王秋华，许泽辉，罗世强，崖娇练，蔡鹏飞
柳州市妇幼保健院 广西，柳州 545001
【摘要】目的：探讨增加STR（Short Tandem Repeat, STR）基因座检测对二联体亲子鉴定结果分析的影响。方法：利用Chelex-100法提取5个二联体亲子鉴定案例的10份血样。采用美国ABI公司AmpFISTRR? IdentifilerTMplus试剂盒进行多重荧光PCR扩增确定16个位点STR基因型，若出现1个或2个基因座不符合孟德尔遗传规律时，则采用采用GlobalFilerTMExprees Kit系统进行24个STR基因座检测。结果：5个不符合孟德尔遗传规律案例中在增加基因座检测后，均出现3个或大于3个矛盾基因座。结论：对于出现1个或2个基因座不符合孟德尔遗传规律的二联体亲子鉴定时，可以增加新的常染色体STR基因座检测，进行确切的排除亲生关系，得出正确的鉴定结论。
【关键词】常染色STR；二联体；排除率
亲子鉴定是通过人类遗传标记的检测与分析，判断父母与子女之间是否有亲生关系。亲代一方因故不能参加鉴定，只鉴定父子与母子关系称为二联体亲子鉴定，或称为单亲鉴定。在我院接待的鉴定中单亲鉴定约占1/3，经常会出现单个或2个基因座不符合遗传规律的案例，遇到这种情况必须增加更多遗传标记的检测，以确保结论的可靠性。在大多数标准的三联体亲子鉴定中，利用AmpFISTRR? IdentifilerTMplus试剂盒可以基本满足要求，但在单亲鉴定案例中，有时仅检测15个STR基因座并不能得出可靠的结论[1]，仅靠AmpFISTRR? IdentifilerTMplus试剂盒检测系统容易照成误判[2,3]，必须增加更多的常染色体STR基因座的检测。
1 材料与方法
1.1 实验材料
因申报户口，需要鉴定5个二联体单亲案例是否存在血缘关系。根据知情同意原则采集5个家庭10位受检者手指末梢血，制作成血斑。
1.2 方法
1.2.1 Chelex-100法提取血斑DNA 采用Chelex-100法提取血斑DNA。剪取受检样本约0.3 cm2的血斑，加到1.5 mL的离心管中，加入10% Chelex 120 ul和10mg/ml 蛋白酶K 5 ul，混匀后置56℃水浴约2小时，100℃金属浴10分钟， 12000rpm离心5分钟，取上清稀释用于PCR扩增，或放4℃保存备用。
1.2.2复合荧光扩增和毛细管电泳检测运用美国ABI公司AmpFISTRR?IdentifilerTM plus试剂盒（包括16个STR位点：CSF1P0、D7S820、D8S1179、D21S11、D2S1338、D3S1358、D13S317、D16S539、TH01、D18S51、D19S433、TPOX、vWA、D5S818、FGA和Amelogenin）进行复合荧光PCR扩增，若发现出现单个或2个基因座不符合遗传规律的单亲案例时[4]则采用GlobalFilerTMExprees Kit系统（包括21个常染色体STR位点和3个性别位点：CSF1P0、D7S820、D8S1179、D21S11、D2S1338、D3S1358、D13S317、D16S539、TH01、D18S51、D19S433、TPOX、vWA、D5S818、FGA、D2S441、D22S1045、DSE33、D10S1248、D1S1656、D12S931和Amelogenin、Y indel、DYS391）进行增加基因座检测，严格按照试剂盒说明书进行操作。在ABI3500Dx遗传分析仪上进行荧光检测分析，最后采用GeneMapper ID-X-V1.4软件进行数据分析。
2 结果
2.1通过15个常染色体STR试剂盒检测，案例1、案例2的可疑母亲与女儿之间分别有一个基因座不吻合；案例3、案例4的可疑母亲与女儿之间和案例5的可疑父亲与女儿之间各有两个基因座不吻合；5个案例在15个常染色体STR基因检测中不足以判断。检测结果见表1。
表1 16个位点中可疑父母与子女不吻合的STR位点
3 讨论
二联体亲子鉴定是亲子鉴定中比较特别的一种，由于亲代一方因故不能参加鉴定，提供不了相应的遗传信息，因此增加了鉴定难度。从理论上来讲，某一多态性基因座的非父的排除率（Probability Exclusion,PE），三联体PE值比二联体PE值高三分之一左右[5]，因此在二联体的亲子鉴定中，通过增加多态性基因座才能保证鉴定结果的准确性。特别是发生了1到2个基因座违反遗传规律时，不能轻易的做出判断，必须加测基因座，若假设父（母）亲不是亲生父（母）亲随着基因座的增加，必定还有其它基因座排除。若排除的基因座不再增加，则需补充X-STR体系来检测，通过检验X染色体上的遗传标记来进一步复核，以做出准确可靠的鉴定结论[6]。
在五个案例中通过表2还发现，基因座SE33和D10S1248的杂合度H和非父排除率PE都比较高，通过调查广东汉族人群中SE33和D10S1248基因座多态性也发现SE33的杂合度H为0.9484，非父排除率PE为0.8874[7]；D10S1248其杂合度H>0.7，非父排除率PE>0.5[8]。这均说明了GlobalFilerTMExprees Kit系统在选用的15个常染色体基础上增加的基因座具有较高的遗传多态性，是现有系统的有效补充，具有较高的应用价值。
参考文献：
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论文作者:王秋华 许泽辉 罗世强 崖娇练 蔡鹏飞
论文发表刊物:《名医》（学术版）2016年第2期
论文发表时间:2016/5/17
标签：基因论文; 染色体论文; 案例论文; 鉴定论文; 亲子鉴定论文; 孟德尔论文; 多态性论文; 《名医》（学术版）2016年第2期论文;