杨传标[1]2001年在《连黛胶囊治疗胃肠肿瘤临床疗效观察与分子机理研究》文中认为胃肠道恶性肿瘤在我国是严重危害人民健康的常见病，其发病率与死亡率在全部恶性肿瘤中一直居前列。当前，西医采用手术加化学药物及其它疗法的综合治疗，对中晚期患者的疗效十分有限，绝大多数患者的预后仍较差：中医治疗胃肠肿瘤主要以中药疗法见长，一些研究显示在某些方面表现出初步优势，使人们感到谨慎的乐观，认为有深入研究和开发价值。为此，本文尝试研究中药制剂连黛胶囊的临床疗效与作用机理。 目的：观察和比较连黛胶囊治疗不同证型胃肠肿瘤的临床疗效，探讨其作用机理。旨在为临床治疗胃肠肿瘤提供一种安全可靠、疗效确切的中药复方制剂。 方法：选择中晚期胃肠肿瘤病人45例，随机分为治疗组30例（热毒证、瘀血证、脾虚证各10例）和对照组15例（热毒证、瘀血证、脾虚证各5例）。治疗组在不改变原来对症支持等常规用药基础上加服连黛胶囊，每次12克，每日3次；对照组除不服连黛胶囊外，其他与治疗组完全相同，疗程1个月。①治疗观察期间认真记录临床症状及体重变化。②由病人于治疗前后分别填写生存质量调查量表，以此判断其生存质量状况。③疗程开始前和结束后各采静脉血1次，分别检测NK细胞、T细胞亚群活性及血清CEA、CA19-9、IL-2、TNF-α、p21~(ras)和突变型p53蛋白含量。④观察连黛胶囊对外周血象、心、肝、肾功能的影响及其它不良反应。⑤应用SPSS软件进行统计学分析。 结果： 1．临床症状疗效：治疗组显着优于对照组（p＜0.05）。 广州中医臼大学2001届傅士学位论文 2．生存质量变化情况：治疗组治疗后较治疗前明显提高 …仍．05）。对照组治疗后生存质量状况的某些方面也有向好趋势，但明显不如治疗组。 3．体重变化情况：两组无明显差异。 4．对相关抗原的影响：两组治疗前后血清CEA、CA19刁阳性串和含量差异均无显着意义。 5．对免疫功能的影响：治疗组治疗后免疫功能有关指标如：NK细胞活性、T细胞亚群跳、血清ILZ、i－a水平等较治疗前有不同程度改善h狈．01或P仍．05）。对照组这些指标拾疗前后的差异无显着意义。 6．对相关基因表达的影响：治疗组对肿＠相关基因表达有影响，其治疗后血清突变型P53蛋白和P21m蛋白含量较治疗前显着下降 巾狈·01或小0·05）。对照组治疗前后差异无显着意义。 7．连黛胶囊的临床疗效与中医证型的关系：经直线回归分析，反映连黛胶羹泊疗效果的各主要指标治疗前后的变化乡数与中医证型存在明显依存关系b刃．05或PO．01），结果证明其对热毒（湿热）证的疗效显着优于对其它证型的疗效。 8．安全性：经临床观紊，连黛胶M外周血象及心、肝、肾功能无损害，无其它不良反应，临床使用安全可靠。 ＄t： 1．连黛胶羹浙胃肠肿＠在减轻患者临床症状和提高生存质量方面有显着疗效。 2．连黛胶羹能使胃肠肿鹰患者的免疫功能得到恢复，从而调动和增强机体的抗肿瘤活力。2 连黛胶亟泊疗胃胚肿们临床疗效观察与分子机理研究 3．连黛胶囊作用的分子机理可能在于抑制ras基因的激活和阻止野 生型的s基因的突变，从而在分子水平遏制肿瘤发展或改变肿瘤的发展 方向。 4．临床使用连黛胶囊要坚持中医学辨证论治理论指导和病证结合原 则，这是提高临床疗效的关键。 5．连黛胶囊安全可靠、疗效确切，临床治疗热毒（湿热）证胃肠肿 瘤可优先选择。
黄文玲[2]2006年在《葛根提取物对子宫内膜癌细胞体外增殖的影响及机理研究》文中指出目的:子宫内膜癌又称子宫体癌,是女性生殖道系统常见的叁大恶性肿瘤之一,高发年龄为58～61岁,约占女性癌症总数的7%,已占到女性生殖系统恶性肿瘤的20%～30%。子宫内膜癌是一种起源于子宫内膜的雌激素依赖性恶性肿瘤。近年来,随着激素替代治疗(HRT)广泛应用,子宫内膜癌在我国发病率逐年上升,与宫颈癌比较,已趋于接近甚至超过,受到研究者高度重视。虽然有多家研究机构致力于子宫内膜癌的研究工作,但对其发病机制仍不十分明确。更深入的研究工作仍需要进一步开展。为此,本实验以子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞为研究对象,研究子宫内膜癌的主要发病机制,首次探讨葛根提取物对Ishikawa细胞的影响,以及葛根提取物抑制Ishikawa细胞体外增殖作用机制,为中医药治疗子宫内膜癌提供理论基础和体外实验的资料。方法:1、MTT法分别地检测葛根提取物对Ishikawa细胞体外增殖的抑制作用:不同浓度葛根提取物处理Ishikawa细胞48小时后,测定光吸收值,计算抑制率,获得量效数据。取ICB50B浓度葛根提取物处理Ishikawa细胞24、48、72、96、120小时后,测定光吸收值,计算抑制率,获得时效数据。2、流式细胞术分别测定葛根提取物对Ishikawa细胞周期及凋亡的作用:不同浓度葛根提取物处理Ishikawa细胞48小时后,固定细胞,RNAase消化半小时,PI避光染色1小时,上机检测,Modi Fit软件进行细胞周期分析并绘制DNA分布图。3、RT-PCR法检测葛根提取物、雌二醇、孕激素对Ishikawa细胞ERRαmRNA表达的调节作用:不同浓度葛根提取物、雌二醇、孕激素处理Ishikawa细胞48小时后,提取总RNA,进行RT-PCR反应后,电泳、凝胶图像分析仪器采集图像,分析灰度值。结果:1、葛根提取物对Ishikawa细胞体外增殖作用有明显的抑制作用,并随着药物浓度增加其抑制作用更加明显,在一定浓度范围内均呈剂量依赖性。葛根提取物对Ishikawa细胞体外增殖抑制最显着的时间是加药后48小时,加药后72小时的抑制率虽然有所上升,
许浪[3]2007年在《益气养阴散结方对人体肺癌细胞增殖与凋亡影响的研究》文中研究说明目的：研究益气养阴散结方的药物血清对气阴两虚型肺癌患者的癌细胞增殖与凋亡，及其相关基因增殖性细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen，PCNA)和生存素(Survivin)的影响，探讨益气养阴散结方治疗肺癌的作用及其机制。方法：临床选择气阴两虚型肺癌患者1例，分离其癌细胞体外培养作为研究对象；通过给正常大鼠灌胃制备益气养阴散结方的药物血清，设为含药血清组，正常大鼠血清设为空白血清组，研究不同血清对肺癌细胞的影响。(1)采用噻唑蓝比色分析法(MTT)检测不同浓度药物血清对肺癌细胞增殖的影响；(2)用逆转录-多聚酶链式反应法(RT-PCR)检测药物血清对肺癌细胞PCNA mRNA表达的影响；(3)采用annexin V／PI双染色流式法检测药物血清对肺癌细胞凋亡的影响；(4)用RT-PCR检测药物血清对肺癌细胞Survivin mRNA表达的影响。所有数据均用SPSS12软件进行统计学处理。结果：(1)与空白血清组比较，5％、10％和20％浓度组的含药血清对肺癌细胞的增殖均有明显的抑制作用(P＜0.05)，其中10％含药血清组的抑制率显着强于5％含药血清组(P＜0.05)，但20％含药血清组与10％含药血清组比较无显着性差异(P＞0.05)。(2)与空白血清组比较，含药血清组肺癌细胞的PCNAmRNA表达明显降低，其差异具有极显着性(P＜0.01)。(3)与空白血清组比较，含药血清组肺癌细胞的凋亡率明显增高，其差异具有极显着性(P＜0.01)。(4)与空白血清组比较，含药血清组肺癌细胞的Survivin mRNA表达明显降低，其差异具有显着性(P＜0.05)。结论：(1)益气养阴散结方药物血清对气阴两虚型肺癌患者的肺癌细胞有显着的抑制增殖和诱导凋亡的作用，这可能是其治疗肺癌的重要机制之一。(2)益气养阴散结方药物血清能降低肺癌细胞PCNA基因的表达水平，这可能是其发挥抑制肺癌细胞增殖的分子机制之一。(3)益气养阴散结方药物血清能降低肺癌细胞Survivin基因的表达水平，这可能是其发挥诱导肺癌细胞凋亡的分子机制之一。
崔娟[4]2011年在《吴茱萸碱联合CDK1抑制剂对鼠结肠癌的协同杀伤作用》文中研究指明一.研究目的及意义结肠癌是消化道常见的恶性肿瘤之一,随着生活水平的不断提高,结肠癌发病率有不断上升的趋势。结肠癌晚期治疗目前仍以放,化疗为主,但患者生活质量差,还有骨髓抑制,过敏反应等不良反应,但大量的临床实践证明,中医药或中西医结合能提高恶性肿瘤疗效,同时能减轻放化疗的不良反应。中药的某些有效成分能有效地抑制肿瘤细胞生长。前期研究证明吴茱萸碱(EVO)诱导肿瘤细胞凋亡的作用发生在G2/M期阻滞,存在M期阻滞(M-arrest)与M期滑移(M-slippage)现象。本实验研究吴茱萸碱联合CDK1抑制剂对鼠结肠癌CT26细胞的协同杀伤作用,基于M期阻滞(M-arrest)与M期滑移(M-slippage)机制,探讨序贯用药是否优于同时加药,并以前面实验的方法和条件为基础试探性地从药效方面探索吴茱萸碱及阳性对照药紫杉醇诱导M-arrest后,加入CDK1抑制剂,可协同性提高前者的凋亡率,阐明这一理论将为肿瘤的临床用药提供科学依据,为进一步寻找更多针对细胞周期的有效中药成分和开拓以药物作用机制为靶点进行中药复方组方的理论打下基础,对抗肿瘤中药新药开发提供实验数据。二.研究方法：2.1用MTT法寻找吴茱萸碱诱导CT26细胞凋亡的不可逆时间点,第一大组用吴茱萸碱4mg/L分别作用时间是16h；20h；24h；28h后分别加入MTT,孵育4小时,再加150μ1的DMSO溶解,酶标仪侧,同时另一大组与上述浓度维持培养时间后再各释放12h,即用含10%小牛血清的RPMI-1640培养基培养12h后再测MTT2.2用MTT法比较吴茱萸碱及紫杉醇联合R03306或靛玉红同时用药与序贯用药对CT26细胞的抑制作用。分组为吴茱萸碱或紫杉醇2mg/L,4mg/L组：R03306 (15mg/L)后加药组或靛玉红(20mg/L)后加药(后6小时)组；R03306或靛玉红同时加药(30小时)组；吴茱萸碱及紫杉醇联合R03306或靛玉红序贯用药组；吴茱萸碱及紫杉醇联合R03306或靛玉红同时用药组。2.3用集落形成实验观察吴茱萸碱及紫杉醇联合R03306或靛玉红同时用药与序贯用药对CT26细胞抑制率的影响。2.4用流式细胞术比较吴茱萸碱联合R03306或靛玉红同时用药与序贯用药对CT26细胞的影响；紫杉醇联合R03306或靛玉红同时用药与序贯用药对CT26细胞细胞周期、凋亡指数的检测.叁.研究结果3.1茱萸碱(EVO)诱导CT26细胞凋亡的不可逆时间点,MTT结果显示第一大组吴茱萸碱作用CT26细胞16h；20h；24h；28h后抑制率分别为42.1%±4.1%；45.6%±11.1%；47.6%±5.1%；36.1%±5.6%；同时另一大组维持培养时间后再各释放12h后抑制率分别是35.0%±2.2%；31.8%±4.0%；58.9%±1.5%；64.7%±4.2%.吴茱萸碱作用24h时间点,EVO释放组中细胞抑制率却比EVO组明显增加；作用大于24h,EVO释放组比EVO组抑制率增加更显着(P<0.01),推测此时吴茱萸碱诱导的细胞凋亡已经进入不可逆阶段,因此吴茱萸碱诱导不可逆凋亡的时间转折点可能在24h左右。3.2吴茱萸碱(EVO)及紫杉醇联合CDK1抑制剂R03306或靛玉红序贯用药作用CT26的协同杀伤,MTT结果显示吴茱萸碱及紫杉醇联合R03306或靛玉红序贯用药的协同杀伤明显优于吴茱萸碱及紫杉醇联合R03306或靛玉红同时用药作用30h的杀伤作用,采用金正均q值法计算,序贯用药的q值大于1.15,显示协同性增效作用,而同时用药组的q值均小于0.85,无协同性作用。3.3集落形成实验结果显示吴茱萸碱及紫杉醇联合R03306或靛玉红作用CT26细胞的序贯用药与同时用药对CT26细胞抑制率的影响,分组和用药同前,显示序贯用药联合组的q值大于1.15,为协同性。而同时用药组的q值均小于0.85,无协同性作用3.4式细胞术显示吴茱萸碱联合CDK1抑制剂作用CT26细胞的序贯用药具有协同性,紫杉醇联合最特异的CDK1抑制剂诱导凋亡,序贯用药联合组的q值均大于1.15,具有协同增效作用,而同时用药联合组的q值均小于0.85,无协同性作用。四.结论吴茱萸碱作用的不同时间点进行MTT检测,检测到作用24h后是吴茱萸碱诱导CT26细胞凋亡的转折点,本研究通过MTT法、克隆集落形成法、流式细胞法研究吴茱萸碱与CDK1特异性抑制剂R03306或靛玉红联合用药,紫杉醇与CDK1特异性抑制剂R03306或靛玉红联合用药,对结肠癌细胞CT26细胞的效应,结果表明：吴茱萸碱及紫杉醇与R03306或靛玉红联合并序贯用药,能够明显地提高吴茱萸碱对CT26的抑制率,获得协同效应,但二者同时联合用药却无类似协同效应。
参考文献：
[1]. 连黛胶囊治疗胃肠肿瘤临床疗效观察与分子机理研究[D]. 杨传标. 广州中医药大学. 2001
[2]. 葛根提取物对子宫内膜癌细胞体外增殖的影响及机理研究[D]. 黄文玲. 北京中医药大学. 2006
[3]. 益气养阴散结方对人体肺癌细胞增殖与凋亡影响的研究[D]. 许浪. 湖北中医学院. 2007
[4]. 吴茱萸碱联合CDK1抑制剂对鼠结肠癌的协同杀伤作用[D]. 崔娟. 广州中医药大学. 2011
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