摘要 目的 探讨冷冻切片制作过程中的影响因素，提高冷冻切片的质量。方法选取我院2015年7月-2015年12月术中不同类型的标本1320例，在经过取材，染色，切片，封片等不同步骤中的分析，阐述可能出现的问题，从而探讨冷冻制片过程中容易出现的问题及可以避免的方法。结果 对于不同组织的冷冻制片，适用不同的方法，可以使得组织结构完整，光镜下颜色鲜艳，符合病理医师的诊断要求。结论 不同来源的组织因为自身组成成分的不同，采用合适的方法进行冷冻切片，可以获得满意的效果。
关键词 冷冻制片；温度；维护
冷冻切片是利用冷冻机将组织快速冷冻达到一定的硬度，再使用冷冻机中的切片机进行切片，染色，省去常规制片过程中的脱水、透明等步骤，使得术中病人得到及时、准确的结果，是手术中进行性诊断的最关键的步骤，医生要根据冷冻结果对患者手术方式进行快速的决定，特别是我们的病理诊断医师[1]要根据切片进行准确诊断，这就需要病理技师和病理医师要有很强的专业知识和专业技术，然而制作出质量欠佳的切片则会导致诊断的失误，这就需要我们从接受到手术标本之后就要保持严谨的态度从取材到最后封片，同时也需要病理技术人员熟练掌握冷冻制片技巧，才能制作出优秀的切片现将我个人经验的总结如下
冷冻制片的过程大致分为以下几个步骤
1.材料与方法
1.1材料 我院病理科使用的机器是赛默飞世尔NX50，标本为术中取下的新鲜手术标本1320例，包括乳腺、甲状腺、子宫、淋巴结，使用莱卡OCT胶。
1.2.1方法 根据病变部位的程度，取材大小在2×2×0.3cm，厚度一定要保持均匀，在取材过程中尽量避免脂肪组织、钙化区。
1.2.2组织的包埋：冷冻托要保持干燥，将OCT胶挤少量于冷冻托上，并把组织的病变部位向上放于冷冻托上，尽量使OCT胶覆盖组织，但不能将OCT胶加太多，这样在冷冻过程中会延长时间。
1.2.3箱体的温度：不同的组织适用于不同的温度控制，经过多年的冷冻经验，大致温度分为：①甲状腺，脑组织，肺，肝，脾为-17℃~-19℃②淋巴结为-15℃③乳腺，子宫，胃肠，皮肤为-23℃~-26℃④乳腺中的脂肪或脂肪瘤为-40℃
1.2.4组织的切片：将放有组织的冷冻托放入冷冻箱后通过观察窗及时观察组织的变化，大部分的组织变色从周边开始向中心变化，总结除脂肪外，组织变色在组织中心未完全变色开始前，将固定冷冻托组织的长轴与切片刀保持垂直，开始粗修组织块，至组织全层暴露，用细修的方式修3-5次后，放下防卷板，一般4-5μm，制作出一张完整的切片，由于脂肪组织特殊的致密度，一般制9~10μm左右厚度的切片。特别注意的是，在取材医生发现组织有特别需要注意的时候要和技术员及时沟通，例如微小癌，在冷冻箱冻过之后，整个组织呈现灰白色，切片时难以发现病变部位，如不特别叮嘱，在切片时很容易将癌组织切掉，并且刀片要保持锋利，才能切除完整，均匀的组织，刀片使用钝后，切出的组织容易破碎，皱褶，卷曲，染色后病理医师无法准确诊断。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆
1.2.5染色的注意，切下的组织要迅速放入AAF固定液（乙醇、乙酸、中性甲醛）中，固定1min中，苏木精染色3min中，注意苏木精液体每天使用前用滤纸将其过滤一遍，防止苏木精产生的结晶附着在组织上导致结果的误判，1%的盐酸酒精分化10s，放入水浴锅中进行反蓝，水溶性伊红染色15s，分别进入75%的酒精、85%的酒精、无水酒精、二甲苯（最好有两缸）中各10s。染液一定要及时更换，如果每天染色量在20张左右，建议每5天全部更换一次，为了加快返蓝的速度，增加水浴锅一台，温度保持在40~45℃。
1.2.6封片的体会 封片时，滴加中性树胶应适量，不宜过多，会溢出盖玻片，影响整体的外观，同时容易污染病理医师的显微镜，也不宜过少，组织未完全覆盖会降低切片的折光率，无法诊断，在透明后，因有少量二甲苯残留在载玻片上，为了利于完整封片，可用吹风机快速吹干。
2结果 对于不同来源的组织应使用不同的方法[2]，主要有对时间、温度的掌握和切片过程中使用的方法，使用正确的方法会使组织染色清晰，细胞形态正常。
3日常维护 不同组织对于温度的要求不同，基本都在-15℃~-40℃之间，如果冷冻的时间不够或者温度不达标，切片会出现皱褶、结晶、组织挤压、细胞重叠，导致重新取材，延误患者的诊断时间，所以调整好冷冻切片机的工作状态，更好的为患者服务。
3.1冷冻切片机应该专人使用和维护，每天使用清洁液擦拭机器表面，对机器外表被组织污染的地方使用70%的酒精进行擦拭，保持机器周围环境的清洁，每天下班后清理机器内部的组织碎屑，对冷动台、刀架及玻璃盖板用毛刷清洁干净，
3.2定期检查刀架、夹头、玻璃盖白有无松动，及时使用内六轮扳手上紧螺丝，保证切片的完整。
3.3长假休息时关闭电源后，打开窗户，防止霜融化时产生的水汽使机器中的零件生锈，下班时关闭窗户，防止灰尘进入机器，磨损零件。
3.4每天下班前半个小时打开紫外灯，消毒30min左右，保护切片机使用者
3.5一般情况下，冷冻切片机不宜关机，实行24h运转，并且温度一般设置在-20℃左右，没有特殊的组织，尽量不要调节机器的温度，因为经常进行开关机，缩短冰冻切片机的使用寿命。
3.6每例冰冻做完以后，盖好冷冻机机盖，以防止机箱内温度不均衡，并锁好轮锁，防止做下例冰冻，划伤手臂，全部切片完成后按控制面板上的键盘锁按钮将屏幕锁定。
3.7夏天在没有空调制冷的房间内，要注意每周将机器背后的灰尘清扫干净，以防影响散热器的工作，并且保持机器与四周墙壁的距离，有利于机器的散热，经常对各个机器活动的部位进行润滑，保证机器能够良好的运转。
3.8有条件的情况下，在冷冻室配备急救药箱，内含消毒药品及消毒器具，由于冷冻组织都是新鲜的标本，未进行固定，常常会有结核、梅毒等传染病例的冰冻，如果不慎伤到手，可以及时进行消毒，并且要定期进行体检。
参考文献
[1]罗才顺，介绍高质量冷冻切片的制作方法及体会，医药前沿，（2012）09-0321-01
[2]赫丽，张意平，肖同浩. 制作冷冻切片的几点技巧[J]. 临床与实验病理学杂志，1996，3，258
[3]吕维宇，牟博，陈国 .医用冷冻切片机的维护保养及常见故障应急处理[J].中国医学装备部，2015,12（12）：155-156.
论文作者:韩磊
论文发表刊物:《医师在线（学术版）》2019年第16期
论文发表时间:2019/10/28
标签：组织论文; 切片论文; 机器论文; 切片机论文; 病理论文; 温度论文; 苏木论文; 《医师在线（学术版）》2019年第16期论文;