王宇光, 张树珍[1]2002年在《抗菌肽CMIV基因突变体的设计、合成和表达的研究》文中研究表明本研究的内容包括:①在前人对抗菌肽CMIV研究的基础上,对N端和C端进行氨基酸保守变换,设计和合成了该基因,充分使用大肠杆菌偏爱的密码子,并将该基因5′端与硫氧还蛋白基因3′端融合,通过PTXFUS表达载体获得较高可溶性表达。由于硫氧还蛋白和抗菌肽之间设计了肠激酶(Enterokinase)切割位点和CNBr切割位点,通过对该表达的融合蛋白的切割,可得到目标抗菌肽CMIV突
王宇光[2]2002年在《抗菌肽CMIV基因突变体的设计、合成和表达的研究》文中研究表明本研究的内容包括：一、在前人对抗菌肽CMIV研究的基础上，对N端和C端进行氨基酸保守变换，设计和合成了该基因，充分使用大肠杆菌偏爱的密码子，并将该基因5′端与硫氧还蛋白基因3′端融合，通过PTXFUS表达载体获得较高可溶性表达(在15％SDS-PAGE胶上可见明显的表达蛋白带)。由于硫氧还蛋白和抗菌肽之间设计了肠激酶(Enterokinase)切割位点和CNBr切割位点，通过对该表达的融合蛋白的切割，可得到目标抗菌肽CMIV突变体多肽分子。二、在以上研究的基础上，对CMIV抗菌肽的C端进行较大的改造，即将与肿瘤细胞过度表达的表皮生长因子受体(EGFR)具有高亲和性的因子多肽TGF_3通过疏水柔性接头连接在抗菌肽CMIV的C端，设计完整的基因，并在大肠杆菌中利用PTXFUS表达载体与硫氧还蛋白进行可溶性融合蛋白表达。叁、对以上表达的融合蛋白进行初步纯化以及利用Enterokinase切割融合蛋白，并进行抗菌活性检测，结果表明所设计的CMIV突变体具有抗菌活性。以上研究的意义：1、初步解决了抗菌肽CMIV突变体在大肠杆菌中高效可溶性表达的问题，为进一步大量生产CMIV基因突变体打下基础；2、为进一步设计具有特异导向性的抗菌抗肿瘤CMIV突变体基因和表达以及以后进行动植物转化打下基础。
参考文献：
[1]. 抗菌肽CMIV基因突变体的设计、合成和表达的研究[C]. 王宇光, 张树珍. 加入WTO和中国科技与可持续发展——挑战与机遇、责任和对策（下册）. 2002
[2]. 抗菌肽CMIV基因突变体的设计、合成和表达的研究[D]. 王宇光. 华南热带农业大学. 2002