侯占红 祁玉兰
甘肃省临夏州中心血站 731100
摘要：目的 了解血清梅毒抗体在梅毒疾病诊断中应用。方法 收集临床梅毒就诊病人血清标本100人份，将其冰冻于-20摄氏度以下的冰柜中；对收集完整的100份血清标本统一进行ELISA法血清梅毒抗体检测及TRUST血清试验；统计不同方法的试验结果数据并进行分析得出结论报告。结果 试验得到4种结果，分别为①TRUST-，ELISA-可基本排除梅毒。极早期梅毒（无任何抗梅毒抗体产生）。极晚期梅毒，艾滋病病人合并梅毒感染。②TRUST+，ELISA+现正梅毒，应考虑治疗。③TRUST-，ELISA+、极早期梅毒、晚期梅毒、治愈的早期梅毒（应询问病人是否有既往的梅毒感染和治疗史；若病人否认有既往史）。解释漏检。④TRUST+，ELISA- TRUST假阳性 结论 诊断梅毒需要依靠梅毒实验室的检测，所以选择一种敏感性和特异性均高的检测方法非常重要。非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简便，适于早期筛查。梅毒螺旋体抗原血清试验敏感性强，特异度高，常用作梅毒血清确认试验。缺点是不适合疗效观察。
关键词：梅毒抗体；梅毒；TRUST试验；ELISA试验
梅毒是由梅毒螺旋体所引起的一种慢性的性传播疾病。人们被感染后，全身各组织和器官都可被侵犯，临床表现多种多样。早期主要侵犯皮肤和黏膜，晚期侵犯中枢神经系统和心血管系统。侵入机体后可产生2种抗体，即抗心磷脂抗体及抗密螺旋体抗体。目前国内最常用的梅毒血清诊断试验是以心磷脂为抗原的非特异性梅毒血清试验——甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）。以心磷脂为靶抗原的抗体至少包括抗心磷脂抗体、梅毒血清反映素、狼疮抗凝物质，所以TRUST法检测为阳性的并非一定是梅毒患者。梅毒ELISA法采用的是双抗原夹心法，在微孔条上预包被梅毒螺旋体抗体的基因重组抗原，配以酶标记抗原及TMB显色剂，检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。为使临床梅毒诊断更科学规范化，收集临床标本用不同的方法对梅毒抗体进行检测，分析所得的数据，得出结论。
材料与方法
1．1 材料
1．1.1标本：
自2014年7月份来院就诊的临床梅毒患者血清100人份。
1.1.2 试剂：
上海荣盛生物有限公司提供的TRUST法试剂，英科新创科技有限公司提供的梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）。
1.1.3 仪器：
MK3酶标仪、600-A型水浴箱、L-550离心机、ZY93769加样器、KJ-201BS振荡仪、ST-36W洗板机
1.2 方法
1.2.1 TRUST微板法：
TRUST试剂和待测血清置室温（18—25摄氏度）平衡10分钟；将待测血清（无需灭活处理），阴性对照和阳性对照分别加入反应卡的样本圈内，每圈1滴（50微升）；轻轻摇匀抗原试剂，垂直滴加1滴抗原与样本圈内：旋转摇动卡片8分钟，立即用肉眼观察结果。结果判定阴性时呈粉红色均匀分散沉淀物；结果判定阳性时出现粉红色凝集块，根据凝集块大小记录1+—4+。
1.2.2 ELISA法：
将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18—25摄氏度），微孔板开封后，余者即时以自封袋封存；浓缩洗涤液配置前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用；取所需数量微孔条固定于支架，按序编号；分别在相应孔中加入100微升阴、阳性对照血清或待测样本；覆上封板膜，置37摄氏度温育60分钟；用洗涤液充分洗涤5次洗涤后扣干（每次应保持30—60秒的浸泡时间）；分别在没孔中加入酶标记抗原100微升；覆上封板膜，置37摄氏度温育30分钟；用洗涤液充分洗涤5次洗涤后扣干（每次应保持30—60秒的浸泡时间）；每孔加底物A、B各50微升，轻拍混匀，37摄氏度暗置30分钟；每孔加入终止液50微升，混匀；用酶标仪单波长450纳米或双波长450纳米/630纳米测定各孔OD值（用单波长测定时，需用空白对照调零），并记录结果。临界值（C.O.）=阴性对照OD均值*2.8，结果判定时样本OD值S/C.O.大于等于1者为梅毒螺旋体抗体反应阳性；结果判定时样本OD值S/C.O.小于1者为梅毒螺旋体抗体反应阴性；阴性对照OD均值大于0.1或阳性对照OD均值小于等于0.5时，试验无效，应重新试验。
结果
1.用TRUST法和ELISA法两种试验方法对收集的100份临床就诊患者血清进行检测后，统计结果，见表1。
2.我们实验室TRUST+ELISA。出现以下4种情况：
2.1 TRUST-，ELISA-
可基本排除梅毒。极早期梅毒（无任何抗梅毒抗体产生）。极晚期梅毒，艾滋病病人合并梅毒感染。
2.2 TRUST+，ELISA+
现正梅毒，应考虑治疗。
2.3 TRUST-，ELISA+
极早期梅毒、晚期梅毒、治愈的早期梅毒（应询问病人是否有既往的梅毒感染和治疗史；若病人否认有既往史）。解释漏检
2.4 TRUST +，ELISA-
TRUST假阳性
讨论
梅毒诊断必须根据病史、临床症状、体检及实验室检查等进行综合分析，慎重作出诊断。将梅毒螺旋体抗原血清试验和非梅毒螺旋体抗原血清实验组和在一起，是最为理想的梅毒初筛方法。他可以最大限度的检出各期梅毒。同时保证了敏感性和特异性。梅毒是危害人类健康较为严重的性传播疾病之一，近年来在我国，梅毒的发病率呈逐年上升趋势。当人体感染梅毒螺旋体后4—10周，血清中可产生一定数量的抗磷脂抗原的非特异性反应素抗体和抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体（主要是IgG和IgM）。血清学试验分为非特异性和特异性试验两大类。
非梅毒螺旋体抗原血清试验：是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的反应素，用于初筛试验及疗效观察。由于反应素并非只存在于梅毒患者体内，故此类试验为非特异型抗体检测试验。由于患者经治疗后反应素消失或阴转，因此这类试验可观察疗效，复发及再感染，但其敏感性高而特异性较低。此类试验适于二期梅毒，而不适于诊断一、三期梅毒，包括潜伏梅毒、神经梅毒。如甲苯胺红不加热血清反应素试验（TRUST）：TRUST试验所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆固醇组成，与RPR方法比较，TRUST试验是VDRL试剂中加了甲苯胺红溶液，阳性呈红色的不同程度的凝块悬于液体中，在白色纸卡上，结果清晰易读，简便快速，稳定性好。
梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体，其敏感性的特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试验，但不能用作疗效观察的指标。如梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）：TP-ELISA 是将基因重组表达的梅毒膜特异性抗原包被在微孔板上，用双抗原夹心法测定梅毒特异性抗体，该方法检测操作简便，不受样本中纤维蛋白和溶血等影响，可用作筛查和确认试验。有文献表明，TP-ELISA法灵敏度和特异性均较高，敏感性为93.0%—100%，特异性为98.3%—99.8%，且该法检测的TP抗体稳定，不受病程及治疗等因素的影响，因此，用ELISA法检测其结果准确性更可靠。
对于非特异性试验阳性，需确证是否为梅毒患者，除需用梅毒确证试验进行实验室检查外，同时还需结合病史、体征等进行综合评定。因此，若以TRUST试验的阳性结果来评定就诊者是否是梅毒患者，这在理论上是不科学的，在实践中是有害无益的。ELISA法的灵敏度和特异性均比TRUST法高，且重复性好受干扰因素少。
参考文献：
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［2］李钰，两种梅毒血清学试验的检测结果比较［J］.广西预防医学，2001，7（2）：122
［3］濮云峰，朱荐，宋燕玲.TRUST法检测中假阳性的影响因素［J］临床输血与检验，2008，10（4）：358
论文作者:侯占红,祁玉兰
论文发表刊物:《健康世界》2015年16期供稿
论文发表时间:2015/11/20
标签：梅毒论文; 血清论文; 抗原论文; 螺旋体论文; 抗体论文; 阳性论文; 特异性论文; 《健康世界》2015年16期供稿论文;