1.安阳市肿瘤医院 安阳 455000；2.郑州大学第一附属医院 郑州 450052
摘要：目的 探讨Ki-67的表达与胃癌临床病理特征及预后的关系。方法 采用免疫组织化学技术，检测326例胃腺癌组织及相应326例正常胃粘膜组织中Ki-67蛋白的表达情况；采用Western blotting实验检测随机选取10例胃腺癌组织和相对应的正常胃粘膜组织中Ki-67 蛋白的表达情况，应用χ2检验、Kaplan-Meier生存分析及COX 回归分析分析其与患者临床病理特征及预后的关系。结果 胃癌组织中Ki-67蛋白明显高于正常胃粘膜组织（P < 0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示Ki-67蛋白表达与胃癌患者的预后密切相关（χ2=8.086，P=0.005），COX 回归分析显示Ki-67为胃癌患者预后的独立因素（P = 0.002）。结论 Ki-67的表达与胃癌预后密切相关，为胃癌患者预后的独立因素。
关键词：胃癌；Ki-67；临床病理特征；预后
胃癌（gastric cancer，GC）为消化道肿瘤中发病率最高的恶性肿瘤。全世界每年胃癌新发病例数约为100万，约占整个恶性肿瘤新发病例总数的8%，位居第4位。每年约有70多万人死于胃癌，死亡率位居第2位。
资料和方法
1.1组织标本来源
选取收集2005年3月~2010年3月于安阳市肿瘤医院接受胃癌根治术治疗的326例胃癌患者的手术标本，入组患者术前均排除远处转移，均未接受放化疗、免疫治疗，术后均经过病理确诊。标本应用多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，连续切片，分别用于HE染色及免疫组织化学染色。新鲜实验标本保存于液氮中，用于Western blotting实验。正常胃粘膜组织：取自手术标本中距癌组织边缘5cm以上的手术切缘，均经病理学证实为正常的胃粘膜组织。
1.2 实验方法
1.2.1 免疫组化
1.2.1.1 方法 免疫组织化学方法采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法技术（streptavidin-perosidase，SP技术），染色步骤严格按照试剂盒说明书进行；
1.2.1.2 结果判定 采用双评分半定量积分法，对Ki-67的免疫组化结果进行分析。以出现棕黄色或棕色颗粒的细胞作为阳性细胞，Ki-67抗原阳性表达为细胞核呈棕褐色颗粒，在高倍镜下（400倍高倍镜下视野），随机选取5个视野（每个视野计数的细胞数不少于200个）。
2 结果
2.1 Ki-67蛋白在胃癌组织与正常胃粘膜组织中的表达
应用免疫组织化学技术（SP）检测326例胃癌及相应的正常胃黏膜组织中Ki-67蛋白的表达。结果显示，Ki-67蛋白主要表达于癌细胞胞核，呈棕黄色颗粒（图1）。在326例胃癌组织中，有204例Ki-67 表达阳性，阳性表达率为62.57%。显著高于正常胃黏膜组织（11.96%），胃癌组与正常胃粘膜组Ki-67 的阳性表达率有显著性差异（χ2 =178.602，P=0.000）。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆
2.2 Western blotting胃癌组织及正常胃黏膜中ki-67蛋白的表达
应用Western blotting技术对随机选取的10例胃癌组织及相应的10例正常胃粘膜组织中的ki-67 蛋白的表达水平进行检测。结果显示，随机选取的10例胃癌组织中ki-67 蛋白的表达显著高于相对应的正常胃粘膜组织，差异有统计学意义（P < 0.05）。
2.3 Ki-67与胃癌临床病理学的关系
应用SPSS17.0统计软件分别从性别、年龄、TNM 分期、组织分化程度和有无淋巴结转移等方面分析Ki-67蛋白表达与胃癌临床病理学之间的关系，进一步研究Ki-67蛋白在胃癌发生发展过程中的可能作用。结果显示，Ki-67蛋白的表达与胃癌患者的性别、年龄、TNM分期无关（P > 0.05），但与胃癌患者的组组织分化程度及淋巴结转移均密切相关（P < 0.05）。
2.4 Ki-67 蛋白表达与胃癌病人预后之间的关系
2.4.1 预后单因素分析 应用Kaplan-Meier生存曲线分析Ki-67蛋白表达与胃癌患者存活时间之间的关系。入组的326例胃癌患者均具有完整的随访资料，术后第1年每3个月随访1次，以后每半年随访1次。
3 讨论
Ki-67 是较为肯定的与细胞周期相关的核增值标志物，仅仅存在于增值细胞的细胞核内[1]，所编码的基因位于第10号染色体上，其表达随细胞周期的进展而增加，细胞分裂周期中，G0期不表达，G1后期开始表达，S和G2逐渐升高，M期达到高峰，细胞分裂结束后迅速降解消失，为反应细胞增值活性的重要指标，广泛用于肿瘤细胞的增殖评估。
关于胃癌与Ki-67关系的研究已较多，但目前尚存在争议。研究表明，Ki-67在胃癌组织中的表达与肿瘤的临床病理及患者的预后密切相关。Tsamandas等研究认为，Ki-67与胃癌患者预后相关。Kikuyama等认为Ki-67为评估胃癌患者预后的独立的因子。本研究结果显示：Ki-67蛋白主要表达于癌细胞胞核，呈棕黄色颗粒，胃癌组织中Ki-67阳性表达率为62.57%，显著高于正常胃粘膜组织（11.96%），具有显著性差异（χ2 =178.602，P=0.000）。应用半定量RT-PCR实验随机检测10例胃腺癌组织和对应的正常胃粘膜组织中Ki-67的表达情况，进一步证实Ki-67在胃癌组织中表达明显高于在正常胃粘膜组织中的表达。
Ki-67在胃癌组织中高表达，可能在胃癌的发生、发展中发挥重要作用；Ki-67在胃癌中的表达与胃癌患者预后密切相关，为胃癌患者预后的独立因素。
参考文献：
[1]Nowieki M，Ostalska，Nowieka D，Miskowiak B，et al.Prognostic significance of Ki-67 negative blaste cell clone in the high risk group of children treated for acute myeloid leukaemi[J].Folia Histochem Cytobiol，2006，44（l）：49-52.
[2]Gerdes J，Lemke H，Baisch H，Wacker HH，Schwab U，Stein H.Cell cycle analysis of a cell proliferation–associated human nuclear antigen defined by the monoclonal antibody Ki-67.J Immunol 1984；133：1710‐1715
论文作者:黄天臣1,肖建安1,王青兵1,王雁军1,张勇1,白
论文发表刊物:《健康世界》2016年第4期
论文发表时间:2016/6/3
标签：胃癌论文; 组织论文; 蛋白论文; 患者论文; 胃粘膜论文; 阳性论文; 细胞论文; 《健康世界》2016年第4期论文;