邓赟1周黎明2丁一3
1成都市第五人民医院，611130
2四川大学基础医学与法医学院药理学教研室，610041
3四川大学口腔疾病研究国家重点实验室，610041
【摘要】目的研究中药复方黄芪合剂对牙周炎大鼠牙周袋菌群的影响并探讨其有效剂量方法采用刮匙法取样大鼠龈下菌斑，进行分离、培养、坚定，比较牙周炎模型对照大鼠和经过复方黄芪合剂治疗的大鼠的龈下厌氧菌检出率以探讨复方黄芪合剂是否具有抑菌作用及其有效剂量。结果牙周炎模型对照大鼠的龈下厌氧菌检出率高于正常大鼠；经过高、中剂量复方黄芪合剂治疗的大鼠的龈下厌氧菌检出率低于牙周炎模型对照大鼠。结论高、中剂量（900mg/kg/d、450mg/kg/d）复方黄芪合剂对大鼠龈下厌氧菌有一定抑菌效果。
【中图分类号】R9【文献标识码】A
【Abstract】Objective:ToobservewhetherFufanghuangqihejicaninhibitsubgingivalanaerobicbaterialsofratswithexperimentalperiodontitis.Methods:Themodelofexperimentalperiodontitisofratsareestablished.WeuseFufanghuangqihejiwithdifferentdosestotreatthem,andcomparetherateofsubgingivalanaerobicbaterials.Result:Theratesofsubgingivalanaerobicbaterialsofratswithexperimentalperiodontitisarehigherthannormalrats;AfterreceivingthetreatmentofFufanghuangqihejiwithhighandmiddledose,theratesofbacterialsarelowerthanmodelrats.Conclusion:Fufanghuangqihejiwithhighandmiddledosecaninhibitbacterials.
牙周炎是以牙菌斑为始动因子的多因素疾病，可导致牙齿的松动和脱落，是我国成人失牙的主要原因。药物治疗是牙周炎的重要治疗手段之一，其中抑菌药物又是常用药物。复方黄芪合剂是一种中成药，其主要成分包括黄芪、玄参、地黄、和延胡等。已有多个研究证明这些主要成分在体外和体内具有抑菌作用【1-3】。本文观察不同剂量的复方黄芪合剂是否对牙周炎大鼠的龈下厌氧菌群有影响。
材料与方法
药物、试剂：复方黄芪合剂为黄棕色浸膏粉，规格：608浸膏粉/袋，标示量：5.3g(生
药）/g浸膏粉，批号：080601（由四川大学基础与法医学院药理学教研室提供）；0.5%羧甲基纤维素钠（天津市科密欧化学试剂开发中心，批号：20050823）、EDTA脱钙液、醋酸泼尼松龙、5g/100ml水合氯醛。
大鼠牙周炎模型的建立：将50只Wistar大鼠按体重随机分成5组，分别为正常组（非模型组，N组），牙周炎组（模型对照组，P1组），复方黄芪合剂高剂量组（P2组），复方黄芪合剂中剂量组（P3组），复方黄芪合剂低剂量组（P4组），每组10只，雌雄各半，并编号标记后采用腹腔注射浓度为5g/100ml的水合氯醛对大鼠（1ml/kg）进行麻醉，将麻醉后的大鼠固定于手术台上，充分暴露左上颌第一磨牙，探针分离牙龈后，用0.2mm的正畸钢丝结扎P1-P4组大鼠左上颌第一磨牙牙颈部，于结扎后第2天开始每只大鼠股四头肌注射醋酸泼尼松龙混悬液(1ml/kg),两天给药一次，总共注射十次，建模期间采用10%高糖水喂养。
N组作为对照，同步于建模大鼠，每只大鼠股四头肌注射生理盐水（1ml/kg）,两天给药一次，总共注射十次，期间正常饲养。
20天后所有大鼠停止注射，正常饲养，并随机抽取各组大鼠2只（雌雄各1只）局麻下处死，解剖出上颌骨，于4%多聚甲醛中固定，拍摄X线片及制备病理切片，以确定建模是否成功。
给药治疗：确定牙周炎建模成功后，去除大鼠结扎丝，正常饲养一周后给药治疗。复方黄芪合剂按临床用量等效换算成大鼠用量后，溶于0.5%羧甲基纤维素钠中，配成溶液，采用经口灌胃给药方式进行给药。N组灌服生理盐水（1ml/100g/d）、P1组灌服0.5%羧甲基纤维素钠（1ml/100g/d）、P2组灌服高剂量受试药（900mg/kg/d）、P3组灌服中剂量受试药（450mg/kg/d）、P4组灌服低剂量受试药（90mg/kg/d），共计给药30天。
龈下厌氧菌的取样、培养、分离及鉴定：刮匙法取样大鼠龈下菌斑后，厌氧培养、分离及作反应板微量快速生化实验，鉴定细菌种属。
统计分析：采用SPSS13.0统计软件，按随机化区组设计资料的方差分析进行统计分析。
结果
正常（非牙周炎）大鼠x片组织病理学切片观察到正常大鼠牙龈上皮附着于釉牙骨质界处,牙周膜纤维走向正常（如图1）。建模大鼠炎细胞重度浸润，结合上皮向根方增殖、延伸，附着丧失程度较重，沟内上皮糜烂呈网眼状形成深牙周袋，牙槽骨明显吸收（如图2）。
由组织病理学观察结果可证明本实验采用的钢丝结扎加高糖水饲养加激素注射成功建立了大鼠实验性牙周炎模型。
大鼠一般情况的观察：建模大鼠从建模开始后摄食减少，体重与正常组比较，降低明显，且毛发不光滑，但经复方黄芪合剂治疗后摄食增加，体重增加，毛发逐渐变得光滑。
大鼠龈下厌氧菌的取样、分离、鉴定结果:
讨论
大鼠建立实验性牙周炎模型后，摄食减少，毛发无光泽，行动迟缓，与牙周炎肾虚患者的临床表现相似。体重与正常未造模大鼠相比下降明显。采用复方黄芪合剂治疗一月后，大鼠毛发逐渐变光滑，体重也恢复到正常未造模大鼠的水平。说明复方黄芪合剂无论剂量，均可改善大鼠一般状况，可能与其中药成分对全身代谢的调节作用有关。
细菌在牙周微生态中存在共生、共栖、竞争和拮抗等多种相互关系【4】。牙周炎的发生与宿主抵抗力下降、致病菌（主要为厌氧菌）定居并大量繁殖、正常菌群减少，局部菌群失调有关。若宿主有足够的抵抗力，牙周微环境中有较多的有益菌，则可长期保持牙周健康。复方黄芪合剂中的各主成份也具有抗炎、增强免疫的作用【5】，复方黄芪合剂可能通过调节宿主全身防御反应、提高抵抗力而使龈下厌氧菌检出率下降。复方黄芪合剂的抑菌作用也可能是由其各主成份的抑菌作用相叠加而引起。
本实验结果表明高、中剂量（900mg/kg/d、450mg/kg/d）的复方黄芪合剂有一定的抑菌作用，可使牙周厌氧致病菌减少，控制致病菌过度繁殖，达到治疗牙周炎的目的，为中药治疗牙周炎提供了一定的依据。
参考文献
1.杨怀霞，马庆一，郑志峰.富含生物碱的7种中草药提取液抑菌活性观察.郑州大学学报.医学版2004.09.15;39(5)：859-861
2.陈少英,贾丽娜,刘德发,等.玄参叶的抗菌和毒性作用.福建中医药,1986,17(4):57
3.郑瑶，周秀青，班红艳等.补肾合剂对大鼠牙周袋菌群的影响.北京口腔医学.2005.13.2：79-82
4李德懿主编.牙周微生物学[M].天津科技翻译出版公司，1994：161-168
5吴建新，等.黄芪、当归及其配伍对大鼠血小板聚集和血小板中cAMP、cGMP的影响[J].中药药理与临床.1992，8（1）：16-18
论文作者:邓赟1周黎明2丁一3
论文发表刊物:《中国耳鼻咽喉头颈外科》2015年8月第8期供稿
论文发表时间:2015/9/11
标签：大鼠论文; 合剂论文; 黄芪论文; 牙周炎论文; 复方论文; 厌氧菌论文; 剂量论文; 《中国耳鼻咽喉头颈外科》2015年8月第8期供稿论文;