哈尔滨市疾病预防控制中心 150056
【摘 要】在进行微生物检验时，应用不确定度检验的目前还很少，通过此种检验方法的应用，可以有效的提升微生物检验结果的科学性，增强检验结果的可用性。在本文中，首先介绍了引用纯净水微生物检验中菌落总数实验，然后在实验中应用了不确定度检验，对菌落总数进行检验，实验结果表明，不确定度检验的方法具备的简便性是非常好的，适合微生物检验。
【关键词】引用纯净水；微生物检验；菌落总数；不确定度检验
ABSTRACT：In microbial testing，the application of uncertainty testing is still rare. The application of this method can effectively improve the scientificity of microbial testing results and enhance the usability of testing results. In this paper，the total number of bacteria in the microbial test of purified water is introduced firstly，and then uncertainty test is applied in the experiment to test the total number of bacteria. The experimental results show that the method of uncertainty test is very simple and suitable for microbial test.
Key words：citing pure water；microbial testing；total number of colonies；uncertainty testing
前言：
在进行微生物检验时，不确定度是一个重要的参数，与测量结果具有很大的关联性，被测量值的分散性都是通过不确定度的表征来赋予的，而且赋予具备合理性，通过不确定度的正确测量和评定，提升了测量结果分析的有效性。现今，微生物检验中越来越认识到不确定检验的重要性，因此开始逐渐的应用不确定检验方法，在饮用纯净水的菌落总数实验中，通过不确定度检验的应用，提升了实验效果的准确性。
一、饮用纯净水微生物菌落总数实验
（一）实验原理
在有氧条件下，通过营养琼脂，在37℃的温度下，培养水样48小时，最后，在1毫升水样内含有的菌落总数就可以得出。实验在实验室内进行，根据规定的方法，不同人员检验日常样品，在检验时，每个样品需要进行平行样检测，此检测需要由同一个实验人员来进行。检测完成规定的组数之后，就可以应用不确定度检验，对菌落总数进行评定[1]。
（二）实验材料
实验正常进行的基本保证就是实验材料，在本次实验中，是通过不确定检验来对菌落总数进行评定，选择的检验对象为水样，因此，实验所用的材料为饮用纯净水。根据实验的设置，对不同类型的饮用纯净水进行取样，以便于保证检测结果的公正性。
（三）实验仪器
在进行实验的过程中，需要借助相应的仪器来完成实验，在饮用纯净水微生物检测中菌落总数的实验中，主要用到的实验仪器有高压灭菌锅、电热干燥箱、恒温水浴锅以及恒温培养箱。通过实验仪器与实验试剂的辅助作用，有效的针对饮用纯净水水样进行微生物检验，对其中的菌落总数进行确定。
（四）实验方法
在进行检验时，所依赖的标准为《生活饮用水标准检验方法微生物指标》。首先要进行充分混匀水样的吸取，在进行吸取时，通过无菌操作的方式来进行，随后，在无菌生理盐水试管中将水样注入进去，混匀稀释之后形成稀释液，浓度为1：10，接着，稀释液再次滴入灭菌生理盐水试管中，形成1：100稀释液，最后重复一次上个步骤，得出1：1000稀释液，将这些稀释液放置在适当的条件下，留做备用。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆稀释完成之后，取两个灭菌平皿，分别注入未经稀释的水样以及适当稀释度的稀释液，在吸取这两个液体时，都需要用无菌吸管来吸取，注入完成后，再在各自的平皿中将营养琼脂注入进去，营养琼脂的温度约为45℃，注入之后立即进行旋摇，以便于充分的混合[2]。同时，还需要进行营养琼脂空白对照，等到琼脂凝固之后，将平皿翻转过来，放置在培养箱中，培养箱的温度约为36℃，上下浮动1℃的温度范围均可，培养的时间为48小时，培养完成之后，进行菌落计数，在30～300稀释度之间的菌落数，用稀释倍数与平均菌落数相乘，得出的结果就是检测结果，最后，根据相应的数学模型完成计算。
二、菌落总数的不确定度检验
（一）分析来源
在对饮用纯净水的菌落总数进行检验时，不确定度的来源种类比较多：重复性，比如检验环境、培养时间、样品的均匀性、人员计数等，都具备很大的重复性，从而导致不确定度的存在；培养条件，培养时间和培养温度会存在一定的允差，差值的存在就形成了不确定度；取样，在进行水样取样时，体积会对确定性产生影响，在对水样进行稀释时，稀释的体积也同样具有不确定性；实验仪器和实验试剂，比如吸管、培养基等，都会形成不确定度；样品保存条件，时间、温度等都属于保存条件的范畴，当这两个条件发生变动时，菌落总数也会受到一定的影响，进而存在不确定度。不确定度包含A类和B类两种，在实际的微生物检验中，合成不确定度中B类分量所能产生的贡献是比较小的，主要的还是重复测量所带来的，因此，在进行不确定检验时，考虑的不确定度来源主要就是重复性，也就是说，在对不确定度进行评定测量时，采用统计的方法（A类）来进行[3]。
（二）不确定度评定
根据上面的实验方法，对15份日常水样进行菌落总数的检验，每个水样都形成两个检测结果，并分别取对数值，并计算出两个对数的平均值，最后在形成残差平方和。检测完成之后需要进行相应的计算，计算时所采用的公式为贝塞尔公式，首先将合并样品的标准差计算出来，随后再将检测结果的不确定度计算出来，并对不确定度进行扩展，在进行扩展不确定度计算时，需要根据相应的数值来查询到T分布，最终才能确定扩展不确定度数值[4]。在表示检验结果时，如果选择2次测量对数值的平均值，那么不确定度的取值区间就应该在减去平均值的数值到加上平均值的数值之间，通常来说，任何一次不确定度的测量取值区间都适合采用此种方法。比如在选择的15份水样中的3号，经过测量之后，其对数平均值为1.874，根据贝塞尔公式计算出来的对数平均值为0.078，那么不确定度的取值区间就在1.796～1.952之间。
在进行平板测试时，当测试结果要比10CFU/mL大时，那么其分布状态就是偏态分布，而为了使测量结果处于正态分布，就需要对数据进行转换，转换为对数之后，分布状态就接近于正态。对于不确定度检验来说，微生物检测的严格性并不强，而且也不属于统计学和度量学的类别，因此，在对不确定度进行评定时，最为合适的方法就是单独采用重复性以及再现性的数据来进行。通过不确定度的正确评定，提升了微生物检测结果的科学性以及公正性。实际上，对于不确定度检验的使用情况，相关的准则和要求做出了明确的规定，在以下三种情形时，微生物检测报告中必须要包含不确定的检验，第一种是当检测结果的有效性或应用类型与不确定相关联时，第二种是客户明确的提出了进行不确定检验，第三种是在进行结果复合型的判定时，不确定度会产生一定影响的。由此可见，在水质微生物检测中，不确定检验是比较重要的一个部分，应该加大其在常规实验中的应用力度，以便于提升检测结果的准确性。
结论：
在对饮用纯净水的菌落总数进行检测时，应用了不确定度检验的方法，由此一来，检测结果的准确性得到提升。随着微生物检测的发展，其检验结果也会不断地增多，这样一来，就需要将不确定度的取值范围进行更新，以便于提升不确定度评定的正确性，以便于保证微生物检测结果具备较高的科学性，提升结果的可用性。在当前的检测中，不确定度检验还应用的比较少，在研究不断深入的过程中，不确定度检验的应用将会变得更加深入，同时，水质菌落总数的确定也将会变得更加可靠与公正。
参考文献：
[1]岁源，吴晓军，曹俊等.食品检验中菌落总数的不确定度评定[J].江苏卫生保健，2013，（06）：6-8.
[2]王海华，兰茜.能力验证菌落总数测定结果不确定度的评定[J].食品安全质量检测学报，2015，（06）：2352-2355.
[3]周婕，姚羚羚，瘳惠青.农村饮用水菌落总数测量不确定度的评定[J].医学动物防制，2014，（07）：814-816.
[4]陆娟.不确定度评定在水中菌落总数测定中的应用[J].中国卫生检验杂志，2011，（03）：765-766.
论文作者:孙宗祥,姜勇波,蔡路,王蕾,于丹
论文发表刊物:《中国医学人文》(学术版)2019年3月下第6期
论文发表时间:2019/8/15
标签：不确定论文; 菌落论文; 微生物论文; 总数论文; 纯净水论文; 稀释液论文; 测量论文; 《中国医学人文》(学术版)2019年3月下第6期论文;