李文君[1]2002年在《具C1q抑制活性C1q结合短肽的研究》文中研究表明补体系统在机体抗感染第一线防御中起重要作用，另一方面，补体异常(包括程度和部位)活化也参与许多疾病的发生和发展。因此，抗补体治疗一直是补体学研究中的重要领域之一。人们先后尝试过许多抑制补体激活的途径，但都存在或多或少的问题。目前的焦点集中在新一代基因工程补体调节蛋白(complement regulation protein，CRP)的研制，但难度很大。本研究另辟蹊径，以补体经典激活途径始动分子C1q为靶标，采用噬菌体肽库技术，亲和筛选能与C1q结合的噬菌体克隆，研制可抑制补体激活的C1q模拟短肽。 我们用IgG-Sepharose 4B亲和层析将C1q与C1r_2C1s_2分离，然后以DEAE-Sephacel离子交换层析将C1r和C1s分离，用C1q McAb-Sepharose 4B亲和层析将C1q进一步纯化，在分离C1r和C1s的整个过程中加入蛋白水解酶抑制剂PMSF和NPGB，并控制温度在4℃、pH6.1、无二价阳离子的条件下，得到高度纯化的C1q和酶原形式C1r和C1s。然后，采用噬菌体肽库技术，以C1q为钓饵蛋白，从12肽库和环7肽库中亲和筛选能与C1q结合的噬菌体克隆，经ELISA、U937细胞配体结合抑制试验、AIgG竞争抑制试验及DNA测序，获得了9个具C1q抑制活性克隆的DNA序列，其相应的氨基酸序列为：WYEGPFTLYTWP、HWDPFSLSAYFP、LTQHNSPFFLLP、TSNPFFLWYPQP、QTPFQLW、NPFNWTS、SPFXLTS、FLTWLDP、FSTFLYP，它们可能模拟C1qR和／或IgG的C1q结合表位并抑制C1q的活性。这些结果，为研制新型肽类药物进行抗补体治疗奠定了基础。
谭艳[2]2004年在《具C1q抑制活性C1q结合十二肽的研究》文中指出补体系统在抵抗微生物感染的天然免疫防御中起着重要作用，然而，补体异常(包括程度和部位)活化也参与许多疾病的发生和发展。临床资料已证明许多疾病均与补体介导的炎症有关。因此，抗补体治疗一直是补体学研究中的重要领域之一。人们先后尝试了许多抑制补体激活的方法，但迄今尚无真正能够应用于临床的抗补体药物。 本课题组另辟蹊径，选择补体经典激活途径始动分子C1q为靶标，利用噬菌体肽库技术，研究可抑制补体激活的C1qR模拟肽。以C1q为钓饵蛋白，亲和筛选噬菌体线性十二肽库并经初步鉴定，获得一批结合C1q的噬菌体克隆。本实验对之进一步研究，包括以下叁个部分。 一、C1q结合性噬菌体克隆的系统鉴定 采用U937细胞配体结合抑制实验和AIgG竞争抑制实验，从结合C1q的噬菌体克隆中，筛选到14个强阳性克隆。从其展示肽DNA测序结果推导氨基酸顺序，得到9个序列(2个相同序列，4个没有测出)：HWDPFSLSAYFP、WTPVRTNPFLLH、NGHLFSLSAYFP、RTQRNSPFFLCP、SPAFHPEHMGRG、SRAFHPFYRGRA、WYEGPFTLQTWP、LTQHNSPFFLLP和TSNPFFLWYPQP。 二、合成肽及其BSA偶联物的活性研究 从上述9个序列中挑选抑制活性较高的5个序列指导人工合成短肽，一部分合成肽与BSA偶联，分别采用U937细胞配体结合抑制试验、AIgG竞争抑制试验、CH50抑制试验测试其生物学活性。结果显示，游离的合成肽对C1q的结合活性和溶血活性几无影响，而偶联肽对C1q与U937细胞表面受体、AIgG的结合以及C1q介导的溶血均有抑制作用，表明这5个C1qR模拟肽能抑制C1q与免疫复合物结合，从而阻断补体经典途径的激活。叁、合成肤的改建及活性鉴定根据前两部分实验结果，我们选择短肤短肤a的序列为HWDPFSLSAY下Pa加以改建并进一步研究。设计作如下改建:a1:。G.GGGHYVDPFSLSAYFPSHS，a2:以期获得结构稳定且具补体抑制活性的短肤。人工合成短肤后，鉴定了合成肤al的活性，结果显示al对clq与U937细胞表面受体、AlgG的结合以及clq介导的溶血均有一定程度的抑制作用，表明线性肤经过再设计，可能恢复了其在噬菌体颗粒表面的结构，因而重新获得了Clq抑制活性。 我们筛选、鉴定了一些可抑制补体经典途径激活的ClqR模拟短肤，它们对于补体异常激活有关疾病的治疗具有潜在应用价值，但尚需进一步深入研究，才可能使之发展成为有效的小分子补体抑制剂。
胡静[3]2006年在《具C1q抑制活性的C1q结合环七肽的研究》文中提出补体系统是天然免疫的重要组成部分，在机体免疫防御、免疫调节中起重要作用。然而，补体的异常活化也参与许多疾病的发生和发展，因此抗补体治疗一直是补体学研究中的重要领域之一。补体级联反应中的多个环节都可作为抗补体治疗的靶点。C1q不仅是补体经典途径的始动识别因子，它还能与多种配基相互作用，产生多种生物功能，其中与免疫复合物(immune complex，IC)及C1q受体(C1q receptor，C1qR)的结合所引发的后续反应就参与多种疾病中补体介导的组织损伤。我们设想，选择性抑制C1q与IC及C1qR的结合，可能有效阻断补体异常激活介导的组织损伤。 本研究中，我们以C1q为靶标筛选噬菌体展示环七肽库，获得一批结合C1q并具C1q抑制活性的噬菌体克隆，然后根据噬菌体展示肽DNA序列人工合成短肽并研究合成短肽及其BSA偶联物的活性。 一、C1q结合性噬菌体克隆的筛选与鉴定 以人C1q为钓饵筛选噬菌体环七肽库，经C1q结合实验、U937细胞C1qR结合抑制实验、多聚IgG(aggregated immunoglobulin G，AIgG)竞争抑制实验鉴定噬菌体克隆，获得一批结合C1q并具C1q抑制活性的噬菌体克隆，从其展示肽DNA测序结果推导氨基酸顺序，得到8个序列：CKKSGKPKC、CFNPFRLDC、CWDLFLFPC，CSPFFLTPC、CSPFHLEPC、CWGNPFFLC、CNNPFTLLC和CSPFFWYEC。
参考文献：
[1]. 具C1q抑制活性C1q结合短肽的研究[D]. 李文君. 第一军医大学. 2002
[2]. 具C1q抑制活性C1q结合十二肽的研究[D]. 谭艳. 第一军医大学. 2004
[3]. 具C1q抑制活性的C1q结合环七肽的研究[D]. 胡静. 第一军医大学. 2006