摘要：目的 建立硫酸阿托品注射液有关物质方法 方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为YMC-C18柱（4.6*10mm，3um），流动相A：水相（3.5g十二烷基硫酸钠+7g磷酸二氢钾溶于1800ml水中，用磷酸调节pH至3.3）-乙腈（180：96）；流动相B：乙腈。检测波长210nm，流速1.0ml/min，柱温30℃。结果 各杂质峰与主峰能有效分离，杂质A与杂质C的线性较好（R?均为1），回收率分别为98.81%，97.72%。结论 建立的高效液相色谱法快速、准确、专属性强，可用于硫酸阿托品注射液有关物质检查。
关键词：硫酸阿托品；液相色谱；有关物质
1.仪器与试剂
1.1 仪器
Agilent1260，PHS-3C精密PH计，METTLER TOLEDO XS105天平
1.2 色谱柱
根据EP标准中所定，本实验选用YMC C18（3μm，4.6×10mm）为试验用柱。
1.3 试剂
乙腈（Merck色谱纯），磷酸二氢钾（西陇化工股份有限公司），
十二烷基硫酸钠（AR，湖南尔康制药股份有限公司），
磷酸（无锡市佳妮化工有限公司，批号20130701），
水为纯化水经0.45um滤膜抽滤，
盐酸（上海三鹰化学试剂有限公司），
氢氧化钠（上海三鹰化学试剂有限公司）。
2.方法与结果
2.1方法确定
2.1.1色谱柱选择 根据EP硫酸阿托品原料项下标准，以十八烷基硅烷键合硅胶（4.6mm）作为填充剂。
2.1.2流动相配制
流动相A：水相（3.5g十二烷基硫酸钠+7g磷酸二氢钾溶于1800ml水 中，用磷酸调节pH至3.3）-乙腈（180：96）；流动相B：乙腈
时间流动相A流动相B
0-2955
2-2095→705→30
2.1.3波长以及进样量选择 根据EP硫酸阿托品标准中方法，选用210nm作为检测波长，进样量为10ul。
2.1.4对照溶液（系统适用性）配制
取本品适量，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含硫酸阿托品0.24mg的溶液，作为供试品溶液；
称取约2.5mg阿托品有关物质B对照品，置于10ml容量瓶中，用供试液溶解并稀释至刻度，移取5ml此溶液，置于25ml容量瓶中，用流动相A稀释至刻度，即得。
2.2线性和范围
根据有关物质测定浓度，杂质A、杂质C的限度浓度为0.48μg/ml，进行试验。
a）杂质A、杂质C
分别精密称取杂质A对照品、杂质C对照品各3mg，用流动相A配制成一系列浓度的溶液，摇匀，照有关物质分析方法，精密吸取以上溶液10l分别注入色谱仪，记录色谱图。绘制进样浓度对于各自峰面积的标准曲线。
图2 杂质C线性图
可以看出，杂质A，杂质C在0.24ug/ml-0.12mg/ml范围内浓度与吸收度呈良好的线性关系。
2.3精密度
精密杂质A、杂质C适量，配置成含杂质A、杂质C各 0.3μg/ml左右混合溶液。取该溶液10l，连续进样6次，记录色谱图，考察进样精密度。结果见下表：
可以看出，各杂质的进样精密度良好。
2.3专属性
取本品适量，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含硫酸阿托品0.24mg的溶液，作为供试品溶液；
对照溶液（a）：精密量取供试品溶液1.0ml，置于100ml容量瓶中，用流动相A稀释至刻度，再移取1.0ml此溶液，置于10ml容量瓶中，用流动相A稀释
对照溶液（b）：称取约2.5mg阿托品有关物质B对照品，置于10ml容量瓶中，用供试液溶解并稀释至刻度，移取5ml此溶液，置于25ml容量瓶中，用流动相A稀释至刻度，即得。
对照溶液（d）：称取约5mg托品酸（有关物质C）置于10ml容量瓶中，用流动相A溶解并稀释至刻度；移取1ml此溶液，置于100ml容量瓶中，用流动相A稀释至刻度，再移取1ml此稀释后溶液，置于10ml容量瓶中，用流动相A稀释至刻度，即得。
2.3.1 酸破坏试验 称取原料约24mg，置于100ml量瓶中，加入1mol/L盐酸5ml，放置3小时后，用 1mol/L氢氧化钠5ml中和，并用流动相稀释至刻度即得。
2.3.2 碱破坏试验 称取原料约24mg，置于100ml量瓶中，加入0.1mol/L氢氧化钠5ml，放置0.5小时后，用 0.1mol/L盐酸5ml中和，并用流动相稀释至刻度。
2.3.3 氧化破坏 称取原料约24mg，置于100ml量瓶中，加入30%双氧水5ml，放置3小时后，用流动相稀释至刻度，即得。
2.3.4 热破坏 将样品置于130度破坏2小时后，称取一定量，用流动相稀释至每1ml中约含硫酸阿托品0.24mg的溶液即得。
2.3.5 光破坏 将样品置于5000lx光源下3天后，称取一定量，用流动相稀释至每1ml中约含硫酸阿托品0.24mg的溶液即得。
图谱如下：
各杂质与硫酸阿托品的检测限与定量限如上表所示。
2.5准确度
对照品溶液的制备 精密称取硫酸阿托品对照品约12mg置于50ml的容量瓶中，用流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
杂质溶液的制备 精密称取杂质A对照品、杂质C对照品各10mg，置于50ml的容量瓶中，用流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀；取该溶解1ml，用流动相A稀释至25ml，摇匀；再取稀释后溶液1ml，用流动相A稀释至25ml，摇匀，即得。
供试品溶液的制备 取已测有关物质的硫酸阿托品样品各6mg，按杂质限度的70%、100%、130%分为低、中、高三个剂量，分别精密l量取杂质浓溶液0.7ml、1ml、1.3ml，每个剂量各三份置于25ml棕色容量瓶中，分别用流动相A溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
取对照品溶液和各供试品溶液10μl注入色谱仪，记录色谱图，计算回收率，结果见下表：
由上表数据可知，本方法重复性较好。
2.7溶液稳定性
a）原料 取新制的有关物质溶液，在室温条件下放置24小时后分别进样，记录色谱图，考察有关物质测定溶液的稳定性
表格 1 原料有关物质溶液稳定性
由上表可知，室温条件下，杂质未出现明显变化，在24小时内稳定。
3．结论
通过上述实验数据分析，可以证明用EP硫酸阿托品有关物质方法对我公司生产的产品的检测是可行的，该方法专属性强，灵敏度高，重复性与回收率实验结果也也较理想，准确度较高。因此用该方法检测可对杂质进行有效控制。
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论文作者:董松波,楼明波
论文发表刊物:《健康世界》2017年第2期
论文发表时间:2017/3/20
标签：溶液论文; 阿托品论文; 杂质论文; 刻度论文; 硫酸论文; 瓶中论文; 色谱论文; 《健康世界》2017年第2期论文;