联合使用生物裂解液和硅珠法提取胶带粘面汗潜指印中DNA
刘 峰，陈爱萍，黄泳森，成 振
（深圳市公安局龙岗分局刑警大队，广东 深圳 518172）
摘 要: 目的 建立有效的提取胶带粘面汗潜指印中DNA的方法。方法 联合使用生物裂解液和硅珠法提取胶带粘面汗潜指印中的DNA并进行STR分型。结果 获得了有效的STR分型。结论 本方法所用时间短，需要检材量少，且分型结果良好，完全适用于胶带粘面汗潜指印中DNA提取的需要。
关键词: 法医遗传学；胶带；汗潜指印；DNA提取；STR分型
在一些刑事案件中，犯罪分子会使用胶带来控制被害人，或以其捆扎包装物或尸体的外包装。胶带通常为盘卷，具有粘性，致使犯罪分子在使用时不能戴手套，会在胶带上留下指掌纹。但是，由于暴力或用力作用，粘附在胶带上的指掌纹通常会呈模糊或混乱状，影响指掌纹的形态学比对。不过如果能对这些指掌纹中的脱落细胞做检测，获得其DNA分型，就可以进行个体识别。然而由于胶带压敏胶的粘性[1-2]，胶带粘面汗潜指印中的DNA提取也具有一定的技术难度[3-4]。本文尝试联合使用生物裂解液和硅珠法提取胶带粘面汗潜指印中的DNA，并探讨其适用性。
结合中国社会的基本状况、中国人所面临的生存境遇、中国人的心理特性，中国传统文化必然以儒道佛相结合的方式应对德福的同一性难题。这一方式的基本特点为:以人、人力而不以神、神力为中心;重视人自身实现道德和幸福的能力;以人的道德行动而不是幸福的享受为着力点;以今生今世的德福同一而不以在来世或彼岸世界的同一为重心;十分关照其他存在者的幸福。最重要的是，这样一种经典的德福同一性形态必须以先验性的全体为基础。这一形态启发现代人如何去探究最普遍的道德、最普遍的幸福以及二者之间最普遍的因果联结，其根本目的是使人成为最坚定的道德践行者，最终过上既善且好的生活。
1 材料与方法
1.1 样本及主要试剂
分别捺印在黄色包装胶带（芙蓉牌，康龙股份有限公司）和无色透明封箱包装胶带（健力牌，健力股份有限公司）上的指纹各50枚，分别取自20名志愿者。黄色包装胶带比无色透明胶带多一道上色浆的工序，但材质参数并无改变。将胶带裁剪成4cm ×4cm大小，放置在电子天平上，用指按压使屏幕显示数值为1000 g左右，捺印3 s [3]。
生物裂解液（轩源生物科技有限公司）；超敏DNA提取试剂盒（惠文生物科技有限公司）；Identifi ler-Plus扩增试剂盒（Thermo Fisher公司，美国）；DTT溶液(1 mol/L)以及蛋白酶K溶液(20 mg/mL)等试剂。
1.2 生物裂解混合液配制
将生物裂解液、蛋白酶K溶液以及DTT溶液按200∶20∶5的比例混匀，分装到100个1.5 mL的离心管中，备用。
1.3 胶带处理
扩增后产物经3130xL遗传分析仪电泳检测，GeneMapperID-X软件STR分型，电泳条件按仪器说明书设置。
1.4 DNA提取
将装有胶带碎片和生物裂解混合液的离心管置于恒温振荡混匀仪于56 ℃消化30 min，99 ℃裂解10 min；离心，取上清液转入新的1.5 mL离心管中,加入取自超敏DNA提取试剂盒的吸附液800 μL、硅珠16 μL，混匀后室温放置15 min；8000 g离心30 s，充分去除上清液，加入- 20 ℃超敏DNA提取试剂盒漂洗液750 μL充分混匀；再次8000 g离心30 s，充分去除漂洗液，开启管盖56 ℃烘干1 min；加入超敏DNA提取试剂盒洗脱液30 μL,充分混匀后56 ℃保温15 min，8000 g离心30 s，取上清液，备用。
检验时间的缩短对于快速提供破案侦查线索有重要意义。使用硅珠QIA micro试剂盒虽然可以获得不错的提取效果，但其提取时间需要4 h左右[3]。简单使用硅珠法[6]或者Chelex-100[7]甚至需要12 h以上。而本文介绍的联合使用生物裂解液和硅珠法提取胶带粘面汗潜指印中的DNA，提取时间则可控制在80 min以内，且检验结果良好，100例检材经Identifi ler Plus试剂盒扩增再电泳检测，包含性别基因座在内的16个基因座均被成功检测。
1.5 PCR扩增
采用Identifiler Plus扩增试剂盒扩增，反应总体系25 μL，其中包含10 μL前面提取的包含胶带粘面指纹脱落细胞DNA的上清液。热循环条件按照Identifiler Plus扩增试剂盒推荐的扩增参数。
1.6 电泳检测
将捺印在黄色封箱胶带和无色透明封箱胶带上的单枚指纹各50枚，分别剪成数个0.3 cm×0.3 cm大小的碎片，然后分别放置于按1.2步骤配好的生物裂解混合液中。
2 结果与讨论
2.1 结果
在提取胶带粘面汗潜指印中脱落细胞DNA的过程中，手指上皮细胞能够完全脱离压敏胶并溶解到液态的裂解液中是后续检验成功的关键。硅珠法和QIA micro试剂盒检测法是目前提取胶带粘面汗潜指印脱落细胞DNA灵敏度较高的方法[5-6]。采用硅珠法提取胶带粘面汗潜指印中的DNA，裂解液中的GuSCN是一种有机溶剂，它能够快速彻底地溶解胶带上的丙烯酸酯粘胶[5]，使指印中的上皮细胞能够完全溶解到液态的提取试剂中。而QIA miniElute柱带有硅胶膜，在吸附剂和洗涤剂的交互作用下可有效吸附样品中微量的模板DNA，能够使对后续PCR扩增有影响的抑制成分大大减少。联合使用硅珠法和QIA micro试剂盒，既可快速、完全地裂解消化胶带粘面指印中的脱落上皮细胞，又可对样本的DNA起浓缩与纯化作用[3]。另有文献报道使用Chelex-100提取捆绑胶带上人体的脱落细胞DNA[7]，也获得了良好的STR分型。不过，有关文献报道都提到胶带检材需要56℃过夜孵育消化[6-7]。
图1 捺印在黄色包装胶带粘面的指印经联合使用生物裂解液和硅珠法提取后的检测结果
Fig.1 STR profile of the DNA extracted from sweat latentfingerprint on the yellow adhesive tape
图2 图1个体的血样DNA检测结果
Fig.2 STR profile of DNA from the blood of that individual who left thefingerprint indicated in Fig.1
2.2 讨论
联合使用生物裂解液和硅珠法提取两种胶带材质上的共100枚捺印指纹，检验结果显示，包含性别基因座在内的16个基因座均能成功检测，并且峰值都高于100 RFU，分型图谱与指印提供者的血样对照图谱完全一致。图1显示某个体捺印在黄色包装胶带粘面的指印提取后检测的结果。由图可见，所有基因座的峰值都高于100 RFU，分型图谱与指印提供者的血样对照图谱完全一致（图2）。
据了解，2017年安徽省启动“两治三改”（治理违法建设、违法用地和改造棚户区、城中村、老旧小区）。截至2018年9月下旬，全省已累计完成违法建设治理322.01万平方米、违法用地治理面积11519.09亩，分别占全年目标任务的88.90%、89.56%。
使用本文介绍的生物裂解液联合硅珠法提取胶带粘面汗潜指印中的DNA时，56 ℃消化步骤最好增加三次振荡混匀操作，而99 ℃裂解，则应再增加振荡混匀操作一次，以保证胶带上压敏胶粘合剂能被充分消化溶解。而欲尽量去除超敏DNA提取试剂盒的吸附液/洗脱液，则只需再增加一次离心步骤即可。
根据图5和相关分析：随着溶液钼浓度的升高，产品中值粒径在8.73～13.56μm之间波动呈不规律变化，颗粒粒径与粒径分布没有明显改变。反应结束后取出冷却，数分钟后晶体才开始析出，产物未出现团聚，颗粒大小较均匀，颗粒表面形貌完整均呈片状。综合比较，选择溶液钼浓度223.2g/L为最优浓度。
本文介绍的联合使用生物裂解液和硅珠法提取胶带粘面汗潜指印中DNA的方法，不仅适用于涉及暴力犯罪刑事案件中的胶带，也能用于盗窃案件中常见的使用竹竿、钢管等杆状物头部粘附双面胶以及目前勘查常用的提取光面载体上脱落细胞的“粘附器”胶面等情况。上述检材联合使用生物裂解液和硅珠法进行DNA提取并检验，应均能获得满意的STR分型。
我们应有意识地创设发现问题情境，这是培养学生创新能力的良好途径。首先，可以利用学生生活中熟知常见的实际问题，来激发学生的探索欲望；其次，利用数学小实验或动手操作环节，引发学生好奇心和求知欲望；再次，用新旧知识联系或冲突，引出问题激发学生探索欲望；最后，运用开放题，培养学生思维的深刻性、广阔性、缜密性、灵活性，从而培养其创新思维能力。
参考文献
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A Method to Extract DNA from Sweat Latent Fingerprint Deposited onto Viscous Side of Adhesive Tape
LIU Feng, CHEN Aiping, HUANG Yongsen, CHENG Zhen(Longgang Branch of Shenzhen Public Security Bureau, Shenzhen 518172, Guangdong, China)
ABSTRACT: Objective To establish a method for efficiently extracting DNA from sweat latent fingerprint that was deposited onto the viscous side of adhesive tape. Methods With the combination of biologically disrupting solution (bone meal incubation fluid) and silicon beads, DNA was extracted from the selected samples for STR typing. Results Valid STR profiling had been obtained. Conclusion The method described here is characteristic of short time consumption, small quantity of required sample, rendering good STR typing profile, therefore fully applicable for the extraction of sweat latent fingerprint DNA from the viscous side of adhesive tape.
KEY WORDS: forensic genetics; adhesive tape; sweat latent fingerprint; DNA extraction; STR typing
中图分类号: DF795.2
文献标识码: B
文章编号: 1008-3650(2019)05-0454-03
第一作者简介: 刘峰，男，河南周口人，硕士，副主任法医师，研究方向为法医遗传学。E-mail: dchlf@126.com
DOI: 10.16467/j.1008-3650.2019.05.017
收稿日期: 2017-06-27；修回日期:2017-10-27
引用本文 格式:刘峰，陈爱萍，黄泳森，等. 联合使用生物裂解液和硅珠法提取胶带粘面汗潜指印中DNA[J]. 刑事技术，2019,44(5):454-456.
标签：法医遗传学论文; 胶带论文; 汗潜指印论文; dna提取论文; STR分型论文; 深圳市公安局龙岗分局刑警大队论文;