湘潭市中心医院
【摘 要】目的：回顾性分析错配修复蛋白 MLH1、MSH2、MSH6、PMS2 在II、III期结肠癌中的表达规律及临床特征。方法：选取我院病理科确诊的结肠癌手术切除标本158例，所有患者在术前均未接受过放化疗。行免疫组化检测MLH1、MSH2、MSH6、PMS2，分为MMR缺失组（dMMR组）、MMR稳定组（pMMR组），分析两组患者在临床特征的差异。结果：158例结肠癌中，dMMR患者30例，pMMR患者138例，dMMR组患者在发病年龄<60岁，右半结肠、低分化癌的比例较pMMR组患者高，差异有统计学意义（P<0．05）；dMMR组患者，发生在女性患者、II期较pMMN组高，但差异无统计学意义（P>0．05）。结论：dMMR的结肠癌，常发生在右半结肠癌，发病年龄多小于60岁，以低分化癌多见，为预测结肠癌预后提供重要的参考依据。
【关键词】MMR；MSI；结肠癌
结直肠癌是目前常见消化道恶性肿瘤，是多种癌基因突变或抑癌基因失活累积导致基因组不稳定的结果，其中错配修复功能缺陷引起微卫星不稳定是发生的一个重要机制。错配修复系统具有识别和修复 DNA 合成期间的错配碱基的功能，通常由错配修复基因 MLH1、MSH2、MSH6 和 PMS2 编码的错配修复蛋白修正这类错误[1]。文献报道大约15％的散发性结直肠癌显示MSI，其病因通常是hMLHl基因启动子甲基化，导致错配修复蛋白不表达从而使DNA复制错误增加、微卫星不稳定而使肿瘤发生[2]。MMR基因突变可导致相应修复蛋白表达缺失，基因复制过程中的错误得不到纠正，最终导致微卫星不稳定的发生。本研究收集了我院158例结肠癌根治术患者，用免疫组化法检测MLHl、MSH2、MSH6和PMS2蛋白的表达情况，探讨DNA错配修复（DNA mismatchrepair，MMR）与Ⅱ、Ⅲ期结肠癌患者临床特征的相关性。
一、资料与方法
1入组标准
（1）经病理确诊为原发性结肠癌；（2）行结肠癌根治切除术，并依据第7版美国癌症联合委员会制定的结肠癌TNM分期标准，分期均为Ⅱ~Ⅲ期；（3）手术前未行放化疗且未接受其他抗肿瘤的治疗。
2病例收集
收集我院病理科2016年1月-2018年4月确诊结肠癌的158例患者，其中男性95例，女性63例；年龄45~73岁，平均（58.2±9.9）岁；Ⅱ期80例，Ⅲ期78 例。
3免疫组化法检测肿瘤组织中MLHl、MSH2、MSH6和PMS2蛋白的表达：
免疫组织化学染色采用全自动检测方法，所用一抗均购自丹麦Dako公司，为即用型抗体（即用型MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四种鼠抗人单克隆抗体）。按产品说明书要求进行操作切片，常规脱蜡至水，经1mmol /L EDTA（pH 8.0）抗原修复液给予高压热修复。再以H2O2（30mmol/L）孵育10 min，蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min；滴加兔血清工作液，孵育10 min后冲洗；滴加一抗，37℃孵育2 h，PBS冲洗3min X3次；滴加二抗，孵育15 min，PBS冲洗3 min×3次；DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，封片。以PBS代替一抗作为阴性对照，以正常大肠黏膜上皮表达情况作为阳性对照。
4结果判定
所有结果经过两名病理医生判读（盲法），MLHl、MSH2、MSH6和PMS2蛋白定位于细胞核，呈黄色或棕黄色染色为表达（+），不着色为缺失（-）。MLHl、MSH2、MSH6和PMS2蛋白中任意一种不表达判定为MMR缺失（dMMR），而MLHl、MSH2、MSH6和PMS2蛋白均表达则判定为MMR稳定（pMMR）[3]。
5 统计学方法
应用SPSS18.0统计软件进行数据分析，组间比较采用X 2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
二、结果
MMR蛋白表达的情况和临床病理特征：158例结肠癌患者，dMMR组患者30例（19.0%），pMMR患者组28例（81.0%）。与pMMR组患者比较，dMMR患者常见于年龄<60岁、右半结肠、低分化腺癌，差异有统计学意义（P<0.05），与性别、肿瘤分期的差异无统计学意义（P>0.05）（表1）。
表1 158例结肠癌患者的MMR状态与临床病理特征关系
三、讨论
根据2015年中国癌症统计数据显示：我国结直肠癌发病率、死亡率在全国恶性肿瘤中均位居第5位，其中新发病例37.6万，死亡病例19.1万[4]。目前TNM分期是作为主要指标来判断结肠癌患者的预后及治疗方案参考的依据，但由于肿瘤的异质性，TNM分期相同的肿瘤患者其预后及疗效可能差距甚远。结肠癌患者异质性的部分原因与肿瘤发病过程中的遗传变异有关：约85%结肠癌是由于染色体不稳定而引起的，另外大约15%的结肠癌是由于DNA错配修复功能缺失导致的广泛微卫星不稳定性所致[5]。MMR系统主要是修复在DNA复制过程中逃脱DNA聚合酶即时校读的错配碱基，以此来维持基因组的稳定性，避免细胞突变，间接抑制肿瘤的发生。MMR基因（hMLHl、hMSH2、hMSH6、hPMS2）突变或者修饰（如甲基化）可以导致MMR蛋白缺失[6]。较多研究显示免疫组织化学方法检测MMR蛋白缺失与聚合酶链反应（PCR）法检测MSI具有高度的一致性，吻合率在95％～98％[2]。由于免疫组化操作简便，故本研究选取免疫组织化学方法检测MMR来评估MSI。国内外研究显示：dMMR患者有一系列的临床病理特征：具有发病年龄较轻，女性多见，多发于右半结肠，以低分化癌多见，癌周常常伴有丰富的淋巴细胞浸润[7]。本研究也显示，在年龄<60岁、右半结肠、低分化癌患者中，dMMR较pMMR多见，有统计学意义；在女性、II期患者中，dMMR组略高，但与pMMR组相比，无统计学意义。这点与相关文献报道不一致，可能与样本量偏少，某些患者行结肠癌根治术中手术淋巴结清扫少于12个有关。此外较多的文献报道，DNA错配修复缺失与结肠癌患者的预后以及氟尿嘧啶的疗效有关[8]。根据2017年CSCO结直肠癌诊疗指南，建议对所有 II 期患者均应考虑进行错配修复蛋白（MMR）检测，MMR 蛋白缺失或 MSI-H（高度微卫星不稳定）的Ⅱ期患者可能预后较好，且不会从单药 5-FU 的辅助化疗中获益 [9]。本研究多为近几年的病例，对于不同状态的MMR患者预后及疗效的差异，还需要后续的跟踪随访来证实。总之，通过检测MMR蛋白表达情况，可以初步判断是dMMR还是pMMR结肠癌，dMMR患者具有独特的一系列临床特征，为预测肿瘤的预后和疗效提供一个重要的参考依据。
参考文献：
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论文作者:朱婷婷
论文发表刊物:《中国结合医学杂志》2018年4期
论文发表时间:2018/9/13
标签：患者论文; 结肠癌论文; 蛋白论文; 缺失论文; 统计学论文; 肿瘤论文; 免疫论文; 《中国结合医学杂志》2018年4期论文;