一、人线粒体肌酸激酶广泛型亚型的原核表达、抗体制备及其临床应用意义（论文文献综述）
罗喜俊,何嘉琳,梁俊杰,朱显军,梁伟雄,唐兴奎[1]（2019）在《实时荧光定量PCR检测结直肠腺癌患者组织中广泛型线粒体肌酸激酶基因的表达》文中研究指明目的:分析实时荧光定量PCR检测结直肠腺癌患者组织中广泛型线粒体肌酸激酶（uMtCK）基因的表达。方法:选取2016年1月至2017年12月在广州市番禺中心医院治疗的98例结直肠腺癌患者作为研究对象,另选取同期100例健康体检者作为对照组,采用实时荧光定量PCR检测患者肿瘤组织及癌旁组织的uMtCK mRNA的表达。结果:结直肠腺癌患者肿瘤组织中均存在uMtCK mRNA表达,其范围为7.5×105～5.3×108拷贝μg RNA,平均（9.2±5.8）×106拷贝μgRNA;结直肠腺癌患者癌旁组织中的uMtCK基因表达为4.4×103～6.8×105拷贝μgRNA,平均（8.5±3.2）×104拷贝μgRNA。与对照组比较,差异均有统计学差异（P<0.05）。结论:结直肠腺癌患者组织中uMtCK mRNA含量升高,实时荧光定量PCR检测结直肠腺癌患者组织中uMtCK基因的表达,其最终结果可采用绝对拷贝数表示,定量结果准确可靠。
丁洁[2]（2016）在《人血管内皮钙粘蛋白CDH5单克隆抗体的制备及其功能研究》文中研究说明目的:本研究旨在应用小鼠杂交瘤技术制备能够识别人血管内皮钙黏蛋白（vascular endothelial cadherin,VECDH5）,以下称CDH5蛋白的单克隆抗体,探讨CDH5在肿瘤组织中的表达及单抗的相关功能,并且进一步研究CDH5与肿瘤新生血管的关系,为后续相关研究提供实验基础。同时建立检测人血浆可溶性CDH5双抗体夹心ELISA方法,为疾病的诊断及预后评估提供更好的临床检验方法。方法:采用PCR技术体外扩增CDH5胞外区基因片段,将该片段插入带有His标签的原核表达载体p ET-41a,诱导表达,采用Ni-NTA柱亲和纯化CDH5重组蛋白,采用紫外分光光度计、SDS-PAGE电泳及考马斯亮蓝染色分析蛋白质浓度和纯度;利用经典杂交瘤技术制备抗CDH5的单克隆抗体,通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、蛋白质免疫印迹（Western Blot）、免疫荧光（Immunofluorescence）和免疫组化（Immunohistochemistry）方法验证单抗与CDH5的特异性结合能力;利用p ET-41a载体分段表达CDH5胞外区,通过Western Blot初步确定单抗抗原表位所在区域,利用该区域合成肽进行斑点印迹（Dot Blot）及竞争法ELISA进一步分析单抗表位;所制备的单抗行免疫组化检测CDH5在各种类型肿瘤标本中的表达;体外3DMatrigel血管形成实验探究CDH5单抗对肿瘤血管新生及血管生成拟态（Vascular mimicry,VM）的作用;细胞黏附实验、CCK-8检测单抗对细胞黏附、细胞增殖的影响;Western Blot检测PI3K/AKT/β-catenin信号通路中相关蛋白的表达;选取效价和亲和力较高的几株单抗,采用棋盘格滴定法筛选出最佳双抗体组合,建立检测人血浆可溶性CDH5双抗体夹心ELISA方法,并进行方法学评价。结果:1.成功构建了p ET-41a/CDH5-N-ter重组质粒,诱导CDH5-His重组蛋白表达,大小约70 k Da,与预期大小一致,经纯化后考马斯亮蓝染色显示蛋白纯度高,能用于免疫小鼠。2.杂交瘤细胞经间接ELISA检测成功筛选出一株功能性单抗2C11,抗体效价为1:8000。Western Blot、免疫荧光及免疫组化方法提示单抗2C11能够特异性识别天然CDH5蛋白,且CDH5定位于内皮细胞的细胞连接处并在黑色素瘤中存在表达;为鉴定抗原表位,正确构建了p ET41a/CDH5胞外区重组质粒用于分段表达CDH5 N端蛋白,考马斯亮蓝染色显示诱导细菌裂解后上清蛋白大小与预期一致,Western Blot显示2C11能够识别CDH5蛋白第351-456个氨基酸组成的蛋白,进一步的Dot Blot法显示2C11的抗原表位位于LDREVVPWYNLTVEA。3.免疫组化结果显示,CDH5在人肾癌、肠癌和肺癌组织均有表达;体外3DMatrigel血管形成实验证实该单抗相较于阴性对照组具有抑制肿瘤血管形成的能力（P<0.05）;细胞黏附实验说明该单抗相较于对照组具有降低细胞黏附能力的作用（P<0.05）;CCK8实验结果表明单抗2C11能抑制细胞增殖（P<0.05）;Western Blot实验显示P-AKT和β-catenin水平下降（P<0.05）。4.与此同时,通过筛查配对,选取4E6和9A6两株单抗成功建立检测人血浆可溶性CDH5的双抗体夹心ELISA方法,该法的检测限为24.7 pg/ml,批内变异系数（CV）为4.1%-7.7%,批间CV为8.7%-10.8%,平均回收率为96.7%。结论:（1）利用杂交瘤技术成功制备了一株效价高、特异性好的单克隆抗体2C11,可用于Western Blot、免疫荧光和免疫组化检测CDH5的表达情况,并成功鉴定出抗原表位。（2）CDH5在肾癌、结肠癌、黑色素瘤中均存在表达,同时筛选出CDH5在肺腺癌细胞株中存在表达,单抗2C11具有抑制肿瘤细胞增殖的能力。单抗的功能研究说明2C11在体外能抑制肿瘤血管生成。此过程涉及到VM的发生发展,相关蛋白分子表达水平的检测提示CDH5作为VM发生发展的重要环节,影响细胞的增殖从而进一步参与肺癌的发生发展过程。（3）建立的双抗体夹心ELISA试剂盒有较好的灵敏度及特异性,可用于人血浆中可溶性CDH5含量的检测,并可作为肿瘤诊断的一种新检测手段。
张健,简敏华,蒋玲丽,葛丹红[3]（2013）在《双抗体夹心ELISA测定人广泛型线粒体肌酸激酶方法的建立》文中认为目的建立测定人血清广泛型线粒体肌酸激酶（uMtCK）浓度的双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法应用原核表达的uMtCK重组蛋白免疫小鼠获得7株单克隆抗体,采用棋盘格滴定法筛选出最佳双抗体组合,其中抗体19F11进行辣根过氧化物酶（HRP）标记作为检测抗体,抗体3C1作为俘获抗体,建立检测人uMtCK双抗体夹心ELISA方法,并进行方法学评价。同时采用该法检测50名健康体检者和85例肿瘤标志物[甲胎蛋白（AFP）或癌胚抗原（CEA）]阳性患者的血清。结果通过筛查获得配对抗体,建立检测人uMtCK的双抗体夹心ELISA方法。该法的检测限为28.8 ng/mL,批内变异系数（CV）为4.5%～7.7%,批间CV为8.2%～13.5%,平均回收率为97.1%。用该法检测50名健康体检者血清uMtCK浓度,结果均为阴性;85例肿瘤标志物阳性患者中有15例检出uMtCK,浓度为52.8～1 442.2 ng/mL。结论建立的双抗体夹心ELISA可以用于测定人血清uMtCK浓度。
施剑,叶素贞,黄汉津[4]（2012）在《浅谈肌酸激酶同工酶与精神疾病的关系》文中提出Hippius和Bengzon[1]于1966年首次报道了精神分裂症病人血清肌酸激酶（creatine kinase,CK）升高。当时认为CK的升高是精神分裂症的生物学标志,是精神分裂症的内在表现,可能是精神分裂症的致病因素。这一现象的发现激起了精神病学工作者的浓厚兴趣。此后国内外学者纷纷开展了关于CK活性升高与精神疾病、抗精神病药
王爱华,顾鹏飞,屠小卿,耿红莲[5]（2007）在《巨分子酶的临床意义》文中研究说明血清中有时可出现相对分子质量远大于正常酶分子的一些酶,通常称为巨分子酶,简称为巨酶（macroenzyme）。巨酶因其分子量大,在体内不易排出,也不易被巨噬细胞系统吞噬而降解,又因其有较长的半衰期,故在血中存留时间较长,它的存在将会严重干扰临床常规酶测定的正确性,极易造成对酶测定结果的错误判断和临床误诊。过去对此认识不够,在研究方法上也存在许多困难,故资料较少。随着
弭守玲[6]（2007）在《老年大鼠心肌线粒体的蛋白质组学研究及差异蛋白的功能分析》文中指出近年来，关于衰老方面的研究已成为全世界范围的热点问题。线粒体功能和衰老的发展过程密切相关。首先，线粒体产生自由基，又是氧化损伤的靶标，衰老的心肌产生活性氧（reactive oxygen species，ROS）增加，可导致线粒体膜电位丧失和心肌凋亡；其次，衰老的心脏、骨骼肌、肝脏组织中存在线粒体DNA缺失和突变。线粒体DNA损伤能诱导呼吸链复合体的多肽改变，电子传递下降，ROS产生进一步增加；再次，衰老的心脏线粒体的转录和翻译活性受损。比较蛋白质组学作为多基因、多因素复杂病理机制研究的有效手段，可高通量、大规模地筛检在疾病发生发展中起重要作用的关键蛋白质分子，运用该研究策略，可获得一些传统手段无法得到的新蛋白标志物，新关键分子，极大地丰富了诊断标志物的选择组合及复杂致病机理的全面阐明。目前关于老年大鼠心肌线粒体的蛋白质组学及差异蛋白功能分析的研究国内外尚无报道。本研究通过对新生期，成年期，老年期三个不同发育阶段SD大鼠心肌线粒体的全蛋白质组表达谱进行差异分析，筛出了一些差异蛋白质，并对其中的差异分子乙醛脱氢酶2（Aldehyde dehydrogenase 2，ALDH2），用Western Blot，RT-PCR，基因转染等细胞和分子生物学技术进行了功能分析和验证。同时，对ALDH2基因多态性与长寿的相关性进行了研究。第一部分不同发育阶段SD大鼠心肌线粒体的比较蛋白质组学分析目的：建立并优化心肌线粒体蛋白质组研究的双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis，2-DE）技术平台；筛查心肌线粒体中与衰老相关的蛋白质。方法：将清洁级雄性SD大鼠随机分为新生（2天）、成年（10周）、老年（12月）三组，提取心肌线粒体，抽提线粒体全蛋白质行2-DE，对样品制备、上样量、电泳参数、不同固定方式、不同染色方法、不同裂解液等相关技术进行了优化。应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS）鉴定图像分析出的差异蛋白点，同时进行了心肌组织ATP含量的检测。结果：45％乙醇5％乙酸的固定液对蛋白质固定效果最好；胶体考染和快速银染都是较理想的染色方法；含9M尿素的裂解液抽提蛋白，2-DE图谱所得蛋白点最多；构建了心肌线粒体具有高度分辨率和高度重复性的2-DE图谱。图像分析示2-DE凝胶有1100个蛋白点，84个心肌线粒体蛋白表达发生改变，质谱鉴定了43个差异点。差异蛋白多和呼吸链功能，能量代谢，物质运输和应激反应有关。新生期心肌组织ATP含量最低（15.49±1.33.g ATP／g心肌），老年期心肌组织ATP含量较成年期下降（41.48±2.99 vs 59.64±2.68.gATP／g心肌，p＜0.01）。能量代谢的生化检测进一步证实了蛋白质组学的结果．结论：建立了SD大鼠心肌线粒体蛋白质组的2-DE分析技术。通过具有高度分辨率和高度重复性的2-DE图谱鉴定了SD大鼠心肌线粒体中在老年期差异表达的蛋白质，这些差异蛋白为深入理解衰老的分子机制提供了有益的线索。第二部分差异蛋白乙醛脱氢酶2的再验证及其对人胚肺成纤维细胞衰老进程的影响目的：为保证差异蛋白初筛结果的可信及下游分析的确定性，首先对差异蛋白ALDH2进行再验证，并探讨ALDH2在人胚肺二倍体成纤维细胞（MRC-5）衰老进程中的作用。方法：应用Western blot，RT-PCR检测不同发育阶段心肌线粒体中ALDH2在蛋白、mRNA水平的表达情况。通过构建腺病毒载体，使用含有ALDH2基因的腺病毒液将ALDH2基因导入MRC-5细胞中，并获得表达，通过检测衰老相关的。—半乳糖苷酶染色（senescence-associated—.—qalactosidae staining，SA—．—gal staining）、细胞内ROS水平和细胞周期观察其对MRC-5细胞衰老的影响。结果：Western blot，RT-PCR证实ALDH2的确在老年大鼠心肌线粒体中低表达。与对照组细胞相比，ALDH2基因导入后，MRC-5细胞的SA—.—gal染色阳性率下降，ROS水平较对照组下降（p＜0.01）。细胞周期未见明显改变。结论：ALDH2能延缓MRC-5细胞衰老的进程。第三部分ALDH2基因多态性与长寿的相关性研究目的：分析ALDH2在长寿人群中的基因型分布频率，进而探索ALDH2基因多态性和长寿的关系。方法：在山东省章丘市采集397名长寿老人和有非长寿家族史的161名60—75岁的对照组老人进行流行病学调查研究，并应用变性高效液相色谱（denaturing high-performance liquid chromatography，DHPLC）技术检测研究对象的ALDH2基因型。结果：长寿组ALDH2*1／ALDH2*1、ALDH2*1／ALDH2*2和ALDH2*2／ALDH2*2三种基因型频率分别为65.7％，32.7％，1.5％。长寿组ALDH2*1和ALDH2*2等位基因的频率分别为82.12％和17.88％。长寿组基因型和等位基因的频率与对照组比较，均有显着性差异（p=0.001）。结论：ALDH2基因多态性与长寿现象有关联。结论1．建立了稳定，标准，适合自己实验室特点的2-DE技术平台。通过对2-DE相关技术的摸索和优化，发现并证实（1）胶体考染法和快速银染法均为较理想的染色方法；（2）45％乙醇5％乙酸的固定液对蛋白质固定效果最好，建议用于2-DE染色显示；（3）不同裂解液对最终蛋白斑点数影响较大。含9M尿素的裂解液处理线粒体获得蛋白斑点数最多。2．通过对不同发育阶段心肌线粒体的全蛋白质图谱进行比较，鉴定出43种差异显着蛋白，推测衰老与线粒体内多种差异蛋白相关。其中部分差异蛋白如ALDH2在老年期表达下降为最新报道。3．ALDH2基因的腺病毒液转染MRC-5细胞后，与对照组比较，SA—.—gal染色阳性率下降，细胞内ROS水平也下降。推测ALDH2能延缓MRC-5细胞衰老的进程。4．ALDH2基因多态性与长寿现象有关联。潜在价值和创新点1．我们首次通过比较蛋白质组学技术发现ALDH2在衰老时表达下调，并初步证实其具有延缓衰老的作用。2．通过对ALDH2的功能解析，首次发现ALDH2基因多态性与长寿现象有关联。该基因有可能成为延缓衰老的靶标。
张建,王爱华,顾鹏飞,于嘉屏[7]（2004）在《人线粒体肌酸激酶广泛型亚型的原核表达、抗体制备及其临床应用意义》文中认为目的:在大肠杆菌中克隆表达人线粒体肌酸激酶广泛型亚（uMtCK）的蛋白,免疫家兔制备抗uMtCK的多克隆抗体,检测胃肠肿瘤组织中uMtCK的表达。方法:采用RT-PCR从培养的肿瘤细胞（HeLa细胞）中成功扩增出1062bp的uMtCK基因片段,构建重组质粒pQE30-uMtCK,转化大肠杆菌表达酶融合蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE、Western印迹鉴定及酶活性测定。纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备了抗uMtCK多抗。免疫组化法检测59例胃及直肠肿瘤组织切片中uMtCK的表达。结果:RT-PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因;在大肠杆菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达。免疫家兔制备的抗uMtCK多抗经Western免疫印迹分析适合作uMtCK的进一步分析。免疫组化检测临床病理标本结果显示,59例胃及直结肠肿瘤标本uMtCK的阳性率为76.5％。结论:成功克隆了人uMtCK的编码基因,并将其在大肠杆菌中成功表达;制备了抗uMtCK多抗,免疫组化检测临床病理标本的结果提示uMtCK有助于胃肠肿瘤的诊断。
张建,王爱华,顾鹏飞,于嘉屏[8]（2004）在《人线粒体肌酸激酶广泛型亚型在大肠埃希菌中的表达及抗体制备》文中研究指明目的 获得人线粒体肌酸激酶广泛型亚型 （uMtCK）的全长基因 ,在大肠埃希菌中表达 ,研制抗uMtCK多克隆抗体。方法 采用逆转录PCR从培养的肿瘤细胞 （Hela细胞 ）中成功扩增出 10 6 2bp的uMtCK的基因片段 ,插入到质粒pMD18 T中 ,经酶切和测序证实为uMtCK的基因编码序列 ,再插入到质粒pQE30 ,转化大肠埃希菌 ,诱导重组质粒pQE30 uMtCK表达酶融合蛋白。经亲和层析纯化 ,并进行SDS PAGE、westernblot鉴定及酶活性测定。纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备抗uMtCK多抗。结果 RT PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因 ;在大肠埃希菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达 ,表达量约 17%。重组uMtCK具有CK样催化活性 ,表明原核表达的uMtCK具有类似于天然蛋白质的生物学活性。经免疫印迹分析 ,制备的抗uMtCK多抗适合作uMtCK的进一步分析之用。结论 人uMtCK在大肠埃希菌中实现了高效表达 ,制备了针对uMtCK的抗体。
张建[9]（2003）在《人线粒体肌酸激酶广泛型亚型在大肠杆菌中的表达及其抗体制备》文中认为肌酸激酶CK是体内能量代谢的关键酶，可逆的催化ATP和磷酸肌酸（PCr）之间高能磷酸键的转移。现已知存在五种组织和亚细胞定位特异的CK同工酶，既胞浆型的脑型肌酸激酶同工酶（CK-BB）、肌型肌酸激酶同工酶（CK-MM）、杂合型肌酸激酶同工酶（CK-MB）以及存在于线粒体的广泛型线粒体肌酸激酶（ubiquitous MtCK，uMtCK）和肌膜型线粒体肌酸激酶（sarcomeric MtCk，sMtCk）。在体内，线粒体肌酸激酶（MtCK）、胞浆型的CK、Cr及PCr共同组成了细胞内的能量缓冲和转移系统，即CK／PCr循环，对细胞和组织的能量代谢起关键的作用。CK胞浆型同工酶在临床上的诊断意义已被深刻研究且广泛使用，而于1964年被首次报道的MtCK尽管与胞浆型的肌酸激酶同工酶一样催化ATP和磷酸肌酸（PCr）之间高能磷酸键的可逆转移，但MtCK的一级结构、组织定位、动力学性质均与胞浆型的肌酸激酶同工酶不同，特别是其在某些肿瘤病人血清中的高检出率和近年来发现的其在线粒体膜上的与某些通道蛋白的相互作用的新功能引起了许多学者的广泛关注。本研究主要目的是获得uMtCK的融合蛋白制备抗体为今后进一步研究MtCK的在某些肿瘤病人血清中的高表达的原因及分析其是否具有作为检测肿瘤的血清学指标的价值，以及是否可以建立一种免疫学方法代替酶活性测定法而简便、快速的检测MtCK而用于肿瘤的诊断及监测预后。为达到这一研究目的，我们做了以下研究：1)扩增人线粒体肌酸激酶广泛型亚型（uMtCK）的全长基因，将其克隆插入质粒pQE30，构建原核表达载体pQE30-uMtCK质粒。2)在大肠杆菌中诱导表达uMtCK融合蛋白，纯化及鉴定其生物学活性。3)用纯化的uMtCK融合蛋白免疫动物，获得抗uMtCK的多克隆抗体。用自制的抗uMtCK的多克隆抗体检测肿瘤组织切片中的uMtCK。实验结果显示：1)从肿瘤细胞系（Hela细胞）扩增的uMtCK的全长基因与NCBI检索的uMtCK基因序列一致，将其克隆插入质粒而构建了表达载体pQE30－uMtCK。2)uMCK在大肠杆菌中获得了高效表达，且原核表达的uMtCK融合蛋白具有部分酶的生物学活性。3)原核表达的uMCK融合蛋白具有免疫原性，通过免疫兔而获得的抗uMtCK的多克隆抗体在琼脂糖免疫扩散实验和ELISA实验中的抗体效价分别为 1：16和 1：8000。51例胃及直结肠肿瘤标本的免疫组化结果显示：自制的兔抗uMtCK对肿瘤组织中uMtCK的检出率为厂6．5们，显着高于购买的商品化抗uMtCK和抗sMtCK的检出率（52．9％和45．l）。
二、人线粒体肌酸激酶广泛型亚型的原核表达、抗体制备及其临床应用意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人线粒体肌酸激酶广泛型亚型的原核表达、抗体制备及其临床应用意义（论文提纲范文）
（1）实时荧光定量PCR检测结直肠腺癌患者组织中广泛型线粒体肌酸激酶基因的表达（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 RNA的纯度和浓度 |
| 2.2 RT-PCR扩增片段以及pMD18-T-uMtCK质粒的鉴定 |
| 2.3 结直肠腺癌与健康者uMtCK mRNA比较 |
| 3 讨论 |
（2）人血管内皮钙粘蛋白CDH5单克隆抗体的制备及其功能研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 材料与方法 |
| 材料 |
| 实验方法和步骤 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 中英文缩写词表 |
| 致谢 |
（3）双抗体夹心ELISA测定人广泛型线粒体肌酸激酶方法的建立（论文提纲范文）
| 材料和方法 |
| 一、材料 |
| 1.样本来源 |
| 2.试剂和仪器 |
| 二、单克隆抗体制备 |
| 1.小鼠免疫 |
| 2.抗体效价测定 |
| 3.融合与克隆 |
| 4.抗体制备与纯化 |
| 三、u Mt CK-ELISA方法的建立和条件优化 |
| 1.抗体配对实验 |
| 2.最适包被单抗及标记单抗浓度的确定 |
| 四、u Mt CK-ELISA方法性能评估 |
| 1.标准曲线和检测限 |
| 2.分析精密度确定 |
| 3.回收试验 |
| 五、人血清u Mt CK检测 |
| 六、统计学方法 |
| 结果 |
| 一、u Mt CK-ELISA方法建立 |
| 1.单克隆抗体制备及抗体配对试验 |
| 2.最适包被单抗及标记单抗浓度的确定 |
| 二、u Mt CK-ELISA的方法学评价 |
| 1.标准曲线和检测限 |
| 2.精密度试验 |
| 3.回收试验 |
| 三、人血清u Mt CK水平测定 |
| 讨论 |
（4）浅谈肌酸激酶同工酶与精神疾病的关系（论文提纲范文）
| 1 CK-MB |
| 2 CK-BB |
| 3 CK-MM |
| 3.1精神疾病的激越与攻击行为与CK |
| 3.2 精神疾病中的肌肉微损伤 |
| 4 Mt CK |
（5）巨分子酶的临床意义（论文提纲范文）
| 1 巨肌酸激酶(MCK) |
| 2 巨乳酸脱氢酶(MLD) |
| 3 高相对分子质量碱性磷酸酶(HMW-ALP) |
| 4 巨天门冬氨酸转移酶(MAST) |
| 5 巨淀粉酶(MAMY) |
| 6 巨谷氨酰转移酶(Mγ-GT) |
（6）老年大鼠心肌线粒体的蛋白质组学研究及差异蛋白的功能分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 不同发育阶段大鼠心肌线粒体的比较蛋白质组学分析 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 差异蛋白ALDH2的再验证及其对人胚肺成纤维细胞衰老进程的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 ALDH2基因多态性与长寿的关联研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 |
| 发表论文 |
| 致谢 |
（8）人线粒体肌酸激酶广泛型亚型在大肠埃希菌中的表达及抗体制备（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要材料和试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 PCR引物设计 |
| 1.2.2 uMtCK的基因扩增 |
| 1.2.3 pMD18-T-uMtCK质粒的构建 |
| 1.2.4 pQE30-uMtCK重组质粒的构建 |
| 1.2.5 uMtCK融合蛋白的原核表达及纯化 |
| 1.2.6 uMtCK融合蛋白的酶活性测定 |
| 1.2.7 抗uMtCK抗体制备 |
| 2 试验与结果 |
| 2.1 uMtCK cDNA的扩增 |
| 2.2 pQE30-uMtCK重组质粒的转化和阳性克隆的筛选 |
| 2.3 重组蛋白表达和纯化 |
| 2.4 uMtCK融合蛋白的酶活性测定 |
| 2.5 抗uMtCK抗体的特异性检测 |
| 3 讨论 |
（9）人线粒体肌酸激酶广泛型亚型在大肠杆菌中的表达及其抗体制备（论文提纲范文）
| 英文缩写中英文对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 技术路线 |
| 第一部分 人uMtCK重组表达质粒的构建 |
| 第二部分 uMtCK融合蛋白的原核表达与纯化 |
| 第三部分 抗uMtCK多克隆抗体的制备、鉴定及初步应用 |
| 小结 |
| 综述 线粒体肌酸激酶研究进展 |
| 致谢 |
四、人线粒体肌酸激酶广泛型亚型的原核表达、抗体制备及其临床应用意义（论文参考文献）
- [1]实时荧光定量PCR检测结直肠腺癌患者组织中广泛型线粒体肌酸激酶基因的表达[J]. 罗喜俊,何嘉琳,梁俊杰,朱显军,梁伟雄,唐兴奎. 广州医科大学学报, 2019(03)
- [2]人血管内皮钙粘蛋白CDH5单克隆抗体的制备及其功能研究[D]. 丁洁. 苏州大学, 2016(01)
- [3]双抗体夹心ELISA测定人广泛型线粒体肌酸激酶方法的建立[J]. 张健,简敏华,蒋玲丽,葛丹红. 检验医学, 2013(10)
- [4]浅谈肌酸激酶同工酶与精神疾病的关系[J]. 施剑,叶素贞,黄汉津. 温州医学院学报, 2012(02)
- [5]巨分子酶的临床意义[J]. 王爱华,顾鹏飞,屠小卿,耿红莲. 现代检验医学杂志, 2007(04)
- [6]老年大鼠心肌线粒体的蛋白质组学研究及差异蛋白的功能分析[D]. 弭守玲. 复旦大学, 2007(06)
- [7]人线粒体肌酸激酶广泛型亚型的原核表达、抗体制备及其临床应用意义[J]. 张建,王爱华,顾鹏飞,于嘉屏. 第二军医大学学报, 2004(12)
- [8]人线粒体肌酸激酶广泛型亚型在大肠埃希菌中的表达及抗体制备[J]. 张建,王爱华,顾鹏飞,于嘉屏. 临床检验杂志, 2004(05)
- [9]人线粒体肌酸激酶广泛型亚型在大肠杆菌中的表达及其抗体制备[D]. 张建. 第二军医大学, 2003(04)