李文平[1]1999年在《抗人纤维蛋白单链抗体的人源化及其链亲和素融合蛋白的研究》文中进行了进一步梳理抗人纤维蛋白单链抗体scFv-8E5能特异性识别人纤维蛋白β链N端7肽，在血栓的定位诊断和导向溶栓治疗等方面有很好的应用前景。但鼠源性单抗用于临床的最大障碍是其高免疫原性，为了降低人抗鼠抗体反应，对scFv-8E5的重链和轻链可变区进行了人源化改造。从人免疫球蛋白基因数据库中挑选到与鼠源scFv-8E5重链(VH-8E5)同源性73.0％的人源免疫球蛋白HUMHCH109重链(VH)序列，作为人源化改造VH-8E5的框架；与其轻链(VL-8E5)同源性76.3％的人源免疫球蛋白KLC400轻链(VL)序列，作为人源化改造VL-8E5的框架。人工合成人源化VH-8E5和VL-8E5片段，用DNA连接酶连接成完整的人源化VH-8E5和VL-8E5，构建表达载体pOPE101-huVH-8E5、pOPE101-huVL-8E5和pOPE101-huscFv-8E5。转化JM109后用IPTG诱导表达。经聚丙烯酰胺电泳和ELISA证明表达产物分子量30KDa左右，人源化重链和人源化轻链对scFv结合人纤维蛋白能力均无明显影响，人源化scFv-8E5与亲本抗体scFv-8E5活性无明显差别，表明鼠源scFv-8E5的人源化改造获得成功。人源化scFv—8E5表达产量为转化菌总蛋白的9.8％。表达产物少数为周质腔可溶性蛋白，多数为包涵体。无论是可溶性的蛋白产物或从包涵体中回收并复性的蛋白产物均有结合人纤维蛋白的功能。 为了进一步探索人源化scFv—8E5在体内血栓显影中的应用，构建人源化scFv-8E5基因与链亲和素核心蛋白基因的重组表达载体pSTE2-huscFv-8E5，制备了人源化抗人纤维蛋白单链抗体分子scFv-8E5与链亲和素融合蛋白(huscFv-8E5∶∶core-streptavidin)。链亲和素基因拼接在人源化scFv-8E5 cDNA的3’端，融合蛋白单体分子量约45KDa。人源化
李文平, 许静, 隋建华, 徐冬, 宋增璇[2]2000年在《人源化抗人纤维蛋白单链抗体-链亲和素融合蛋白的表达和功能》文中研究指明目的 探索人源化抗人纤维蛋白单链抗体 链亲和素融合蛋白的表达和功能。方法 构建人源化抗人纤维蛋白单链抗体 (ScFv 8E5 )基因与链亲和素基因的重组表达载体 ,制备融合蛋白 ,ELISA观察其稳定性、与人及不同动物纤维蛋白的反应。结果 人源化融合蛋白可特异性识别人、大鼠、豚鼠纤维蛋白 ,同时有生物素的结合位点 ,且稳定性好 ,可耐受至少两周 4℃保存 ,数次反复冻融或一定时间的 37℃孵育。结论 此人源化融合蛋白适用于大鼠及豚鼠血栓病模型 ,是作临床前研究的有用材料。
参考文献：
[1]. 抗人纤维蛋白单链抗体的人源化及其链亲和素融合蛋白的研究[D]. 李文平. 中国协和医科大学. 1999
[2]. 人源化抗人纤维蛋白单链抗体-链亲和素融合蛋白的表达和功能[J]. 李文平, 许静, 隋建华, 徐冬, 宋增璇. 中华微生物学和免疫学杂志. 2000