黄亚东[1]1990年在《兔不同亚型单核/巨噬细胞与动脉粥样硬化发病关系的研究》文中研究指明第一部分：家兔不同亚型单核／巨噬细胞与动脉粥样硬化关系的研究 本实验分别用兔外周血单核细胞、腹腔巨噬细胞及肺泡巨噬细胞作为抗原，通过杂交瘤技术，先后共筛选到6株分泌抗兔单核／巨噬细胞单克隆抗体的杂交癌。分别定名为MH1，MC7，MG8，MB9，MB6和MF11，它们的染色体数分别为MH1／106，MC7／118，MG8／121，MBg／109，MB6／114，MF11／107。相应单克隆抗体的IgG亚类分别为MH1-IgG3，MC7，MB9-IgG1，MG8，MB6-IgG2a，MF11-IgG2b。经间接免疫荧光方法鉴定，该6株单克隆抗体与单核细胞外的其它血细胞及平滑肌细胞等均无明显的交叉反应。6株单克隆抗体与外周血单核细胞及不同来源的巨噬细胞的反应性有非常明显的差别。经流式细胞仪分析它们与外周血单核细胞及不同来源巨噬细胞反应的阳性率也各不相同。Western blot方法分析各株单克隆抗体所抗细胞膜抗原的分子量发现其中4株分别为MH1-54KD，MC7-20KD，MB9-96KD，MF11-37KD。以上结果提示该6株单克隆抗体所抗的细胞可能为不同亚型或不同分化阶段的单核／巨噬细胞。这些细胞在表型上可能具有不同的抗原表达，也许具有不同的功能。 应用以上6株单克隆抗体，通过免疫组织化学方法观察了家兔实验性动脉粥样硬化病灶中各种单抗阳性单核／巨噬细胞的分布规律。动脉粥样硬化病灶中侵润的单核／巨噬细胞以MH1阳性的单核／巨噬细胞为最多，MG7阳性巨噬细胞次之，MB9和MB6阳性巨噬／细胞较少，MG8和MF11阳性巨噬细胞在病灶中基本不存在。流式细胞仪分析结果同免疫组织化学所观察到的结果完全一致。说明在高脂饮食诱发家兔实验性动脉粥样硬化过程中，病灶中侵润的单核／巨噬细胞可能以某种亚型或分化阶段的单核／巨噬细胞为主(在本实验中，以MH1和MG7阳性单核／巨噬细胞为主)，可能该亚型或分化阶段的单核／巨噬细胞对高血脂具有较显著的反应性，在高脂血症的情况下易于在内膜积聚和侵润。 以MH1和MC7单抗在给家兔饲喂胆固醇的同时体内注射，观察对高脂饮食诱发动脉粥样硬化的影响，并与同时体内注射正常小鼠IgG或注射HDL的家兔主动脉病变相比较。结果显示：家兔经饲喂高胆固醇饮食10周后，主动脉内膜出现明显的动脉粥样斑块病变，主要为脂纹和粥样斑块，并有少量早期纤维斑块形成。注射小鼠正常IgG并同
吴春芳[2]2011年在《牙周致病菌Pg-LPS对组织特异性单核/巨噬细胞膜表面受体表达影响的研究》文中提出目的比较牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激下正常和高脂血症新西兰兔同一个体不同组织来源的单核/巨噬细胞膜表面受体CD14、TLR4、SR-A和MHC-Ⅱ表达的变化以及外源性IL-10对它们的影响,为研究牙周病与全身系统性疾病的关联提供理论依据。方法1. 6只健康新西兰兔以Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离外周血单核细胞(Mo),以灌洗法分离肺泡巨噬细胞(AM)和腹腔巨噬细胞(PM),以酶消化法+Percoll密度梯度法分离肝脏枯否氏细胞(KC)。在光镜和透射电镜下观察形态学及微观结构的差异,采用墨汁吞噬试验及免疫细胞化学方法分别测定吞噬功能和表型的表达情况。2.通过实时荧光定量聚合酶链反应和免疫双荧光染色技术分别检测6只健康和6只高脂血症新西兰兔四种组织来源的单核/巨噬细胞表面CD14、TLR4、SR-A和MHC-Ⅱ的基因和蛋白表达情况。3.将6只健康和6只高脂血症新西兰兔四种组织来源的单核/巨噬细胞分别分成4组:RPMI1640+巨噬细胞、1μg/ml E. coli -LPS+巨噬细胞、1μg/ml P.gingivalis-LPS+巨噬细胞、100ng/ml IL-10 + 1μg/ml P.gingivalis-LPS +巨噬细胞, IL-10刺激2 h ,P.gingivalis-LPS或E. coli–LPS刺激24h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞CD14、TLR4、SR-A和MHC-Ⅱ的基因表达水平。结果1.同一个体来源的四个部位贴壁细胞具有单核/巨噬细胞的形态学特征及免疫表型,有较强的吞噬能力,且表现出一定的差异性。墨汁吞噬功能:AM >PM、KC >Mo;MAC387表达:KC>AM>PM>Mo。2.正常和高脂血症组的单核/巨噬细胞均有不同程度的荧光表达;Realtime PCR检测结果发现与正常组相比,高脂血症状态下Mo、AM、KC的SR-A和MHC-Ⅱ,以及AM、PM、KC的TLR4的基因表达均显著性升高;而四种细胞的CD14,Mo的TLR4及PM的MHC-Ⅱ的mRNA表达却明显下降。3. Realtime PCR检测结果发现:①正常兔Pg-LPS组与对照组相比,AM、PM、KC的SR-A,AM的CD14表达显著升高(P<0.05);而Mo的CD14、AM的TLR4、KC的CD14和TLR4的表达无显著性差异(P>0.05),其余均表达下降(P<0.05)。E. coli–LPS组的基因表达方向与Pg-LPS组一致,并且刺激作用比Pg-LPS组强。②高脂血症兔Pg-LPS组与对照组相比,AM、KC的CD14,AM、PM的SR-A,以及Mo、AM的TLR4表达显著升高(P<0.05);PM、KC的TLR4的表达无显著性差异(P>0.05),其余均表现为下降(P<0.05)。E. coli–LPS组的基因表达方向与Pg-LPS组基本一致。③外源性IL-10可以同时上调正常和高脂血症兔单核/巨噬细胞SR-A的基因表达,并下调CD14、MHC-Ⅱ、TLR4的基因表达。结论1.体外培养情况下,处于生理状态的同一个体不同部位兔单核/巨噬细胞的功能及表型存在异质性。2.正常和高脂血症状态下单核/巨噬细胞CD14、MHC-Ⅱ、SR-A及TLR4的基因和蛋白的表达均存在着部位差异,并且蛋白的表达方向基本与mRNA相一致;在无脂多糖参与下,单核/巨噬细胞应对高脂血症的反应主要表现为SR-A、TLR4和MHC-Ⅱ的升高,但PM除外。3.正常兔AM、PM、KC受1μg/ml Pg-LPS刺激24 h时,主要以防御性免疫反应为主,特异性免疫反应和炎症效应尚未启动;而高脂血症兔受1μg/ml Pg-LPS刺激24 h时,AM防御性免疫反应和炎症效应并存,PM仍处于防御性免疫阶段,而Mo、KC则已经进入炎症效应阶段,其防御性受体明显受到抑制而下降。另外,高脂的四种细胞特异性免疫也都受到抑制。4. IL-10可以通过升高SR-A并下降CD14、MHC-Ⅱ、TLR4达到抗炎作用。
参考文献：
[1]. 兔不同亚型单核/巨噬细胞与动脉粥样硬化发病关系的研究[D]. 黄亚东. 中国协和医科大学. 1990
[2]. 牙周致病菌Pg-LPS对组织特异性单核/巨噬细胞膜表面受体表达影响的研究[D]. 吴春芳. 福建医科大学. 2011