摘要：目的 研究分析白带中白色念珠菌的致病性和指导抗真菌药物的合理使用。方法 此次研究的对象是选择2013年1月至2015年12月白带标本中分离的300株白色念珠菌进行蛋白酶测定，同时测定氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的最低抑菌浓度（MIC）。结果 300株白色念珠菌全部检出蛋白酶，其中蛋白酶活力高、中、低检出率分别为83．7%（251株）、12．7%（37株）、4．0%（12株）。4种抗真菌药物的耐药率分别是17．3%、11．3%、63．3%和44．6%。结论 白带中白色念珠菌具有致病性，临床应密切关注。
关键词：白色念珠菌；白带；蛋白酶；耐药性
Abstract：Objective To study the pathogenicity of Candida albicans and guide the rational use of antifungal drugs.The object of this research method is to select from January 2013 to December 2015 from vaginal specimens in 300 strains of Candida albicans by protease determination of minimum inhibitory concentration determination of flucytosine，amphotericin B，fluconazole，itraconazole（MIC）.Results all of the 300 strains of Candida albicans were detected protease，the protease activity of high，medium and low detection rate was 83.7%（251 strains），12.7%（37 strains），and 4%（12 strains）.The resistance rates of 4 antifungal drugs were 17.3%，11.3%，63.3% and 44.6%，respectively.Conclusion Candida albicans in the leucorrhea is pathogenic and should be paid close attention to.
Candida albicans；leucorrhea；protease；drug resistance In
白色念珠菌是人体正常菌群之一，主要寄生于人体的体表及口腔咽喉等部位，是引起女性生殖道感染的常见菌。笔者对我院2013年1月至2015年12月300株白带标本分离的白色念珠菌酸性蛋白酶（acid proteinase，AP）以及白色念珠菌对氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐药性进行检测，以期阐明白带中白色念珠菌的致病性和耐药性，指导临床合理治疗。
1 资料与方法
1．1 材料
1．1．1 菌珠 我院检验科2013年1月至2015年12保存的白带标本中分离的白色念珠菌300株。经形态学、芽管生成、假菌丝、厚膜孢子、糖同化等试验系统鉴定，确定为白色念珠菌。
1．1．2 培养基 哥伦比亚血平板（重庆市庞通科贸有限公司）；产酶培养基：葡萄糖20．0 g/L，酵母粉1．0 g/L，KH2PO41．0 g/L，蛋白胨20．0 g/L，pH4．5[1]；YGM-牛奶培养基：葡萄糖20．0 g/L，酵母粉1．0 g/L，KH2PO41．0 g/L，琼脂10．0 g/L，pH4．5[1]。灭菌后冷却到50℃加脱脂牛奶（浓度为1．0%）。培养基厚度：9 cm直径平板准确加入25 ml培养基，约4．0 mm厚。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆
1．1．3 药敏测定板 法国生物梅里埃公司生产的酵母真菌药敏测定板ATB?FUNGUS2。
1．2 方法
1．2．1 AP活力的恢复 用产酶培养基37℃增菌24 h，转种于哥伦比亚血平板37℃培养24 h，用来恢复白色念珠菌的产酶等生物学活性，保存于4℃备用。
1．2．2 白色念珠菌AP活力测定[1]试验菌株点种于YGM-牛奶平板上，37℃培养72 h后，用游标卡尺测量菌落及其周围透明环的直径，以透明环直径/菌落直径（R）来判断酶活力的大小。
1．2．3 抗真菌药物耐药性测定 严格按照说明书进行操作，结果按照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）标准进行敏感、中介和耐药的判定，两性酶素B最低抑菌浓度（MIC）≥2 mg/L为耐药。
1．3 统计学方法 采用WHONET5．2统计学软件进行统计分析。
2 结果
2．1 白色念珠菌AP活力 300株白色念珠菌在其菌落周围均出现透明环，R的范围是1．61～6．29，按R大小将试验菌株分为高活力（R≥3．0）251株，占83．7%；中等活力（2．0≤R＜3．0）37株，占12．7%；低等活力（R＜2．0）12株，占4．0%。2．2 300株白色念珠菌对常用抗真菌药物的耐药性 300株白色念珠菌对氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐药率为17．3%（52/300）、11．3%（34/300）、63．3%（190/300）、44．6%（134/300）。
3 讨论
AP的检测方法有多种，其中牛奶平板检测法具有简单、灵敏、不需染色可直接观察结果等优点。本实验采用YGM-牛奶平板法，检测了300株从白带标本分离的白色念珠菌AP，结果其产酶率达到100%，且高活力达83．7%，而低活力仅为4．0%，中度活力占12．7%，与国内外相关报道一致。
白色念珠菌的致病性由AP、荚膜及黏附性、芽管生成和疏水性等构成。其中AP为主要的致病因子，有文献报道白色念珠菌AP的活性与毒力（r=0．994 6）、黏附（r=0．994 4）密切相关[1]。菌体表面的疏水性是白色念珠菌重要的毒性因子，疏水性白色念珠菌较亲水性白色念珠菌产生芽管的速度快，其黏附组织、塑料、导管和人造瓣膜的能力强。
笔者测得白带标本中白色念珠菌对氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的耐药率分别是17．3%、11．3%、63．3%、44．6%，明显高于呼吸道中的白色念珠菌[2-4]，说明白带中白色念珠菌对氟康唑、伊曲康唑的耐药性已相当严重，这可能与临床局部使用过多唑类制剂，抗真菌药物选择压力增大有关。因此，临床对治疗白色念珠菌阴道炎时应慎用抗真菌药物，避免耐药性的积累。真菌耐药除与选择压力有关外，目前研究认为白色念珠菌耐药性的产生原因为：①麦角甾醇生物合成通路中关键靶酶的变化；②真菌胞膜内药物浓度的降低；③生物被膜的形成等。现已发现许多白色念珠菌感染的发生与生物被膜形成有关[5]。
本研究通过对白带标本中白色念珠菌AP的测定和对常用抗真菌药物耐药性分析，证明白色念珠菌具有相当的致病性，且对常用抗真菌药物已产生不同程度的耐药，说明在白带标本中白色念珠菌分离培养和药敏分析十分重要。
参考文献：
［1］ 黄长武，李兴禄，邱君风，等．白色念珠菌在呼吸道中致病性的研究．中华医院感染学杂志，2004，14（7）：721-723．
［2］ 刘晓敏，林婷．189株肺部酵母样真菌的鉴定及E-test法药敏分析．中国医学检验杂志，2004，5（2）：108-109．
［3］ 沈翠芬，张晓祥．临床标本的真菌培养和药敏分析．中华医院感染学杂志，2003，13（4）：382-383．
［4］江艳．93例呼吸道白色念珠菌感染的临床调查与耐药现状分析．四川省卫生管理干部学院学报，2003，22（3）：196-197．
［5］ Douglas LJ．Candida biofilms and their role in infection．Trends Microbiol，2003，11（1）：30-36．
论文作者:解晓伟1,邢晓丹2,毕晓梅1,李鸣1,薛丽欣1
论文发表刊物:《健康世界》2017年第2期
论文发表时间:2017/3/21
标签：白色论文; 念珠菌论文; 白带论文; 耐药性论文; 培养基论文; 标本论文; 氟康唑论文; 《健康世界》2017年第2期论文;