高效液相法测定返顾马先蒿中毛蕊花糖苷的含量论文_南丁 乌日娜

(内蒙古阿拉善盟食品药品检验研究中心,内蒙古 阿拉善盟 750306)

【摘 要】目的:建立测定返顾马先蒿中毛蕊花糖苷含量的方法。方法:高效液相法 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(SHIMADZU,Shim-pack VP-ODS 5μm 4.6mmI.D.×250mm);以乙腈-0.1%磷酸溶液(16.5:83.5)为流动相;流速:1.0ml/min。理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。结果:结果表明毛蕊花糖苷在21.44~1286.40ng范围内呈良好的线性关系,线性回归方程为Y=0.000608765X+1.67921,r=0.9999,回收率为100.42%,RSD为1.2%。结论:该方法简便、灵敏、准确,可用于测定返顾马先蒿中毛蕊花糖苷的含量。

【关键词】高效液相法;返顾马先蒿;毛蕊花糖苷;含量

[ 中图分类号 ]R2[ 文献标号 ]A[ 文章编号 ]2095-7165(2018)18-0006-02

引 言

本品为玄参科植物返顾马先蒿[1]Pedicularis resupinata L.的干燥地上部分。分布于我国东北、华北、山东、安徽、山西、甘肃、四川、贵州;欧洲、前苏联西伯利亚和远东地区,蒙古、朝鲜、日本也有分布,本品为蒙医常用药材,具有拢敛扩散之毒,清胃火,止泻的功能。用于眼花,胃胀,痧症,肉毒症。

1.仪器、试剂与试药

1.1 仪器:高效液相色谱仪为岛津LC-20A、LC-2010;二极管阵列检测器、紫外检测器;色谱数据工作站为LC-solution。

1.2 试剂与试药 乙腈为色谱纯,其他均为分析纯试剂。毛蕊花糖苷对照品(中国药品生物制品检定所)供含量测定用,批号为111530-200404、含量以94.8%计,批号为111530-201007。

2.溶液的制备

2.1 对照品溶液的制备:精密称取毛蕊花糖苷对照品2.144mg,置100ml量瓶中,加流动相(乙腈-0.1%磷酸溶液(16.5∶83.5))溶解并稀释至刻度,即得(浓度为:21.44μg/ml)。

2.2 供试品溶液的制备:取本品粗粉约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇100ml,称定重量,加热回流30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25ml,减压回收溶剂近干,残渣用流动相溶解,转移至25ml量瓶中,加流动相至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

3.方法学考察

3.1 色谱条件

色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(SHIMADZU,Shim-pack VP-ODS 5μm 4.6mmI.D.×250mm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(16.5∶83.5);流速:1.0ml/min;理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。

3.2 提取方法的考察

供试品溶液的制备采用甲醇超声提取30分钟、60分钟、90分钟、甲醇加热回流提取30分钟、60分钟、90分钟提取六种方法比较。结果见表1(未按干燥品计算)

表1 提取方法考察结果

供试品中毛蕊花糖苷HPLC图谱

图1 专属性考察结果图谱

3.4线性关系考察

取“2.1”项下对照品溶液(浓度为:21.44μg/ml),精密吸取上述对照品溶液1.0μl、5.0μl、10.0μl、20.0μl、40.0μl、60.0μl注入高效液相色谱仪,记录峰面积,与进样量做线性回归。结果见表 2

表2 线性关系考察结果

3.7稳定性试验

取同一供试品溶液,分别在放置0小时、2小时、4小时、6小时、10小时、12小时。注入液相色谱仪,记录峰面积值。结果见表5

表5 返顾马先蒿中毛蕊花糖苷含量测定稳定性试验

 

结果显示:供试品溶液在室温放置12小时,峰面积无显著变化,表明毛蕊花糖苷溶液在12小时内性质稳定。

4.讨论

4.1流动相的选择

参照《中国药典》2015年版一部地黄项下毛蕊花糖苷含量测定方法。以乙腈-0.1 醋酸(16∶84)作为本品毛蕊花糖苷含量测定的流动相并进行了系统适用性考察,色谱峰纯度及分离度不理想;以乙腈-0.1%磷酸溶液(15.5∶84.5)作为本品毛蕊花糖苷含量测定的流动相并进行了系统适用性考察,色谱峰纯度及分离度不理想;摸索乙腈-0.1%磷酸(16.5∶83.5)作为本品毛蕊花糖苷含量测定的流动相并进行了系统适用性考察,色谱峰纯度及分离度能够满足实验要求故采用乙腈-0.1磷酸(16.5∶83.5)作为测定本品毛蕊花糖苷的流动相。

4.2测定波长的选择

精密吸取毛蕊花糖苷对照品溶液、供试品溶液各20μl注入液相色谱仪。毛蕊花糖苷对照品色谱峰峰纯度好,紫外光谱最大吸收为330nm;供试品溶液中毛蕊花糖苷色谱峰保留时间与毛蕊花糖苷对照品一致,峰纯度及分离度好,紫外光谱与毛蕊花糖苷对照品一致,在330nm处有最大吸收。通过以上试验以及参照《中国药典》2015年版一部地黄含量测定项下的有关色谱条件与系统适用性试验,最终确定检测波长为334nm。结果见图3

图3 返顾马先蒿中毛蕊花糖苷光谱图

参考文献:

[1]卫生部药典委员会.《中华人民共和国卫生部药品标准》蒙药(分册)

[2]国家药典委员会编.《中国药典》2015年版一部.中国医药科技出版社

论文作者:南丁 乌日娜

论文发表刊物: 《医师在线》2018年9月18期

论文发表时间:2019/3/14

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