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摘要：目的 建立重组人粒细胞刺激因子注射液（rhG-CSF）甘露醇含量测定方法，并进行验证。 方法 采用比色法测定重组人粒细胞刺激因子注射液(rhG-CSF）中甘露醇含量。 结果 重组人粒细胞刺激因子注射液(rhG-CSF）中甘露醇含量与其相应的吸光度呈线性关系，线性范围为30-70μg/ml，回收率为95%-105%，重复性RSD≤5%，中间精密度RSD≤5%，耐用性RSD≤5%。 结论 用比色法测定重组人粒细胞刺激因子注射液(rhG-CSF）中的甘露醇含量，简单快捷，回收率高，重现性好及专属性好，耐用性高，可用于测定重组人粒细胞刺激因子注射液(rhG-CSF）中的甘露醇含量。
关键词: 重组人粒细胞刺激因子注射液；甘露醇含量；比色法。
重组人粒细胞刺激因子注射液（rhG-CSF），通用名非格司亭（filgrastim）,是采用基因重组技术生产的重组蛋白质药物，其主要用于因癌症化疗等原因造成的中粒细胞减少症[1]。《中国药典》2015版中没有规定其甘露醇含量的测定方法，因此为了更好的控制产品质量，按照验证指南的要求[2]-【3】，初步建立了重组人粒细胞刺激因子注射液（rhG-CSF）甘露醇含量测定方法，并对其进行验证。
1 仪器试剂
1.1紫外分光光度计（PE Lambda25）
1.2 试剂配制
1.2.1 0.1mg/ml甘露醇标准溶液：精密称取甘露醇标准品50mg，溶于注射用水中，定容至50ml，得到1mg/ml的甘露醇标准溶液，临用前稀释至0.1mg/ml。
1.2.2 显色剂：0.015mol/L高碘酸钠溶液：称取高碘酸钠3.2g，溶于0.12mol/L盐酸溶液，定容至1000ml。
1.2.3 0.1%L-鼠李糖溶液：称取1g鼠李糖，溶于注射用水中，定容至1000ml。
1.2.4 Nash试剂：取150g醋酸铵，2ml冰醋酸，2ml乙酰丙酮，用注射用水稀释至1000ml,临用前配制。
2 实验方法
2.1线性范围 分别精密量取0.1mg/ml甘露醇标准溶液0.3ml, 0.4ml, 0.5ml, 0.6ml, 0.7ml, 然后补水至1ml,分别加入1ml 0.015mol/L高碘酸钠溶液，混匀，室温放置10min，加入2ml0.1%L-鼠李糖溶液,混匀，然后加入4ml Nash试剂，混匀，53℃水浴加热15min，冷却至室温，于412nm波长处测定吸收值，以甘露醇标准溶液浓度与其相对应的吸光度计算线性回归方程[4]-【5】。
2.2 准确度 将重组人粒细胞刺激因子注射液的甘露醇浓度稀释至50μg/ml，取1.0ml按照测定方法进行测定，然后取稀释好的供试品溶液0.5ml及浓度为50μg/ml的标准溶液0.5ml混匀，按照测定方法进行测定，计算回收率。
2.3 重复性 取3批重组人粒细胞刺激因子注射液，重复测定3次，计算RSD%。
2.4 中间精密度 三个人员将3批重组人粒细胞刺激因子注射液每人各测三次，计算RSD%。
2.5 耐用性3批重组人粒细胞刺激因子注射液进行测定时，分别在不同的温度下即51℃,53℃,55℃进行水浴加热，测定其结果。
2.6 专属性 取1批重组人粒细胞刺激因子注射液1.0ml按照测定方法进行测定，确定重组人粒细胞刺激因子中的辅料对甘露醇测定无干扰。
3 实验结果
3.1 线性范围
由表3可得比色法测定重组人粒细胞刺激因子注射液的甘露醇含量重复性RSD≤5%，重复性良好。
3.4 中间精密度
由表6可得供试品溶液中甘露醇含量为0 ug/ml，说明重组人粒细胞刺激因子注射液中的辅料对甘露醇测定无干扰。
4 讨论
由于重组人粒细胞刺激因子注射液中辅料较多，对于采用比色法测定其甘露醇含量的可靠性需要大量的验证与考察，因此本实验对曲线范围，方法的准确度，重复性及中间精密度，专属性及耐用性方面做了大量工作对此方法进行考察，结果表明比色法适用于重组人粒细胞刺激因子注射液甘露醇含量测定，且准确可靠。
参考文献：
[1] 国家药典委员会编.《中国药典》2015年版 三部[S].北京化学工业出版社，重组人粒细胞刺激因子注射液，341-342.
[2] 《药品生产验证指南》（2003年版）《检验方法验证》,164页.
[3] 国家药典委员会编.《中国药典》2015年版 三部[S]. 北京化学工业出版社，9101药品质量标准分方法验证指导原则，通则213-216.
[4] 李雪芹,包天桐,王雁.比色法测定冬虫夏草中甘露醇的含量[J].中草药,1999,30（1）：722.
[5] 李雪芹, 张磊, 熊功友.比色法与容量法测定冬虫夏草中甘露醇含量比较研究[ J] .九江医学, 1998, 13(4):200.
作者简介：赵楠，女，助理工程师，研究方向：生物制药工程；通讯作者：连燕娜，女，助理工程师，研究方向：生物制药工程；洪庆福，男，高级工程师，研究方向：生物制药工程。
论文作者:赵楠 连燕娜通讯作者洪庆福
论文发表刊物:《中国医学人文》2017年第5期
论文发表时间:2017/7/21
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