关键词：
药物疗法；多西他赛；流式细胞术；肿瘤相关成纤维细胞；免疫细胞
前言：
多西他赛（Docetaxel）是一种紫杉醇类抗肿瘤药，通过干扰正常微管束的形成和固定抑制肿瘤细胞的有丝分裂过程，现被应用于乳腺癌、卵巢癌等多种癌症的临床治疗。肿瘤间质是肿瘤赖以生存的环境，其中一个主要组成成分，肿瘤相关成纤维细胞（Cancer-associated fibroblasts, CAFs）可产生一些因子，其有助于肿瘤细胞的转移、侵袭和生长，肿瘤附近血管的生成、浸润和转移等过程。[1-3]本实验针对多西他赛对于CAFs的杀伤作用进行研究，探讨多西他赛能否用于破坏肿瘤微环境从而治疗癌症，同时检测该药物对机体自身免疫细胞的影响，讨论其用于临床治疗安全性。
1 材料与方法
1.1 主要材料
细胞培养版、离心机、显微镜、培养箱、流式细胞仪、酶标仪；小鼠、CAF、多西他赛、1640培养基、DEME培养基、MTT、三联溶解液、CD4染剂、CD8染剂、Annexin V试剂、PI染料（碘化丙啶）
1.2 方法
1.2.1 获取细胞悬液 断颈迅速处死一只小鼠，取出脾脏，用含10%胎牛血清的1640培养基制成脾细胞悬液。将原细胞悬液稀释100倍后用细胞计数板计数，计算出脾细胞总数。取一块CAFs培养皿，弃上清，用DEME培养基制成CAFs细胞悬液。将其稀释20倍后用细胞计数板计数，计算出细胞总数。
1.2.2 实验分组 分为CAF流式培养组（CAFs1组）、CAF MTT培养组（CAFs2组）、脾细胞流式培养组（T1组）、脾细胞MTT组（T2组）。
1.2.3 脾细胞铺板 计算所需细胞液和1640培养基的体积。
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1.2.4 CAFs铺板 计算所需细胞液和DEME培养基的体积
1.2.5 MTT法检测脾细胞和CAFs活性
1.2.6 流式细胞术检测细胞和CAFs活性
1.3 统计学处理
采用SPSS软件进行统计学分析，所有计量数值进行正态性检验，均为正态分布。
2 实验结果
2.1 多西他赛对机体自身免疫细胞的影响
向等量免疫细胞中加入不同浓度（0μg/ml、0.4μg/ml、4.0μg/ml）的多西他赛，培养24h后用流式细胞术和MTT法检测细胞活性。结果显示，随多西他赛浓度上升，CD4-T细胞和CD8-T细胞占比均呈上升趋势。见图1。
2.2 多西他赛对CAFs的影响
向等量CAFs中加入不同浓度（0μg/ml、0.4μg/ml、4.0μg/ml）的多西他赛，培养24h后用流式细胞术和MTT法检测细胞活性。结果显示，随多西他赛浓度上升，CAFs早期凋亡比例增加。见图2。
3 讨论
目前为止，临床治疗中应用的多西他赛，主要依靠破坏肿瘤细胞的微管网络抑制癌细胞生长。但耐药性的产生使得多西他赛疗法还需进一步改善。肿瘤微环境（tumor microenvironment）由肿瘤细胞和肿瘤间质组成，其对肿瘤的形态、结构和生理功能的作用正在被逐步认知。通过影响肿瘤间质的重要组成部分之一，肿瘤相关成纤维细胞，从而治疗肿瘤的想法也被提出。本实验发现，多西他赛可影响CAFs的早期凋亡过程，减少对肿瘤细胞的供能，从而治疗肿瘤。
参考文献
[1] Jiang H，Hegde S，DeNardo DG.Tumor-asociated fi- brosis as a regulator of tumor immunity and response to immunotherapy[J].Cancer Immunol Immunother，2017，66(8):1037-1048.
[2] Liao Z，Tan ZW，Zhu P，et al.Cancer-asociated fibro-
blasts in tumor microenvironment-Acomplices in tumor malignancy[J].Cel Immunol，2018，pi:S0008- 8749(17)30222-8.
[3] Nazareth MR, Broerick L, Simpson-Abelson JR, et al.Charater-ization of human lung tumor-associated fibroblasts and their ability to modulate the activation of tumor-associated T cells[J].J Im-munol, 2007, 178（9）:5552-5562.
论文作者:路嘉音
论文发表刊物:《中国医学人文》2019年11期
论文发表时间:2019/12/4
标签：细胞论文; 肿瘤论文; 培养基论文; 流式论文; 活性论文; 浓度论文; 纤维论文; 《中国医学人文》2019年11期论文;