（1武汉大学生命科学学院 湖北 武汉 430072）
（2武汉市儿童医院检验科 湖北 武汉 430072）
【摘要】 目的：分析2009～2015年湖北省和江西省所有年龄段病毒性腹泻感染状况；腹泻病人的年龄分布、性别分布、月分布及对A组轮状病毒和诺如病毒进行分型。方法：收集2009年1月～2015年12月湖北省和江西省各哨点医院的腹泻病人的粪便样本，检测诺如病毒、轮状病毒（A组、B组、C组）、肠道腺病毒、札如病毒、星状病毒，并对A组轮状病毒和诺如病毒进行分型。结果：1.引起腹泻的病毒主要是A组轮状病毒，其在两省中的总阳性率为48.51%。抗原A组轮状病毒血清学G型和P型检测显示在两省中以G1型、G3型和P[8]型居多；B组轮状病毒和C组轮状病毒的检出率分别为0.7%和0.3%。诺如病毒和腺病毒的检出率分别为5.7%和5.23%,其中诺如病毒以GII型居多，高达97～98%。星状病毒的检出率为2.64%；札如病毒的检出率为0.32%。2.发生腹泻的主要是5岁以下儿童，特别是不满周岁和1岁的儿童。3.在性别上，男性患者要多于女性；在季节分布上在5～11月份腹泻概率较高。结论：在湖北省和江西省，引起腹泻的病毒主要是A组轮状病毒,特别是G1P[8]型和G3 P[8]型A组轮状病毒。发病高峰期在夏季-秋季，以5岁以下儿童为主。
【关键词】 病毒性腹泻各病毒检出率；A组轮状病毒血清学分型；诺如病毒分型；流行病学研究
【中图分类号】R18 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）30-0354-03
腹泻是人类一种常见的疾病，一直威胁着人类的健康，据调查显示在世界范围内婴幼儿死亡病例中大约1/9与腹泻相关[1]，并且仅腹泻本身就占全球疾病经济负担值的4.1%[2]。引起腹泻的因素有很多，包括病毒、致病细菌和寄生虫等[3]，其中引起腹泻的病毒有诺如病毒、札如病毒、轮状病毒、腺病毒、星状病毒等，这些病毒可通过污染的食物、水源、物品、空气等传播，经常在学校、社区、餐馆、医院等人群密集区域暴发，故极大影响了人类的健康和损害了经济的发展，所以，对其致病的因素进行长时间的监测就显得十分重要。本文主要对腹泻症候群中各种腹泻相关病毒进行监测，以达到对病毒性腹泻的预防和治疗目的[4]。
1.腹泻症候群流行病学检测流程
1.1 监测实验室
武汉大学病毒学实验室；湖北省的哨点医院有湖北省疾病预防控制中心、华中科技大学同济医院、武汉科技大学汉阳医院、武汉市儿童医院、武汉市第一医院等；江西省的哨点医院有江西省儿童医院、南昌市高新开发区医院。
1.2 检测内容和方法
监测病例为每日排便3次以上，且大便性状有改变（呈稀便、水样便、粘脓便或脓血便等）的门诊病例；监测对象为符合病例定义的各年龄组门诊病例；监测时间为2009年1月～2015年12月；监测病原体种类为诺如病毒、轮状病毒（A组、B组、C组）、肠道腺病毒、札如病毒、星状病毒。
1.3 标本的采集、运输和保存
本实验所采集的标本为粪便，由医院受过培训的人员来实行，采集的粪便用无菌容器盛装。标本采集后置于4℃，两天之内由专门配送人员将其置于冷藏包中送于监测实验室。
1.4 标本的处理
样本制成10%便悬液后，取上清，检测前先将一部分样本分装1～2ml至无菌冻存管中，-80℃冰箱永久保存，另一部分进行下面的检测实验。
1.5 样本的检测
A组轮状病毒主要采用ELISA的方法对其抗原进行检测，对于阳性的样本进行G、P分型，其他病毒如诺如病毒，札如病毒，B组和C组轮状病毒，腺病毒，星状病毒等用PCR/RT-PCR进行核酸检测。
（1）抗原的检测：根据ELISA说明书进行操作，在此不再累述。
（2）核酸的提取：核酸提取用QIGEN商品化的核酸提取试剂盒进行提取，提取步骤见说明书。并将提取后的核酸适当分装，至少保存一份至-80℃，以便后续研究和抽样检测。
（3）核酸的检测：首先进行模板的制备：对于RNA病毒应首先将提取的RNA逆转录为cDNA,以便于长时间稳定保存。对于DNA病毒可直接检测，除了腺病毒为DNA病毒以外，其他几种致腹泻病毒均为RNA病毒。
（4）质量控制：每一次实验中，抗原检测、核酸提取和检测过程中须设立阴性和阳性对照[5]。
1.6 结果处理
利用EXCEL表格中的数据透视图对结果进行处理。
2.实验结果
2.1 各类病毒在湖北省和江西省的检出率和分型结果
2.1.1核酸检测诺如病毒结果
表1
表2显示A组轮状病毒是引起腹泻的主要病毒，其检出率在湖北省和江西省高达49.6%和30.65%，总阳性率为48.51%。
表3
表5显示在在湖北省和江西省中C组轮状病毒检出分别为0.25%和0.75%，总检出率为0.3%。
2.1.3腺病毒核酸检测结果
表6
表8显示星状病毒在湖北省和江西省检出率分别为2.31%和4.5%，总检出率为2.64%。
3.腹泻病人的年龄分布、性别分布、月分布。
3.1 年龄分布
图1相对年龄组腹泻病例人数（横坐标是年龄组（岁），纵坐标是腹泻人数）
从图1中可以看出，各个年龄段都有腹泻病例，但主要是5岁以下儿童，特别是不满周岁和1岁的儿童这就提醒有孩子的家长要注对此做好预防措施。
3.2 性别分布
表9腹泻发生的性别差异
表9显示腹泻发生病例中男性要高于女性。
3.3 月分布
图2在湖北省和江西省各个月发生腹泻的人数(横坐标-月份纵坐标-腹泻人数)
从图2中可以看出5～11月份发生腹泻的概率较高。
4．结果讨论
从对2009～2015年的湖北省和江西省共11406例的腹泻病例的调查和流行病学研究发现，各个年龄段都有腹泻病例，但主要是5岁以下儿童，特别是不满周岁和1岁的儿童，这就提醒家长要对此做好预防措施。另外在性别上，男性患者的比例要明显要高于女性；在月份上以5～11月份腹泻发生的概率比较高[6]。
A种轮状病毒根据VP7和VP4两种结构蛋白的不同可分为G/P亚型。至今为止，已经在人类和动物身上发现了27种G亚型和37种P亚型[7]。在人类中主要亚型有G1、G2、G3、G4 和G9 ，并且这几种亚型通常和P[4]、P[6]和 P[8]亚型相联系[8, 9]。G1P[8], G2P[4], G3P[8], G4P[8]和G9P[8],这五种G/P联合在世界范围内的轮状病毒中占据大约90%[10]。本文通过对引起腹泻的几种病毒的流行病学研究发现，引起腹泻的病毒主要是A组轮状病毒，其在湖北省和江西省中的总阳性率高达48.51%。其血清学P型检测以P[8]型居多，占P分型的92.8%（湖北省）；G型检测以G1型和G3型居多，占G分型的55.2%和34.8%；G1P[8]和G3P[8]型的比例高达53.3%和32.4%。在腹泻症候群中B组和C组轮状病毒检出率较低，分别为0.7%和0.3%；诺如病毒和腺病毒的检出率分别为5.7%和5.23%,其中诺如病毒以GII型居多，高达97～98%；星状病毒的检出率为2.64%，札如病毒的检出率为0.32%。以上数据显示在我国湖北省和江西省腹泻的主要致病病毒为A组轮状病毒，其次是诺如病毒和腺病毒。
对腹泻症候群中各病毒检测和流行病学分析，一方面可以获得我国各地区的腹泻病原谱，从而可以在流行阶段做好相应的检测、预防和治疗措施，以达到最大限度的降低其损失和最快的速度治愈的目的。另一方面，通过对分离出来的病原体进行鉴定、基因变异、分子分型等特征进行分析，可以了解主要病原体的变异、变迁和流行规律，从而提高对突发腹泻疫情的应急处理能力。
【参考文献】
[1] Liu, L., et al., Global, regional, and national causes of child mortality: an updated systematic analysis for 2010 with time trends since 2000. Lancet, 2012. 379(9832): p. 2151-61.
[2] Das, J.K., R.A. Salam and Z.A. Bhutta, Global burden of childhood diarrhea and interventions. Curr Opin Infect Dis, 2014. 27(5): p. 451-8.
[3] Rathaur, V.K., et al., Clinical study of acute childhood diarrhoea caused by bacterial enteropathogens. J Clin Diagn Res, 2014. 8(5): p. PC01-5.
[4] Li, L.L., et al., Aetiology of diarrhoeal disease and evaluation of viral–bacterial coinfection in children under 5 years old in China: a matched case–control study. Clinical Microbiology and Infection, 2016. 22(4): p. 381.e9-381.e16.
[5] 王宏,我国甘肃、江苏、吉林三省五岁以下腹泻住院儿童轮状病毒的分子流行病学研究,2009,中国疾病预防控制中心.第96页.
[6] 王跃生等, 河南地区5岁以下病毒性腹泻患儿流行特征及病原学监测. 现代预防医学, 2015(23): 第4290-4293页.
[7] Matthijnssens, J., et al.,Complete molecular genome analyses of equine rotavirus A strains from different continents reveal several novel genotypes and a largely conserved genotype constellation.J Gen Virol, 2012. 93(Pt 4): p. 866-75.
[8] Santos, N. and Y. Hoshino, Global distribution of rotavirus serotypes/genotypes and its implication for the development and implementation of an effective rotavirus vaccine. Rev Med Virol, 2005. 15(1): p. 29-56.
[9] Khamrin, P., et al., Novel porcine rotavirus of genotype P[27] shares new phylogenetic lineage with G2 porcine rotavirus strain. Virology, 2007. 361(2): p. 243-52.
[10] Santos, N., et al., Predominance of rotavirus genotype G9 during the 1999, 2000, and 2002 seasons among hospitalized children in the city of Salvador, Bahia, Brazil: implications for future vaccine strategies. J Clin Microbiol, 2005. 43(8): p. 4064-9.
论文作者:韩冬洁1,向赟2,艾洪武2,刘映乐1,刘芳1,吴建
论文发表刊物:《医药前沿》2016年10月第30期
论文发表时间:2016/11/2
标签：病毒论文; 湖北省论文; 检出论文; 江西省论文; 核酸论文; 病例论文; 率为论文; 《医药前沿》2016年10月第30期论文;