH 198μg/g。采用顶空-SPME-气相法测定Ampicillin中有机溶剂的残留量，简便快速，灵敏度高，结果准确。该方法为药品内残留有机溶剂检测体系构建提供可靠的参考。
参考文献
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论文作者:韩杨 吴勰乾 武智慧 任海燕
论文发表刊物:《药物与人》2019年3月
论文发表时间:2019/6/21
标签：标准论文; 温度论文; 色谱论文; 异丙醇论文; 回收率论文; 气相论文; 氨苄西林论文; 《药物与人》2019年3月论文;