【摘 要】为了对党参多糖在肝癌中的活性进行研究，设计试验，采用的方法为MTT法，研究党参多糖对肝癌细胞的抑制效果，利用荧光镜对党参多糖在癌细胞中的情况进行观察，根据染色观察细胞形态和切片、毒性多方面对党参的毒性进行明确。研究结果为党参岁肝癌细胞中的SMMC-7721有着抑制的效果，造成细胞核的固缩，但是在小鼠的试验中发现党参不具有毒性，总结党参多糖对肝癌细胞具有较好的抑制作用，在SMMC-7721细胞中具有明显的作用。
【关键词】党参；肝癌细胞株；抗肿瘤
在甘肃地区的中药材种植区域具有多种中药材，成分的含量也比较高，对党参和当归等药材的作用较强，党参包含多糖、挥发油和皂苷等其他的物质所组成，能够治疗溃疡和胃肠疾病，还具有强心和抗休克的作用，促进造血。除此之外，党参多糖还具有抗肿瘤的功能，在进过研究之后，在肝癌细胞中使用党参多糖，对SMMC-7721进行研究，将使用量进行适当的控制，研究发现，党参多糖对小鼠的影响较小，没有造成损伤，通过这项研究对党参有了更加深入的了解。
研究材料与方法
1.1 试验材料
党参购买于兰州市黄河市场， 产地：甘肃岷县。 经兰州大学药学教研室马志刚教授鉴定正品；SPF 级昆明种小鼠，购自兰州大学实验动物中心，体质量(20±2)g，50 只，3 周龄，l8～20 g，雌雄各半。
1.2 试验仪器
SARTORIUS-BT23S分析天平 (北京赛多利斯有限责任公司提供)，KH-5200B 超声清洗器(昆山禾木超声仪器有限公司提供)，UV722S 紫外分光光度计、thermo CO 2 培养箱(美国赛默飞公司提供)，Multiskan Spectrum 酶标仪(美国赛默飞公司提供)。
1.3 试验试剂
小牛血清(四季青)，DMEM 培养基(美国 GIBCO 公司提供)，SMMC-7721 细胞株(甘肃省武威市人民医院提供)。
1.4方法
（1）党参多糖物质制备
首先采用精确称量的方式称量党参80克，并对党参进行基础处理，去除党参中掺杂的杂质或者是已经发霉的物质，在用清水对党参进行清洗之后再进行晒干处理。其次，还要对党参进行切碎处理，将党参切碎成2厘米到4厘米之间长度的小段，并将这些小段的党参放到煮缸中煎煮，将煎煮的水量要将控制在70倍左右，一次煎煮难以达到预期效果，需要进行两到三次的煎煮。在完成煎煮之后进行过滤，在合并过滤液并进行干燥处理之后也就得到了饲料。第三，经过浓缩以及合并处理之后滤液还要减压浓缩到半流体状态，具体的比重要能控制在1.25到1.26之间，将反应温度控制在70摄氏度到80摄氏度之间，采用放置的方式冷却到室温。
第四，离心分离操作，将已经冷却到标准温度的浓缩液离心分离，通过离心操作将浓缩液分为沉淀物以及母液两部分。使用纯水对沉淀物进行洗涤操作2次，每次所加注的纯水量应是沉淀物湿重总重量的四分之一到三分之一之间。在搅拌均匀之后进行离心处理，将离心处理产物放到60摄氏度到80摄氏度使得环境温度下进行干燥，处理所得的黄色粉末类物质即为党参多糖物质，并且其中党参多糖的实际含量会在百分之60以上。最后一项操作是对母液进行处理。将三次离心分离所得到的母液汇聚在一起，将浓缩数值控制在1.25到1.26之间，同时将反应环境的温度控制在70摄氏度到80摄氏度之间，党参中多糖的含量数值会在百分之2以上。
（2）MTT方法
取处在对数成长时期的肝癌细胞，对所去的肝癌细胞进行计数以及稀释操作，最终达到细胞的实际密度在为1x105个每毫升，将这些肝癌细胞结合中在规格为96孔的孔板上。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆每孔加 100 μL 的细胞，接种 24小时后，按照给药剂量分为 4、2、1、0.5、0.25 mg/mL共 5 组，培养 24 小时加药，每孔加 20 μL，每组设4 个平行孔，空白组加培养液，培养 48 小时后，加入 MTT 和 DMSO 检测，按以下公式计算：抑制率 = (正常对照组 - 给药组)／正常对照组
1.4.3 细胞核固缩的观察分析
取肝癌细胞对数生长期的细胞，计数、稀释，最终细胞密度为1×10 5 个/mL，接种于 6 孔板上，每空加 3 mL 的细胞，接种 24 小时候，按照给药剂量分 1 200、600、300 μg/mL 共3 组，在培养 24 小时，每孔分别加 300 μL 的药，空白组加等体积培养液，培养 24 小时后，收集细胞，用 PBS 洗涤 1～2 遍，用多聚甲醛固定 15 分钟后，染色，当染色液吹干后，盖上盖玻片，在荧光显微镜下观察。
1.4.4 细胞形态学的观察分析
2.5×10 6 细胞经同一时间不同浓度或同一浓度不同时间的党参多糖混悬液培养后收集，对照组加入最高党参多糖剂量组药量等体积的溶剂。 PBS 洗 2 遍，取少量细胞离心涂片，瑞氏 - 吉姆萨染色，光镜下观察形态。
1.4.5 病理切片的观察分析
用昆明种小鼠做党参多糖的急性毒性实验，先用 20 只小鼠做急性毒性的预实验，然后把小鼠分成 4 组，分别为高、中、低剂量组和对照组，每组 10 只。 2 周以后，用断头法处死小鼠，用病理观察方法观察小鼠心、肝、肺。
1.4.6 小鼠急性毒性实验分析
根据预实验，取禁食不禁水 12 小时的小鼠 150 只，雌雄各半，体质量(20±2)g，平均分成 15 组给药实验，分别采用单次静脉注射给药法，腹腔注射给药法，灌胃给药法测定各受试药对小鼠产生的急性毒性， 药物质量浓度最大为 1 200 μg/mL，然后按 1∶0.8 依次稀释作为其他组的浓度，按小鼠体质量计算，注射体积分别为 0.6、0.4、0.15 mL， 全部药量在 45s 内注完，给药后立即观察各组动物反应情况， 连续观察 2周，记录小鼠体质量变化和中毒情况，按照改良寇氏 综 合 计 算 法 的 要 求 ， 根 据 公 式 ：LD 50 =lg -1［lgDm-lgr(∑P-0.5)］计算党参多糖溶液的半数致死量。
2 研究结果
2.1 党参多糖体外肝癌的抑制效果及对肝癌细胞核的影响
党参多糖对肝癌细胞株 SMMC-7721 有抑制作用，并且随着药物浓度的增大，抑制率增大，特别是 4 mg/mL 时，抑制率达到了 69.2%。 见图 1。低剂量组出现核固缩，细胞核的形状变形，凋亡小体不明显；高剂量组凋亡小体明显，而且出现大量的凋亡小体，细胞核固缩也十分明显。
2.2 细胞形态学观察结果
光学显微镜下观察分析
对照组细胞分布均匀，大小一致，加入600 μg/mL 的 RPMI1640 作用细胞 12 小时，可见细胞无变化。 加入 300 μg/mL的党参多糖体积缩小，细胞不规则，细胞膜周边有的形成小泡，正处于形成凋亡小体的过程中，加入600 μg/mL的党参多糖体积缩小，细胞连接紧密不规则，细胞膜周边有的形成小泡，正处于形成凋亡小体的过程中，。 1 200 μg/mL的党参多糖作用于SMMC-7721 细胞 12 小时，可见细胞在形态上的变化，1 200 μg/mL的党参多糖作用于细胞 12 小时后，凋亡细胞核皱缩，荧光变得致密，可见明显的粒状荧光体聚集，为凋亡小体。
3 结语
通过对中药药物的研究，中药的使用越来越广泛，不仅在保健品中包含，在抗癌的药物中也有使用，通过对党参的研究，对其活性成分进行了分析，包括党参多糖以及皂苷，研究表明党参多糖具有抗癌的功能，同时对小鼠没有造成伤害，党参多糖的毒性较小，活性较强，所以在抗癌中具有较好的效果，能够对癌细胞起到抑制的作用，通过研究对党参多糖的作用进行了分析，但是还需要进行深入的研究，对党参的抗癌作用进行更加全面的分析，为未来的治疗研究提供帮助，作为参考依据，这对抗癌的研究有着重要的意义。
参考文献
[1]刘章泉. 党参均一多糖及其硫酸酯制备和抗肿瘤活性初步研究[D]. 遵义医学院, 2016.
[2]陈文彬. 党参多糖对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的研究[D]. 上海海洋大学, 2016.
[3]廖鲜芳. 抗肿瘤的中药组合物:, CN105878936A[P]. 2016.
论文作者:李雪
论文发表刊物:《世界复合医学》2018年第05期
论文发表时间:2018/7/18
标签：党参论文; 多糖论文; 细胞论文; 小鼠论文; 肝癌论文; 小体论文; 细胞核论文; 《世界复合医学》2018年第05期论文;