裴笑月 胡波 孙静阳 李晓慧
大连大学附属新华医院病理科 辽宁省大连市 116021
摘要：目的 探讨两种预包埋剂对宫颈细胞块组织形态的影响及筛查非典型鳞状上皮细胞（ASC-US）的意义，预寻找一种理想的细胞预包埋剂。方法 用两种不同预包埋剂将75例TCT细胞学标本（包含60例ASC-US病例）制成细胞块，观察HE染色后的组织结构及细胞形态，并对ASC-US病例重新诊断，应用SPSS13.0软件对比分析细胞学与组织学诊断结果。结果 对照组制成细胞块后无明确的组织结构，20例ASC-US的病例仅有5例能明确诊断为CINⅠ；琼脂糖组制成细胞块后着色佳，保留了组织结构特点，20例ASC-US的病例有14例可以诊断为CINⅠ~Ⅱ，与对照组比较有统计学意义（P=0.004）；蛋清组制成细胞块后存在细胞丢失现象，20例ASC-US病例有9例诊断为CINⅠ，与对照组比较无统计学意义（P=0.185）。结论 琼脂糖组预包埋效果优于蛋清组及对照组，对ASC-US的筛查有一定的意义，是一种较为理想的细胞预包埋剂。
关键词：细胞块；预包埋；ASC-US
Abstract Objective To observe tissue morphology of two kinds of cervical mucous cell block and access the diagnostic significance of ASC-US.Methods Selected 75 TCT cases and produced cell block using two different pre-embedding medium.Cell block were observed organizational structure and cell morphology after HE staining and re-diagnosis the 60 ASC-US cases.Results Control group had no clear organizational structure，five ASC-US cases were diagnosed CINⅠ.Agarose group had better organizational structure，fourteen ASC-US cases were diagnosed as CINⅠ~Ⅱ，there was statistical significance compared with the control group（P=0.004）.Egg group had cell losing，night ASC-US cases were diagnosed as CINⅠ，there wasn’t statistical significance compared with the control group（P=0.185）.Conclusion Agarose group was better than egg and control group in pre-embedded effect，and had a certain diagnostic significance of ASC-US.
Key words：Cell block，Pre-embedded，ASC-US
TCT是临床上常见的排查宫颈粘膜细胞恶变的一种方法，但它不易于观察组织结构及常存在细胞丢失、负压吸附不良等现象。2004年Akpolat等[1]就报道细胞块制备技术可以填补细胞学的局限性和不确定性，特别对于存在不能明确诊断意义非典型鳞状上皮细胞（ASC-US）的病例，制备细胞块镜下观察并进行免疫组化染色可以获得更多用于诊断的信息，甚至可以将其明确区分为反应性病变还是CIN。我们通过收集病理诊断后的TCT保存液中剩余细胞标本，用两种不同预包埋剂制备细胞块，试比较两种预包埋剂对HE染色效果的影响及筛查非典型鳞状上皮细胞的意义。
1.材料与方法
1.1 材料
收集我院2012年~2014年临床制成细胞膜片后TCT保存液中剩余细胞样本共75例（保存液不少于5ml），其中ASC-US病例60例。年龄23-65岁，平均年龄42岁。
1.2 方法
1.2.1 细胞块制备：①将细胞样本按年龄随机分为三组，每组25例，各包含20例ASC-US病例，5例宫颈炎病例；一组无预包埋剂（对照组），一组预包埋剂为70℃5%琼脂糖，一组预包埋剂为蛋清（用生理盐水稀释成0.1%浓度）；②将75例样本TCT保存液中剩余细胞移至一次性试管，1500转/min离心10min，弃上清；③所有样本加入4%福尔马林固定60min，1500转/min离心10min，弃上清；④对照组直接用滤纸包裹包埋；⑤琼脂糖组细胞样本移至载玻片上，用滤纸吸附掉多余的水分；再重悬70℃5%琼脂糖（可在琼脂糖中加入伊红用于标记），将细胞与琼脂糖轻轻吹打混匀后自然降成常温；⑥蛋清组加入0.1%的蛋清混匀后再加入与其5倍体积的80%乙醇凝固3~5min，之后离心弃上清；⑦所有标本常规脱水，石蜡包埋，观察HE染色效果及对ASC-US病例重新诊断。
1.2.2 结果的判定 HE染色效果以常规石蜡包埋-HE染色切片质量为标准，细胞学诊断以TBS阴道/宫颈细胞学诊断系统为标准，细胞块的组织学诊断以宫颈活检组织病理学诊断为标准。
1.2.3 统计方法：SPSS13.0统计学软件，进行校正χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
2.1对照组 对照组制成的细胞块组织较散，不利于包埋，细胞易丢失。HE染色镜下观察发现细胞稀少，仅见单个鳞状细胞，无明确的组织结构，着色佳，色彩明亮（图1）。20例ASC-US的病例重新诊断有15例诊断为炎症，5例诊断为CINⅠ（表1）。
2.2琼脂糖组 琼脂糖可使细胞较好的固定成一个整体，在制作细胞块过程中无组织丢失及破碎现象。与对照组比较在一定程度上保留了细胞结构特点，可见鳞状细胞巢、细胞极像、角化珠等结构，甚至可见挖空样细胞（图2）。20例ASC-US的病例有6例诊断为炎症，14例诊断为CINⅠ~Ⅱ（图3），与对照组比较有统计学意义（P=0.004）（表1）。
2.3 蛋清组 细胞块在包埋过程中易碎，有造成组织丢失现象。与对照组比较组织染色较好，颜色分明，可见成团的鳞状细胞，但无明确组织结果，存在细胞皱缩、裂隙现象（图4）。20例ASC-US病例有11例诊断为炎症，9例诊断为CINⅠ，与对照组比较无统计学意义（P=0.185）（表1）。
3.讨论
宫颈细胞块制备是目前临床上常用的一种细胞学技术，Liu等[2]的研究表明对细胞学进行特染及免疫组化染色，能获得与组织学同等的诊断水平，因此找到一种性能优越的预包埋剂对细胞块的制备具有一定的意义。非典型鳞状上皮细胞（ASC-US）是一种模糊的、涵盖范围广泛的诊断术语，它可能伴随CINⅡ或CINⅢ，甚至是鳞癌、腺癌[3]。将TCT保存液中剩余细胞标本制成细胞块，可以收集到更多的诊断信息，甚至可以将ASC-US明确区分为反应性病变还是CIN，降低了病理诊断的不明确性和模糊性。
本实验用无预包埋剂制成的细胞块做对照组，在包埋过程，由于缺少预包埋剂，一定程度上造成了细胞的丢失。HE染色后发现虽然组织染色效果较好，但细胞稀少、仅见散在的鳞状上皮细胞，无明确组织结构，仅有5例ASC-US诊断为CINⅠ。说明细胞组织较碎，不易成一整体，需要一种优良的预包埋剂对其进行支撑及固定。
琼脂糖[4]是从海藻类提取的一种复杂多糖，在凝固状态下可形成含有网状空隙的固体，是临床病理上常用的一种细胞支撑剂。本实验发现高熔点的琼脂糖具有很好的通透性和支撑性，对细胞起到良好的保护作用，在HE染色效果上与对照组比较无明显差异；并在一定程度上保持了组织、细胞的结构，有利于镜下进行组织学诊断。用琼脂糖预包埋的20例ASC-US病例，有14例组织学诊断为CINⅠ~Ⅱ，与对照组比较有统计学意义。说明用琼脂糖做预包埋剂制备的细胞块能够保持组织的结构和形态，可用于筛查ASC-US，提高细胞学诊断的准确性，甚至可用于进行特染和免疫组化染色[5]。
蛋清中因含有的大量蛋白质，遇乙醇凝固成固体后可形成蛋白支架[6]。本实验发现蛋清做预包埋剂，通透性较好，但存在细胞丢失。HE染色后细胞有皱缩，裂隙等现象，分析原因很可能与残留的乙醇有关。该组20例诊断为ASC-US的病例在制成细胞块后9例诊断为CINⅠ，与对照组比较无统计学意义。分析原因可能是因为在制备细胞块过程中有丢失现象，同时镜下细胞形态不良，结构不佳，不利于做出准确的诊断。蛋清做预包埋剂制备细胞块对ASC-US的诊断意义不清，需要更多的样本和研究用以明确，同时存留的异性蛋白质成分也极有可能影响特染及免疫组化染色结果。
尽管我们的研究说明琼脂糖的预包埋效果优于蛋清和无预包埋剂，对筛查ASC-US有一定的意义，是一种较为理想的细胞预包埋剂，但由于样本数目较少，有待于进一步扩大样本研究。
参考文献：
[1]Akpolat I，Smith D A，Ramzy I，et al.The utility of p16INK4a and Ki67 staining on cell blocks prepared from residual thin-layer cervicovaginal material[J].cancer，2004，102（3）：142-149.
[2]Liu H，Shi J，Wilkerson M，et al.Immunohistochemical detection of P16INK4a in liquid-based cytology specimens on cell block section[J].Cancer，2007，111（2）：74-82.
[3]蒋文化，吴毅林，刘一智，等.细胞块上检测P16、HPV16用于筛查ASCUS中高度宫颈上皮内瘤变的临床探讨[J].海南医学，2008，19（9）：15-18.
[4]曾晓蓓，张立新，甄亚平，等.制备组织石蜡切片琼脂预包埋法的应用性探讨[J].实验技术与管理，2008，25（12）：52-53，57.
[5]包磊，任丽芳，蔡红光，等.细胞块免疫化学技术在宫颈癌前病变筛查中的应用价值[J].浙江医学，2011，33（12）：1783-1786.
[6]王永生，李玉红，任玉波.介绍一种新的细胞块制作方法[J].临床与实验病理学杂志，2006，2：22（1）：99.
基金项目：辽宁省教育厅高等学校科研项目（L 2010022）
论文作者:裴笑月,胡波,孙静阳,李晓慧
论文发表刊物:《健康世界》2015年4期供稿
论文发表时间:2015/10/26
标签：细胞论文; 琼脂论文; 病例论文; 对照组论文; 蛋清论文; 细胞学论文; 意义论文; 《健康世界》2015年4期供稿论文;