（临沂市中心医院 山东 临沂 276400）
【摘要】目的：探讨抗菌药物降阶梯治疗和二代测序技术(NGS)在重症监护室病房重症下呼吸道感染中的应用效果。方法：将我院2017年6月—2018年6月收治的120例重症下呼吸道感染患者进行分析，将患者分成实验组和常规组，两组各60例患者，常规组采用美罗培南降阶梯经验性广谱抗菌治疗，实验组采用NGS技术测定BALF和痰液明确病原微生物后选用相应的抗菌药物进行治疗。对比两组治疗效果、不良反应发生情况。结果：实验组治疗效果明显好于常规组，实验组不良反应发生率低于常规组，两组差异显著（P＜0.05）。结论：在重症下呼吸道感染治疗中采用二代测序技术，可以指导抗菌药物应用，做到精准治疗，从而降低耐药菌株的耐药性，提升治疗效果，具有较高推广价值。
【关键词】光谱抗菌药物降阶梯治疗；NGS技术；重症监护；重症下呼吸道感染
【中图分类号】R472 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2018）31-0026-02
Practical effect of second-generation sequencing technology in the treatment of severe lower respiratory tract infection in intensive care unit Xing Shigang.
Linyi Central hospital, Yishui, Shandong Province 276400
【Abstract】Objective To explore the application effect of antibiotics step-down treatment and second-generation sequencing technology (NGS) in severe lower respiratory tract infection in intensive care unit. Methods 120 patients with severe lower respiratory tract infection admitted to our hospital from June 2017 to June 1818 were analyzed. The patients were divided into experimental group and routine group. 60 patients in each group. The routine group used the experience of meropenem. Broad-spectrum antibacterial therapy, the experimental group used NGS technology to determine the BALF and sputum to identify pathogenic microorganisms and then use the corresponding antibacterial drugs for treatment. Compare the treatment effects and adverse reactions between the two groups. Results The therapeutic effect of the experimental group was significantly better than that of the conventional group. The incidence of adverse reactions in the experimental group was lower than that in the conventional group, and the difference between the two groups was significant (P<0.05). Conclusion The second-generation sequencing technology in the treatment of severe lower respiratory tract infection can guide the application of antibacterial drugs and achieve precise treatment, thus reducing the drug resistance of drug-resistant strains and improving the therapeutic effect, which has high promotion value.
【Key words】Spectral antibacterial drug step-down treatment; NGS technology; Intensive care; Severe lower respiratory tract infection
近年来，随着临床器官移植、肿瘤化疗患者的增多，广谱抗生素、免疫抑制剂、抗肿瘤药物和化疗等临床治疗手段的广泛开展，以及我国人口老龄化进程加快，免疫受损病人数量日益增多，重症下呼吸道感染的比例呈明显上升趋势；与此同时，感染的病原微生物呈现多样化和复杂化，细菌耐药问题日益突出，重症下呼吸道感染的临床救治业已成为研究焦点。重症下呼吸道感染病原体通常不明确，当前主要采用抗原/抗体免疫学方法、传统微生物培养技术进行诊断，但这些方法多存在培养周期长、培养阳性率低的问题，同时非培养技术基于医务人员对疾病的倾向性诊断，复杂疑难感染性疾病对病原普全面检测需要通常无法得到满足。二代测序技术是新型DNA/RNA测序方法，一方面具有更高通量和测速速度，另一方面理论上能够将所有潜在病原体无偏倚检测出来，所以在重症下呼吸道感染诊断中该技术具有重要应用价值。本研究选择我院收治重症下呼吸道感染患者120例，随机分为实验组和常规组，常规组采用美罗培南降阶梯经验性广谱抗菌治疗，实验组采用NGS技术测定BALF和痰液明确病原微生物后选用相应的抗菌药物进行治疗。
1.资料与方法
1.1 一般资料
本次研究分析我院收治的120例重症下呼吸道感染患者，男性患者75例，女性患者55例，患者最小年龄28岁，最大年龄67岁，平均年龄（48.14±4.84）岁。将患者分成实验组和常规组，两组各60例，两组患者临床资料差异无统计学意义，具备可比性（P＞0.05）。
1.2 方法
1.2.1常规组治疗
常规组患者采用美罗培南进行治疗，采用静脉注射的方式，将100ml 5%的葡萄糖溶液与0.45g美罗培南混合，每天2～4次，连续治疗两周。
1.2.2实验组检测和治疗
（1）样本护理和DNA提取：取0.5～3ml痰夜，经玻璃珠混合震荡后依据TIANamp Micro DNA Kit试剂盒步骤提取DNA。（2）文库构建和测序：应用Agilent 2100 Bioanalyzer质控文库片段大小，应用Qubit dsDNA HS Assay Kit质控分析DNA文库浓度，环化形成单链环形结构。文库环化后经滚环复制生成DNB纳米球，将其加载到测序芯片，通过BGISEQ-500测序。（3）数据分析：将长度小于35bp和低质量数据去除，通过BWA对比，去除高质量数据中比对上人参考基因序列，剩下数据将低复杂度reads去除后，和专用微生物大数据比对，按照细菌、病毒、真菌、寄生虫将比对后数据进行分类和排列。依据检出毒力基因、耐药基因的信息应用抗菌药物治疗。
1.3 观察指标
对两组患者的治疗效果和不良反应发生情况进行对照。
1.4 疗效判定标准
患者下呼吸道感染症状完全消退，生命体征正常为有效；患者下呼吸道感染症状得到改善，生命体征正常为改善；患者下呼吸道感染症状没有任何改善，生命体征不正常为无效。
1.5 统计学方法
本次研究采用SPSS22.0进行相关数据分析，采用标准差进行计量资料分析，采用（%）进行计数资料分析，结合χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。
2.结果
2.1 两组临床治疗效果对照
实验组的治疗有效率高于常规组，差异明显（P＜0.05）。结果见表1。
表1 两组临床治疗效果对照
3.讨论
重症下呼吸道感染在重症监护病房具有较高发生率，该患者发病后需及时接受有效治疗，否则会严重威胁患者健康和安全。下呼吸道感染的症状包括呼吸短促、虚弱、发烧、咳嗽和疲劳[3]。有许多症状符合下呼吸道感染的特征，最常见的两种是支气管炎和水肿，流感也对上呼吸道和下呼吸道产生影响。具体治疗中医生应该在掌握导致感染的病原体的基础上，合理的采用抗菌药物[2]。临床治疗中一般都是采用抗生素治疗，但是医院内大量的使用头孢菌素，导致假单孢铜绿杆菌的耐药性增强，在治疗中更加困难。所以，在采用抗生素治疗前，首先应明确病原体，并依据毒力基因、耐药基因确定治疗方案。
重症下呼吸道感染病原体通常不明确，当前主要采用抗原/抗体免疫学方法、传统微生物培养技术进行诊断，但这些方法多存在培养周期长、培养阳性率低的问题。二代测序技术是新型DNA/RNA测序方法，该技术基于对核酸分子的检测，敏感性高，耗时短，不依赖于传统的病原学培养，前期抗生素应用对检测影响小；能够同时检测细菌、真菌、病毒、寄生虫等各类病原体，特异性高，同时可以检出毒力基因、耐药基因的信息；检测通量极大，一次可以检测出超过1千万条序列，理论上检测病原体通量可以达到1千万；不仅可以发现已知病原体，而且可以发现完全未知的病原体。
本研究中，实验组采用NGS技术测定BALF和痰液明确病原微生物后选用相应的抗菌药物进行治疗。实验组治疗效果明显好于常规组，实验组不良反应发生率低于常规组，两组差异显著（P＜0.05）。可见，在重症下呼吸道感染治疗中采用二代测序技术，可以指导抗菌药物应用，做到精准治疗，从而降低耐药菌株的耐药性，提升治疗效果，具有较高推广价值。
【参考文献】
[1]王海燕,王永秀.抗生素降阶梯治疗在救护重症监护病房重症下呼吸道感染中的应用[J].中国实用医药,2017,12(27):129-130.
[2]李勇.呼吸重症监护病房重症下呼吸道感染的抗生素降阶梯治疗[J].中国现代药物应用,2014,8(10):99-100.
[3]欧阳舟.呼吸重症监护病房重症下呼吸道感染抗生素降阶梯治疗效价研究[J].赣南医学院学报,2013,33(03):388-389.
[4] Jain S, Self WH, Wunderink RG, Fakhran S, Balk R, Bramley AM, et al. Community-Acquired Pneumonia Requiring Hospitalization among U.S. Adults. The New England journal of medicine. 2015;373(5):415-27.
课题名称：基于二代测序技术的BALF病原学检测在重症下呼吸感染中的应用评价（课题编号：201818036）.
作者简介：邢士刚（1980.07-）,男，汉族，山东莒南人，硕士，科室：呼吸内科，职称：主治医生.
论文作者:邢士刚
论文发表刊物:《医药前沿》2018年31期
论文发表时间:2018/12/5
标签：重症论文; 实验组论文; 呼吸道感染论文; 患者论文; 病原体论文; 常规论文; 技术论文; 《医药前沿》2018年31期论文;