（广西医科大学基础医学院 广西 南宁 530000）
【摘要】目的：分析利用实时定量PCR检测的方法检测胰岛素和高糖对巨噬细胞ACAT-1表达的影响。方法：将胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT-1，但是每次的时间不相同，分别为0小时、6小时、12小时、24小时及48小时，然后用实时定量PCR的方法进行检测，观察其产生的影响。结果：胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT-1不同的时间，12小时后的表达量要显著高于0、6、24及48小时的表达量（P＜0.05）；而48小时的表达量和0小时的表达量相比，无显著差异（P＞0.05）。结论：胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT-1将在12小时达到高峰，然后再逐渐下降，在48小时下降到0小时的水平。
【关键词】实时定量PCR检测；胰岛素；高糖；巨噬细胞ACAT-1；表达水平；影响
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）14-0043-01
据调查可知，近年来我国的糖尿病患者急剧增加，研究发现，糖尿病的发病机制和人体内的胰岛素缺陷有一定的关系，人体内的胰岛素缺失会使得血液中的葡萄糖浓度远远高于机体的耐受点，从而使得患者出现蛋白质和脂肪的代谢紊乱，而且还会使得患者的心血管、肾、眼睛以及神经系统等受到不同程度的损伤[1]。糖尿病患者往往具有较高的胰岛素血症和较高的血糖，胰岛素血症会影响巨噬细胞ACAT-1，为了探索胰岛素和高糖对巨噬细胞ACAT-1的影响，结果如下。
1.资料与方法
1.1一般资料
实验中的胰岛素、高糖都采购于sigma公司，实时定量PCR试剂盒选购的是来自芬兰的公司，DNA试剂盒来自Vgene，逆转录聚合酶链反应试剂盒来自日本，其余的都来自中国。
1.2方法
胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT-1分别为0小时、6小时、12小时、24小时及48小时。第一步进行细胞培养；第二步进行DNA样品制作；第三步进行设立以及合成引物；第四步进行制备标准品以及阳性对照品；第五步就是进行实时定量PCR检测。
1.3统计学方法
应用SPSS21.5统计学方法，用x-±s表示计量资料，行t检验，差异具有统计学意义时，P＜0.05。
2.结果
2.1在不同时间段里胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT～1的表达量比较
胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT-1不同的时间，12小时后的表达量要显著高于0、6、24及48小时的表达量（P＜0.05），有统计学意义；而48小时的表达量和0小时的表达量相比，无显著差异（P＞0.05），见表。
表 在不同时间段巨噬细胞ACAT-1的表达量比较（x-±s）
不同时间段（h）表达量
039.75±2.46
6121.78±3.89
12384.53±11.86
24111.75±9.85
4840.76±2.88
P＜0.05
3.讨论
ACAT对人体胆固醇的形成、运输、吸收以及储存都有非常重要的关系，是人体不可缺少的一种酶[2]。ACAT可以分成ACAT-1和ACAT-2，巨噬细胞主要是ACAT。糖尿病患者往往具有高胰岛素血症，高胰岛素血症会影响ACAT-1这种酶的活性，从而使得胆固醇酯变化为泡沫，进一步促进动脉粥样硬化[3]。
实时定量PCR检测是临床上提出的一种新型的检测方式，主要特征就是在PCR检测中加入了荧光因子，然后利用荧光信号监测产物的数量，最后定量分析根据标准曲线得出的模板，从而提高了检测的准确度[4]。实验中所有的操作过程中都应在密封的封闭管中进行，由于操作环境有所限制，就避免了很多的交叉感染，整个操作过程干净整洁，不破坏原有的结果，进一步提高了检测结果的准确度。而且实时定量PCR检测和以往的PCR检测操作更加简单方便，灵敏度更高，重复性更好，检测迅速，更加卫生[5]。因此，在临床上实时定量PCR检测已经逐渐取代以往的PCR检测。
这次实验就讨论了胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT-1时，不同时间段的表达量，结果可知，胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT-1不同的时间，12小时后的表达量要明显高于0、6、24及48小时的表达量（P＜0.05）；而48小时的表达量和0小时的表达量相比，无显著差异（P＞0.05）。这说明胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT～1时在刚开始的表达量最低，然后逐渐上升，在12小时达到巅峰，之后又逐渐下降，在48小时的表达量已经下降到同0小时的表达量。
综上所述，胰岛素和高糖共同作用于巨噬细胞ACAT-1将在12小时达到高峰，然后再逐渐下降，在48小时下降到0小时的水平。
【参考文献】
[1]陈燕辉，匡庆贵，朱三玲，等.饮食营养护理结合健康宣教对社区2型糖尿病患者的影响[J].中国医药科学，2016，6（7）:121-122.
[2]刘晓宁.益气养阴活血中药治疗早起糖尿病肾病60例临床观察[J].中国医药指南，2017，15(6)：193-194.
[3]李雨纯.实时荧光定量PCR在流感病毒核酸检测中的应用[J].中国城乡企业卫生，2016，12：37-38.
[4]周洪国，刘保华，范荣军，等.两种Real-TimePCR试剂在甲乙型流感检测中的应用[J].中国公共卫生管理，2017，33（4）：503-504.
[5]周雪花.实时荧光定量PCR检测在流感病毒核酸检测中的应用[J].中国卫生产业，2014，28（39）：178-179.
论文作者:夏露,蓝秀万（通讯作者）
论文发表刊物:《医药前沿》2019年14期
论文发表时间:2019/7/17
标签：胰岛素论文; 小时论文; 巨噬细胞论文; 定量论文; 实时论文; 作用于论文; 方法论文; 《医药前沿》2019年14期论文;