(安徽省第二人民医院药学部 安徽 合肥 230011)
【摘要】 目的：通过对不同来源银杏叶药材的指纹图谱和银杏叶的抗氧化活性进行研究，进一步提高银杏叶的品质评价，为其合理采收提供依据。方法：采用高效液相色谱法对多批不同产地和不同指纹周期的银杏叶药材指纹图谱进行分析，同时还可以采用化学方法对银杏叶清除超氧阴离子的能力进行测定，初步分析银杏叶抗氧化活性和指纹图谱面积之间的相关性。结果：大多数银杏叶样品与共有模式的相似度较高，银杏叶的采收期不同时，其指纹图谱的总峰面积与抗氧化活性大小一致。结论：通过对银杏叶指纹图谱和抗氧化活性进行分析可以深入了解银杏叶合理的采收时间，为其质量判定提供依据。
【关键词】 银杏叶；药材；指纹图谱；抗氧化；活性
【中图分类号】R931 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2016）01-0301-02
银杏叶具体指的是银杏的干燥叶，这种树叶具有多种药用价值和保健功能，不仅可以起到抗氧化的作用，还能够改善人体的心脑血管循环，起到延缓衰老、防止痴呆和抗血栓等多种功效，此外，对提高机体免疫力也有着重要的作用。银杏叶作为一种新型药材逐渐成为近年来人们研究的热点之一。1960年以来，国内外众多学者对银杏叶的药理和化学成分做出了临床研究，并且对临床应用进行了深层次的探讨，通过研究发现银杏叶具有治疗心脑血管等疾病的作用，于是将此药物用于药品和保健品的生产之中，甚至在生产的过程中还将一些银杏叶加工成茶叶使用。不仅如此，研究还发现银杏叶治疗多种疾病的作用与其抗氧化活性关系密切。
1.资料与方法
1.1 一般资料
本次研究分析主要用到的银杏叶是来自南方不同城市的银杏叶子，叶子的采收期在4～10月之间。用到的仪器有DAD检测器、高效液相色谱仪以及自动进样器等，还有一种发光测量仪，其型号是BPCL-1-G-C，此外，还有测量酸度的酸度计。
使用的试剂主要有甲醇、乙醇、醋酸铵以及焦性没食子酸，还有纯净水等其他试剂。
1.2 分析方法
对于银杏叶药材抗氧化活性进行分析的主要方法有两种，一种是采取指纹图谱分析的方法，另一种是抗氧化活性测定的方法。
1.2.1指纹图谱分析法的介绍 首先应该制备样本溶液，将银杏叶样本放置在60℃的储备室进行干燥处理，然后将处理好的样本粉碎，每一种样品都称取2.5克，称取样品的量一定要精确，在样品加入70%的乙醇溶液进行回流处理，提取混合溶液1升进行过滤，将所有提取的滤液合并在一起，减少滤液所受到的压力，直至所有滤液都达到浓缩状态，使用甲醇对浓缩好的滤液定容，使其达到25毫升，然后使用微孔滤膜进行过滤。
其次，制备对照品溶液，称取一定量的对照品，主要有芦丁、苷A、异银杏素和槲皮素，在这些对照品中加入甲醇50毫升，配置成溶液作为备用品。紧接着对色谱条件进行检测，对色谱柱的柱温进行分析，将其保持在30℃，检测时间为70分钟，对样品的波长和进样量进行综合性检测。
最后建立共有模式指纹图谱，并且对其进行分析，采用中药色谱指纹图谱相似度的评价系统进行适当处理。
1.2.2抗氧化活性测定介绍 银杏叶试品对碳酸缓冲液和其他物质会产生超氧阴离子的清除能力，所以需要使用化学发光法进行测定。测定完成之后配置试液，试液的配制方法主要使用碳酸缓冲体系的配置法。之后再对超氧阴离子的清除活性进行评价，在试验过程中，将各种样品稀释成不同的浓度，在样品的反应杯中加入试品溶液10毫升和邻苯三酚溶液20毫升。再加入一种混合性的溶液启动液体的反应，对最终反应的化学发光值进行记录。在样品测定过程中，每个样品的测定次数为3次，然后对清除率进行计算。对不同浓度的样品溶液在超氧阴离子的作用下清除率进行检测，可以将样品的浓度作为横坐标，超氧阴离子的清除率作为纵坐标，然后拟合量效曲线，从而建立关系式方程，对样品的清楚率进行计算。
1.2.3分析指纹图谱和抗氧化活性的相关性 通常情况下，抗氧化活性较强的样品对于超氧阴离子的清除能力越弱。在分析过程中需要对样品自由基清除率的共有峰和相对峰面积以及图谱面积之间的相关性进行分析。确定横坐标和纵坐标进行作图，使用曲线拟合的方式处理图中数据。
2.结果
通过对指纹图谱的分析，结果显示色谱峰保留时间的RSD都小于2%，其中色谱峰相对峰的面积均小于3%，从而表明该方法是一种稳定可靠的方法，一定程度上符合指纹图谱的技术要求。在色谱条件优化的情况下对不同银杏叶的指纹图谱进行分析，由于所有样品中都含有苷A，导致样品的出峰时间比较集中，峰面积相对较大，作为银杏叶中的特异成分，一般将苷A作为实验过程中的参考峰从而计算不同峰值的相对保留时间。在测定后标定了31个共有峰，其中芦丁为7号峰，苷A为17号峰，异银杏素为27号峰。从中得到结果，区域峰占据总峰面积的一半以上，是指纹图谱的主体部分。通过对样品相似度进行评价得到结果，收获时间不同的银杏叶中，除了一种银杏叶的样品与其他银杏叶样品的相似度不同之外，其他几种银杏叶样品都具有接近90%的相似度，从而说明五月之后的银杏叶在成分组成和比例合成上都有着较好的一致性，产地不同的银杏叶中，同样只有一种银杏叶和其他几种银杏叶的相似度较低之外，其他的相似度都保持在90%以上。
对银杏叶样品的抗氧化活性进行分析，得到超氧阴离子的量效变化如下表所示：
3.讨论
在对指纹图谱进行研究过程中，主要采用不同浓度和不同比例的流动相体系进行试验，其主体试剂是甲酸水溶液，通过试验发现，在流动相中加入异丙醇和另外一种甲酸水溶液对色谱峰的峰形难以起到较好的改善作用。所以最终将乙腈 - 甲酸水溶液作为备选的流动相。在研究过程中还对不同浓度甲酸对分离度的影响进行了考察，从而发现适当的提高甲酸的浓度有利于对峰形进行改善。在对样品进行考察之前选择芦丁作为主要的指标成分，原因在于芦丁是银杏叶中的一种独特药品，其本身含有黄酮苷类化合物，同时也是药品局检测出来的一种黄酮苷含量最为标准的化合物，这种化合物存在两个紫外吸收带，在实验过程中，对不同长度的黄酮苷化合物在检测波长下的指纹图谱进行比较，结果显示长度越长的黄酮苷色峰越多，其基线也是比较平稳。
结果显示，多种药材的化学成为相对稳定，相似度较高。一般情况下相似度均大于90%。只有个别的药材相似度比较低，主要原因在于银杏叶的产地和采收期有所不同，说明气候条件不同的情况下银杏叶的抗氧化成分和比例差异较大，所以需要对产地药材的质量进一步进行考察。所有银杏叶的氧化活性与芦丁、苷A等一些峰面积相对较大的峰都没有实际相关性，从而说明银杏叶的氧化性是多种药物成分共同作用的结果，所以对银杏叶质量进行控制的过程中不能仅仅以某一种成分含量作为标准进行控制。
黄铜类型的银杏叶在抗氧化活性上强于苷，同时，双黄酮清楚自由基的能力相对微弱，但是其相对峰面积较大。总之，指纹图谱中依稀区域对抗氧化活性的大小不能明确表示，需要对其进一步分解，在以后的研究过程中需要针对指纹图谱的活性进行深入研究，明确影响整体抗氧化活性因素的峰群，将其作为评价银杏叶质量标准的重点指标。
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论文作者:杨继荣,熊江磊
论文发表刊物:《医药前沿》2016年1月第1期
论文发表时间:2016/5/13
标签：银杏叶论文; 图谱论文; 指纹论文; 样品论文; 活性论文; 抗氧化论文; 色谱论文; 《医药前沿》2016年1月第1期论文;