秦洁[1]2006年在《鸡胚胎原始生殖细胞建系能力的研究》文中认为胚胎原始生殖细胞(Embryonic Primordial Germ Cells,EPGCs)是生殖母细胞的前体细胞,是精子或卵子的祖先细胞,在多能干细胞研究领域中已成为一个新的干细胞资源,亦是近年来干细胞研究的又一个热点。基于目前国内外对鸡胚胎原始生殖细胞(EPGCs)正处于起步的研究现状,本研究对这一胚胎生殖系干细胞进行了系统的探索性研究。在鸡胚发育的第14期血液中、第19期和第28期的生殖腺中采用不同的分离提取方法分别获取EPGCs,并进行体外培养,以探讨分离培养EPGCs的适宜时期和方法;系统地探索了EPGCs的体外培养体系、传代方法和条件、不同冷冻体系对鸡EPGCs冷冻保存的效果以及外源性细胞因子mLIF、hSCF、bFGF和hIL-11对体外培养的鸡EPGCs增殖和分化的影响,以期筛选出鸡EPGCs合适的体外培养体系和冷冻保存条件;同时利用不同特异性化学物质定向诱导EPGCs向脂肪细胞、神经元样细胞分化,以及尝试对EPGCs单细胞进行体外培养克隆传代、检测其形态特征、表面标记及体外分化等特征特性,为建立EPGCs干细胞系以及体外研究胚胎发育、基因组学研究、药物筛选等提供有价值的参考依据。研究结果主要归纳为以下几个方面:1.采用Ficoll密度梯度离心法+酶解法、单独EDTA-酶解法两种方法,分别提取第14期血液(孵化53小时)、第19期(孵化72小时)和第28期(孵化132小时)生殖腺中的鸡EPGCs,比较在相同的体外培养条件下两种分离方法获取叁个发育时期的鸡EPGCs数量、存活率和存活时间的差异。结果表明:单独EDTA-酶解法
肖小珺[2]2004年在《鸡胚胎原始生殖细胞的冷冻保存和体外培养的研究》文中提出本研究采用Fieoll密度梯度离心提取发育至第19期和第28期鸡胚胎性腺中的原始生殖细胞(Primordial Germ Cells，PGCs)，在不同的冷冻保护液、同一种冷冻保护液的不同浓度、不同的冷冻保护程序下进行超低温冷冻保存，1周后复苏，并进行体外培养、分化试验，结果如下： 1．当各种冷冻保护剂的浓度为10％时，同一种冷冻保护液。冷冻程序Ⅰ和冷冻程序Ⅱ之间，PGCs的存活率存在显着(P＜0.05)或极显着(P＜0.01)差异。而同一种冷冻程序。冷冻保护液1、冷冻保护液Ⅱ、冷冻保护液Ⅲ、冷冻保护液Ⅳ、冷冻保护液Ⅴ、冷冻保护液Ⅵ之间存在显着(P＜0.05)或极显着(P＜0.01)差异，比较其结果显示冷冻保护液Ⅲ的保护效果最好。而在同一冷冻保存条件下，第19期和第28期性腺中的PGCs存活率差异不显着(P＞0.05)。 2．当冷冻保护剂的浓度为10％时，在其他冷冻保存条件相同的情况下，分离后直接进行冷冻保存的PGCs，复苏后的存活率极显着(P＜0.01)高于经体外培养24 h后再进行冷冻保存的PGCs。 3．同一种冷冻保存条件下，冷冻保护液不同的浓度之间表现为：10％浓度与15％浓度相比较，细胞的存活率除冷冻保护液Ⅳ外，其余差异不显着(P＞0.05)：20％浓度下，细胞的存活率最低，且与10％及15％浓度下的存活率相比存在显着(P＜0.05)或极显着(P＜0.01)差异。 4．PGCs复苏后，当把其培养在以DMEM为基础液，添加10％的胎牛血清、2％的鸡血清、2mmol／L谷氨酰胺、1mmol／L丙酮酸钠、5.5×10~(-5)mol／L β-巯基乙醇、100U／mL硫酸庆大霉素、以鸡胚成纤维细胞作饲养层的培养体系中时，PGCs可贴壁，并可聚集成细胞团，但不能克隆、增殖，继续培养下去，PGCs最终死亡。 5.PGCs复苏后，当把其培养在添加10%的胎牛血清、2%的鸡血清、2幻。roo比谷氨酞胺、1 mmo比丙酮酸钠、5，sxlo一smo比p一疏基乙醇、sng/inLhseF、一oul/mL毗正、long/mL bFGF、0.04ng/mL hIL一11、lon创mL IGF、100U加LL硫酸庆大霉素、以鸡胚成纤维细胞作饲养层的培养体系中时，PGCs可贴壁，并可聚集增殖。传代培养后，PGCs仍具有聚集增殖能力，并能进一步分化为其他类型的细胞。
秦洁, 李碧春, 陈国宏, 蔡琳琳, 韩威[3]2005年在《鸡胚胎原始生殖细胞的培养和传代》文中研究表明本文旨在探索鸡胚胎原始生殖细胞(Primordialgermcells,PGCs)培养、传代以及各种因素对PGCs培养的影响。实验结果表明,在添加10%的胎牛血清、2%的鸡血清、2mmol/LL谷氨酰胺、1mmol/L丙酮酸钠、5.5×10-5mol/Lβ巯基乙醇、10μl/ml非必需氨基酸、以及5ng/ml人干细胞生长因子(Humanstemcellfactor,hSCF)、10U/ml鼠白血病抑制因子(Mouseleukemiainhibitoryfactor,mLIF)、10ng/ml碱性成纤维生长因子(Fibroblastgrowthfactorbasic,bFGF)、0.04ng/ml人白细胞介素11(Humaninterleukin11,hIL11),10ng/ml胰岛素样生长因子(Humaninsulinlikegrowthfactor,hIGF)的高糖DMEM培养体系中,以多次离散法进行传代获得5-6代鸡胚胎PGCs,有效地维持了PGCs的未分化状态和正常二倍体核型,同时能够定向地诱导分化为神经细胞,具有作为多能性胚胎干细胞的特征
谢蓓[4]2005年在《鸡胚胎原始生殖细胞的体外培养及嵌合体鸡的制备和分子鉴定》文中提出转基因研究是近年来生命科学研究中热门、发展快的领域之一。相对于哺乳动物受精卵,鸟类的受精卵大且含大量卵黄,操作比较困难。人们寻找了另外一种细胞——PGCs细胞(primordial germ cells,PGCs,原始生殖细胞)代替受精卵作为转基因鸟类的载体。PGCs容易操作,在雌性中它最终发育为卵细胞,在雄性中最终发育为精子。PGCs在胚胎中的迁移途径——通过血液循环后移植入性腺,使它能成为冷冻保种的目标细胞,同时成为转基因鸟类制各中的良好载体。 本实验用40-60μm的玻璃针从孵化51-53小时的鸡胚卵黄静脉中取血,经Ficoll密度梯度离心纯化血液中的PGCs细胞,通过形态和过碘酸-希夫试剂染色鉴别,其纯度可达75%左右。同时分离孵化5天的鸡胚性腺细胞为基质细胞,在添加多种生长因子(胰岛素样生长因子IGF-1、碱性成纤维细胞生长因子b-FGF、白血病抑制因子LIF)的条件下培养PGCs细胞,探索其体外培养的最佳条件。 本研究以广东石歧杂鸡为提供PGCs细胞的供体鸡,以荷兰H系鸡为接受供体PGCs细胞的受体鸡。通过显微注射的方法,将冻存复苏后的PGCs供体细胞,浓缩至400个左右/μl,取1-1.5μl注入孵化60-64小时的受体鸡胚血液中。接受了供体PGCs细胞的受体鸡胚继续孵化。后提取受体鸡胚基因组DNA进行AFLP(amplified fragment length polymorphism,AFLP,扩增片段长度多态性)分子鉴定,测定实验后的鸡是否为嵌合体鸡及其嵌合率的指标。结果显示:制备的出壳前即死亡的36个受检鸡胚中,13个受检鸡胚为嵌合体,嵌合率达36%。存活至出壳的8个鸡胚,都为弱雏,AFLP分子鉴定3个为嵌合体,嵌合率为37.5%。 本研究建立了分离PGCs、体外培养PGCs、制备嵌合体的方法,不仅可以提供丰富的供体细胞来源,有利于PGCs体外的遗传操作,还为转基因鸡的成功制备创造条件。冷冻保存PGCs可以用于地方鸡种的保种,尤其是一些濒临灭绝的物种遗传资源的保存。
李碧春, 肖小珺, 陈国宏, 秦洁, 蔡琳琳[5]2005年在《鸡胚胎原始生殖细胞对不同冷冻体系适合性的研究》文中研究表明目的研究鸡胚胎原始生殖细胞(EPGCs)对不同冷冻体系的适合性。方法对发育至第19期和第28期胚胎性腺PGCs,采用二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇、聚乙二醇为冷冻保护液,在不同组合、不同浓度、不同的冷冻程序下进行超低温冷冻保存。结果1.采用同一种冷冻保护液,10%浓度与15%浓度之间,除DMSO+乙二醇(冷冻保护液Ⅳ)外,其他类型的冷冻液对EPGCs保存后存活率的影响差异不显着(P>0.05);20%浓度的各种冷冻保护液对EPGCs保存后的存活率最低,且与10%和15%浓度相比差异显着(P<0.05)或极显着(P<0.01);2.采用同一种冷冻保护液,浓度为10%时,冷冻程序Ⅰ(2~4℃平衡45~60 min,-4~-6℃诱发结晶45 min,悬挂液氮面1 h以上,投入液氮保存)和冷冻程序Ⅱ(2~4℃平衡90~120 min,悬挂液氮面1 h以上,投入液氮保存)对EPGCs冷冻后存活率差异显着(P<0.05)或极显着(P<0.01);3.采用冷冻程序Ⅰ,浓度为10%时,不同的冷冻保护液对EPGCs保存后的存活率影响显着(P<0.05)或极显着(P<0.01),DMSO+乙二醇(冷冻保护液Ⅳ)显示出最好的保护效果;4.第19期和第28期性腺中的EPGCs在相同的冷冻条件下冷冻后,存活率差异不显着(P>0.05)。结论采用冷冻程序Ⅰ,在10%的DMSO+乙二醇(冷冻保护液Ⅳ)的保护下对鸡EPGCs冷冻较为适合。
李明[6]2008年在《鹌鹑原始生殖细胞系的建立及鉴定》文中进行了进一步梳理原始生殖细胞(Primordial germ cells,简称PGCs)是精子或卵子的前体细胞,PGCs细胞具有发育的全能性,任何一个细胞都具有发育成一个完整个体的潜能,在体外PGCs可诱导分化出包括叁个胚层在内的所有分化细胞,PGCs也具有种系传递功能,能与另一个正常胚胎嵌合,获得包括生殖系在内的动物个体。本研究采用鹌鹑为研究对象,以鸡成纤维细胞饲养层及各种生长因子为基础,对5.5天鹌鹑胚胎PGCs的分离、纯化、培养进行了研究,并对鹌鹑的PGCs的冷冻保存效果进行了探讨。1.鸡成纤维细胞饲养层的制作:采用孵化6天的海兰白种鸡蛋为实验材料,经培养传至2-3代后,以丝裂霉素-C处理后所得到的细胞单层作为饲养层。2.PGCs的分离及鉴定:本实验采用孵化5.5天的鹌鹑胚胎,以酶解法消化获得细胞。对其消化时间做了探讨,发现消化15分钟所获得的细胞数最多。每枚性腺获得的细胞平均为226个左右,并分别用形态学和碱性磷酸酶(AKP)对PGCs做了鉴定。3.PGCs的传代及培养:分别在无饲养层,无生长因子的培养液中、鸡成纤维饲养层及添加LIF＼SCF＼bFGF的鸡成纤维饲养层上对PGCs进行培养。在不含饲养层和生长因子的饲养层中培养原始生殖细胞,基质细胞成纤维状贴壁生长,培养的时间很短,不超过5-6天。原始生殖细胞置放在鸡胚成纤维细胞饲养成上时,细胞的分化得到了有效的抑制,前2天原始生殖细胞仍保持单个的未分化状态。在培养3天后分化的程度比之无饲养层的PGCs情况好,PGCs存活50%左右。在添加生长因子的成纤维细胞饲养层中培养,前3天左右细胞基本不出现分化,保持单个的未分化状态,在4-5天后细胞开始出现分化,PGCs存活76%左右,培养至第6-7天后,细胞出现7-8个细胞的细胞克隆;培养至第10天时,细胞团细胞达到13-15个左右,此时细胞形态不明显,细胞间的结合不紧密,成纤维细胞大量死亡。本实验尝试在第7天进行鹌鹑原始生殖细胞的传代,对于鹌鹑PGCs的传至第5代,细胞仍具有原始生殖细胞的形态,部分细胞保持分裂增殖能力。4.PGCs的冷冻与解冻:解冻保存了2个月的原始生殖细胞。方法1(DMSO作为冷冻液)解冻后细胞存活率为61.4%,方法2(EG+PVP作为冷冻液)解冻后细胞存活率为54.2%(P＞0.05)。以上结果表明:以酶解法在5.5天鹌鹑性腺中分离到PGCs,将PGCs在添加生长因子的鸡成纤维细胞上培养,在第7天对鹌鹑PGCs进行传代,传至5代仍有部分细胞存活并具有分裂增殖的潜能。解冻保存2个月的鹌鹑PGCs,获得了较高的成活率,并具有PGCs的形态。PGCs系的建立可为研究生殖细胞的发育机制和生殖系瘤化提供丰富的实验材料,PGCs也是将目的基因直接传给后代的理想载体,作为载体转基因有着诱人的前景。
王娟[7]2004年在《从原始生殖细胞中分离克隆鸡胚胎生殖细胞》文中进行了进一步梳理原代培养时采取与同源生殖腺基质细胞共同培养的方式,继代培养时采用原代鼠胚成纤维细胞(primary mice embryonic fibroblast,PMEF)、原代鸡胚成纤维细胞(primary chicken embryonic fibroblast,PCEF)、STO细胞及SNL细胞为饲养层,以高糖DMEM添加2%鸡血清,0.1mMβ-巯基乙醇,2mML-谷氨酰胺,10mMHEPES(PH7.6),100U/mL青霉素,100μg/mL链霉素,10ng/mL庆大霉素,20ng/mL伴白蛋白,胎牛血清及细胞因子为培养基,以孵化4.5～7.5日龄(37.8℃、RH60%、600翻蛋角,每小时翻蛋1次)的鸡胚生殖腺为实验材料,探讨影响鸡原始生殖细胞(Primordial GermCells,PGCs)分离克隆胚胎生殖细胞(Embryonic Germ Cells,EG)的相关因素。实验结果如下: 1.根据Hamburger和Hamilton(1951)划分鸡胚发育阶段的标准,从孵化4.5～7.5日龄的鸡胚生殖腺中分离获取生殖腺PGCs,生殖腺组织用消化液(0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA)消化。用含10%FBS的DMEM中和消化液后,离心收集生殖腺细胞。用鸡胚胎生殖细胞(Chicken Embryonic GermCells,CEG)培养液稀释生殖腺细胞后,接种于24孔板中(细胞密度:4枚生殖腺/孔),于CO2培养箱中培养(37℃,5%CO2,饱和湿度),直至PGCs原代集落出现(大约2～3天)。培养至5～6天,集落边缘出现分化迹象,即应传代。用吸管轻轻将CEG细胞克隆吸出,消化液处理后, 200g离心5min,用CEG细胞培养液重悬细胞沉淀后,铺于PMEF饲养层上。平均5-6天对CEG细胞进行一次传代。 CEG细胞克隆的形态与小鼠的稍微不同;克隆内的细胞并不紧密堆积,高倍镜下观察能分辨出单个细胞。CEG细胞克隆并不紧密贴于饲养层细胞上,所以能够很容易地与饲养层细胞分离。CEG细胞类似于猪的ES或EG细胞,呈多层分布,克隆边界清晰。CEG细胞含有较大的核,较少的胞浆,核仁不明显。 2.CEG细胞分离与克隆时期的生长状况。CEG细胞培养12h时,就会出现10-15个PGCs组成的小集落,24h后集落较明显。培养至2-3天,出现鸟巢状的CEG细胞集落。可能由于含有相对多的杂细胞(如血细胞)的缘故,有些原代CEG细胞克隆呈红棕色。随着传代次数的增多,杂细胞的 1
韩威[8]2006年在《鸡胚胎原始生殖细胞慢速冷冻和玻璃化冷冻保存》文中认为本研究以鸡胚为实验材料,采用胰酶消化、Ficoll密度梯度离心法提取发育至第19期和第28期胚胎性腺中的原始生殖细胞(primordial germ cells ,PGCs),之后采用DMSO(二甲基亚砜)、EG(乙二醇)、蔗糖、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)和DMEM等冷冻保护剂组成的6种慢速冷冻保护液和6种玻璃化冷冻保护液,经慢速冷冻程序(40C平衡45～50min,棉花包裹冷冻管液氮面上过夜,投入液氮)和玻璃化冷冻程序(40C平衡5 min,液氮面上静置1 min,投入液氮)进行超低温冷冻保存。6种慢速冷冻保护液类型分别为:I:10%DMSO+10%FBS+DMEM;II:10%EG+10%FBS+DMEM;III:5%DMSO+5%EG+10%FBS +DMEM;IV:10%DMSO +0.1mol/L蔗糖+10%FBS +DMEM;V:10%EG +0.1mol/L蔗糖+10%FBS +DMEM;VI:5%DMSO+5%EG +0.1mol/L蔗糖+10%FBS +DMEM6种玻璃化冷冻保护液类型分别为:I:10%DMSO+10%EG+10%PVP+20%FBS+DMEM;II:20%EG+10%PVP+20%FBS+DMEM;III:20%DMSO+10%PVP+20%FBS+DMEM;
周冠月[9]2006年在《鸡精原干细胞冷冻保存及其转基因的探索》文中认为精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs)是雄性生殖细胞的前体细胞,具有终生扩增性和永生性,是产生雄性生殖细胞的保证,也是生殖系中唯一的在成体中还能增殖的细胞。目前,SSCs已成为发育学研究的热点之一,并在兽医临床学和转基因动物的制备方面具有广阔的应用前景。本研究分离提取了孵化至第19d的鸡胚睾丸中SSCs进行冷冻保存和体外培养,以期筛选出适合鸡胚SSCs冷冻保存的适宜的冷冻保护剂及其浓度;同时进行了体内鸡SSCs转染外源基因(pEGFP-N1)的探索,观察了转染后外源基因在精子、种蛋胚盘及不同孵化日龄胚胎及其组织器官中的表达,为以后利用SSCs生产转基因鸡的研究奠定基础。研究结果可归纳为以下几个方面:1.本研究采用二酶叁步法获取孵化第19d的鸡胚SSCs,分别单独采用浓度为5%、10%、15%的二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)、甘油作为冷冻保护剂进行超低温冷冻保存,复苏后台盼兰染色检查细胞存活率,比较不同浓度的各种冷冻保护剂对鸡胚SSCs的冷冻保存效果;并在添加细胞因子的体外培养体系中,观察复苏后SSCs存活和增殖。结果显示:(1)当DMSO的浓度为5%、10%及15%时,复苏后细胞存活率分别为73.1%、88.6%和74.8%,叁者差异显着(P<0.05);当乙二醇浓度为5%、10%和15%时,复苏后细胞存活率分别为69.4%、83.1%和65.2%,叁者差异显着(P<0.05);当甘油浓度为5%、10%、15%时,复苏后细胞存活率均小于15%,叁者差异不显着(P>0.05)。(2)以10%DMSO为冷冻保护剂进行冷冻保存的SSCs,复苏后接种在以鸡胚胎成纤维细胞为饲养层的培养体系中进行体外培养,发现复苏后生长良好并聚集成集落,AKP染色呈阳性反应,在无饲养层的培养体系中没有集落生成;而以5%和15%的DMSO为冷冻保护剂的SSCs,无论饲养层存在与否均无集落生成;以5%、10%、15%乙二醇为冷冻保护剂时,复苏后无论饲养层存在与否,SSCs均能增殖,但未有AKP阳性集落生成;以5%、10%、15%
陈美娟[10]2016年在《体外培养的鸡原始生殖细胞在早期胚胎迁移的研究》文中提出原始生殖细胞(Primodial germ cells,PGCs)作为配子的前体细胞,负责将遗传信息传递给下一代。将分离的PGCs经过体外培养扩增以及转基因修饰后,移植到受体胚内能产生生殖系嵌合体,这是生产转基因禽类的一个理想途径。但在实际的研究操作中,由于对PGCs迁移和归巢性腺知识的缺乏,转基因嵌合体的制备方法没有优化,成功效率非常低。本研究旨在探索PGCs在注射到受体胚胎后的迁移机制以及影响其迁移效率的因素,为提高转基因鸡的生产效率提供一定的依据。首先,我们从广西黄羽鸡(yellow feather chicken,YF chicken) 13-15期鸡胚血液中分离PGCs进行体外培养扩增,经转基因修饰后,对获得的能稳定遗传的GFP-PGCs进行鉴定。结果发现,经过体外培养及转基因修饰的PGCs, SSEA-1染色呈阳性,RT-PCR分析结果显示这些PGCs表达了Dazl、Cvh、PouV、Cdh、Nanog基因,说明了我们获得的GFP-PGCs细胞株仍保留其生物学特性。随后,我们将鸡胚随机分成4组,分别孵育50h、55h、60h、65h后移植GFP-PGCs,探索受体胚龄对PGCs迁移的影响。结果发现,受体鸡胚孵育50h移植PGCs的迁移效率较孵育55h、60h、65h组高,孵育时间越长移植PGCs迁移效率越低。在探究移植细胞数对PGCs迁移的影响试验中,鸡胚随机分成四组,孵育50h后分别注射1000、3000、10000、30000个GFP-PGCs,结果显示,移植的最优细胞数为10000个／胚,移植的PGCs少于10000个／胚时,随着移植细胞数的增加,迁移的PGCs增加,当移植的PGCs多于10000个／胚时,迁移的PGCs不再增加。我们将移植10000个PGCs的鸡胚孵出,出壳4d小鸡睾丸内发现外源GFP-PGCs,证明了外源GFP-PGCs能在受体性腺内生长增殖。随后,成熟雄性嵌合体鸡精液DNA PCR结果显示,4个假定嵌合体中有1个呈GFP阳性。最后,我们探究了CXCR4信号通路在PGCs迁移过程中的作用。RT-PCR结果显示,PGCs表达了趋化因子受体Cxcr4基因。此外,我们在移植的细胞滴中分别添加CXCR4信号通路抑制剂AMD3100和WZ811, AMD3100浓度为OnM、10nM、50nM, WZ811为OnM、1nM、2nM,试验结果表明,50nMAMD3100以及1nM、 2nM WZ811能明显抑制PGCs的迁移(P<0.05)。证明了SDF-1/CXCR4信号通路参与调控PGCs在早期鸡胚中的迁移和归巢。综上所述,广西黄羽鸡PGCs能在体外长期培养,经转基因修饰后仍保留其生物学特性。受体鸡胚孵育50h为最佳移植时间,每个鸡胚移植10000个PGCs迁移至性腺的PGCs最多,归巢至性腺的PGCs能在受体睾丸中正常增殖生长。SDF-1/CXCR4信号通路参与介导PGCs的体内迁移过程。
参考文献：
[1]. 鸡胚胎原始生殖细胞建系能力的研究[D]. 秦洁. 扬州大学. 2006
[2]. 鸡胚胎原始生殖细胞的冷冻保存和体外培养的研究[D]. 肖小珺. 扬州大学. 2004
[3]. 鸡胚胎原始生殖细胞的培养和传代[J]. 秦洁, 李碧春, 陈国宏, 蔡琳琳, 韩威. 动物学报. 2005
[4]. 鸡胚胎原始生殖细胞的体外培养及嵌合体鸡的制备和分子鉴定[D]. 谢蓓. 南京师范大学. 2005
[5]. 鸡胚胎原始生殖细胞对不同冷冻体系适合性的研究[J]. 李碧春, 肖小珺, 陈国宏, 秦洁, 蔡琳琳. 解剖学报. 2005
[6]. 鹌鹑原始生殖细胞系的建立及鉴定[D]. 李明. 福建农林大学. 2008
[7]. 从原始生殖细胞中分离克隆鸡胚胎生殖细胞[D]. 王娟. 山东农业大学. 2004
[8]. 鸡胚胎原始生殖细胞慢速冷冻和玻璃化冷冻保存[D]. 韩威. 扬州大学. 2006
[9]. 鸡精原干细胞冷冻保存及其转基因的探索[D]. 周冠月. 扬州大学. 2006
[10]. 体外培养的鸡原始生殖细胞在早期胚胎迁移的研究[D]. 陈美娟. 广西大学. 2016
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