（1大庆医学高等专科学校病理与病理生理学教研室, 2大庆医学高等专科学校病生理学教研室,黑龙江 大庆 163312）
基金项目：黑龙江省卫生计生委立项科研课题（2017-452）
*通信作者：yangjinxia1981@163.com
[摘要] 目的：观察低浓度外源性精胺对Ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞的损伤及凋亡的影响,进一步探讨精胺抗损伤的可能机制。
方法：体外建立Ox-LDL诱导细胞损伤模型，给予低浓度外源性精胺后检测各组细胞形态学改变、细胞活力、细胞培养液中SOD活性和MDA含量。
结果：模型组细胞数量减少，细胞活力降低，细胞培养液中SOD活性降低，MDA含量升高，与正常组比较差异显著（Ｐ＜0.05）；给予外源性精胺后，细胞活力增加，损伤减轻，降低培养液中MDA含量，升高SOD活性，与模型组比较差异显著(Ｐ＜0.01）。
结论：低浓度外源性精胺可减轻Ox-LDL诱导内皮细胞损伤，其机制可能与降低MDA含量、提高SOD活性有关。
[关键词] 精胺；Ox-LDL；细胞凋亡；抗氧化
动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是心血管系统疾病中最常见疾病。氧化应激被认为是AS的重要发病机制[1]。Ox-LDL诱导的血管内皮细胞的损伤及其功能障碍是动脉粥样硬化发生的始动和关键性环节[2]。精胺(Spermine,Sp)属多胺类化合物，是一种重要的代谢调控物质，具有抗氧化、清除自由基、调控线粒体通透转运（MPT）、调控离子通道等作用[3]。
本研究建立Ox-LDL诱导细胞损伤模型，给予外源性精胺后通过检测细胞培养液中MDA含量，SOD活性及细胞形态学改变及细胞活力，探讨精胺减轻Ox-LDL诱导细胞损伤的可能机制。
材料和方法
1 材料及仪器
1.1 实验对象 人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)，购自于北医肿瘤研究所。
1.2 主要试剂及仪器 精胺（sigma），Ox-LDL（北京协生生物科技有限责任公司）胰蛋白酶，DMEM高糖培养基，优级胎牛血清，SOD试剂盒、MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所)，其他试剂均为国产分析纯；倒置显微镜(日本OLYMPUS)，CO2培养箱(日本SANYO) ，BIO-RAD 550酶标仪（美国伯乐公司）等。
2 HUVEC的传代培养
人脐静脉内皮细胞株复苏后，用含10%胎牛血清DMEM培养液在37℃、5%CO2培养箱孵育，将贴壁长满的内皮细胞用0.25%胰蛋白酶与0.02%EDTA进行消化,传至3代后用于实验。
3 实验分组
①正常对照组(Control)；②Ox-LDL模型组(Ox-LDL)；③精胺+Ox-LDL组(Sp+Ox-LDL)。均培养24 h。
4 观察指标
倒置显微镜下观察HUVEC形态学变化；采用CCK-8测定细胞活力；采用比色法测定MDA含量；采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性。
5 统计学处理
所有计量数据以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用t检验，P <0.05表示差异显著。
结 果
1 HUVEC形态学变化
Control组中细胞数量多，呈“铺路石”样生长，细胞浆丰富，呈多角形或梭形；Ox-LDL组，细胞数量明显减少，细胞形态不规则，部分细胞坏死、脱落；精胺可减轻上述细胞损伤（图-1）。
2 HUVEC活力测定
与Control比较，Ox-LDL组细胞活力降低(P <0.05)；加入Sp后，增加细胞活力，与Ox-LDL组比较差异显著(P <0.05)。
3 细胞培养液中SOD活性和MDA含量测定
与Control比较，Ox-LDL组细胞培养液中SOD活性降低、MDA含量升高(P <0.05)；加入Sp后，培养液中SOD活性升高、MDA含量降低，与Ox-LDL组比较差异显著(P <0.05)。
讨论
动脉粥样硬化是许多心脑血管疾病发生的病理生理基础。氧化应激是血管内皮细胞损伤和动脉粥样硬化发生的一个重要机制[4]。SOD是生物体内重要的抗氧化酶，可以清除超氧阴离子自由基，我们发现Ox-LDL使细胞培养液中SOD活性下降，而精胺干预后SOD活性增强，说明精胺可能通过提高抗氧化剂的水平发挥其抗氧化的功能。MDA是脂质过氧化的代谢产物，其水平的高低可反映脂质过氧化损伤的程度。结果显示，Ox-LDL能明显增加细胞内MDA含量，而精胺干预后MDA含量显著减少，说明精胺能够有效改善Ox-LDL-引起的脂质过氧化损伤。减轻氧化应激，阻断Ox-LDL的细胞毒性作用，是保护血管内皮功能，防治动脉粥样硬化的关键所在。通过对有关抗氧化酶和脂质过氧化指标的检测，我们推断精胺可能是通过提高抗氧化系统的能力及降低脂质过氧化水平发挥其保护内皮细胞的作用。我们还将继续在分子水平研究精胺抗氧化的可能机制，为精胺。
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论文作者:杨金霞1*,刘德庆1,王琳2,梁春红1,李倩1,马越1
论文发表刊物:《健康世界》2019年第01期
论文发表时间:2019/3/28
标签：细胞论文; 培养液论文; 内皮论文; 损伤论文; 活性论文; 含量论文; 诱导论文; 《健康世界》2019年第01期论文;