山西省运城市食品药品检验所 044000
摘要：高效液相色谱法（HPLC），已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。近年来，在药品成分含量的测定中也得到广泛应用。本文针对采用高效液相色谱法对三七中各成分含量进行测定的方法做一阐述和分析，以期为三七药材的检验及质量控制提供参考。
关键词：高效液相色谱法；HPLC；三七；含量测定
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析[1]。
1三七来源及性状
三七为五加科植物三七的干燥根及根茎。支根习称“筋条”，根茎习称“剪口”。主根呈类圆锥形或圆柱形。表面灰褐色或灰黄色。顶端周围有瘤状突起。体重，质坚实，击碎后皮部与木部常分离，断面灰绿色、黄绿色或灰白色。气微，味苦回甜。筋条呈圆柱形，上端直径约0.8cm，下端直径约0.3cm。剪口呈不规则的皱缩块状及条状，表面有数个明显的茎痕及环纹，断面中心灰白色，边缘灰色[2]。
2质量标准
2.1《中国药典》2000年版一部三七项下规定
含量测定：照薄层色谱法进行扫描，本品含人参皂苷Rb1（C54H92O23）和人参皂苷Rg1（C4d-172014）的总量不得少于3.8％[3]。
2.2《中国药典》2005年版一部三七项下新增根茎入药
（1）增订：水分：用水分测定法测定，不得过14.0％；总灰分：不得过6.0％；酸不溶性灰分：不得过3.0％；浸出物：用熟浸法测定，本品含甲醇浸出物不得少于16.0％。
（2）修订：含量测定用高效液相色谱法测定，本品按干燥品计算，含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1三者的总量不得少于5.O％[4]。
3含量测定及指纹图谱研究现状
3.1含量测定
3.1.1据报道，采用HPLC法系统分析了不同产地、不同采收期、不同规格三七中单体皂苷Rl、Rgl、Rbl、Rd的含量。色谱条件：色谱柱选用Nova—Pak Cl8柱（3.9mm×300mm）；流动相：乙腈一50mmol/l，磷酸二氢钾溶液（20：80），二元梯度洗脱；检测波长：203nm；流速：l.0ml/min。三七皂苷Rl、人参皂苷Rb、Rgl和Rd在5～25t范围内与峰面积呈良好线性关系。平均回收率依次为96.0％、93.0％、97.0％和l03.O％。实验结果表明云南三七单体皂苷含量总体上比非道地产区的广西和广东要高，但云南产区之间也有差异，含量在7.71％～9.72％；不同采收期三七单体皂苷的变化较明显，以生长前期（出苗期）皂苷含量最高。而不同规格三七单体皂苷的含量差异是明显的，总体上大规格三七含量较高，小规格的较低，但没有明显的规律性。
3.1.2有研究，应用HPLC/ELSD法测定三七药材中3种皂苷的含量。色谱柱：Hypersil氨基柱（4.0mm×200mm，5tma）；流动相为乙腈一异丙醇一lommol/L醋酸铵水溶液（冰醋酸调pH5.0）（75：20：5）；柱温：室温；流速：0.6 ml/min；ELSD雾化器温度：55％。三七皂苷Rl、人参皂苷Rg1和Rb的线性范围为1.0～10.Os。加样回收率为95.5％～102.5％。实验结果为三七中三七皂苷Rl、人参皂苷Rg1和Rbl的含量分别为ll.4652mg/g、27.7110mg/g、27.6729mg/g。
3.2指纹图谱研究
3.2.1据报道，应用HPLC法制定三七药材的指纹图谱检测标准。色谱柱：Nova—Pak Cl8分析柱（4.6mm×150mm，4tma）；流动相：乙腈一水二元梯度洗脱（17％～l00％的乙腈水溶液）；检测波长：210nm；流速：l.0ml／min；运行时间：60min（见图1）。
4结束语
高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代后期发展起来的一种分析方法，其发展十分迅猛，应用十分广泛。近年来，在保健食品、药品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。世界上约有80%的有机化合物可以用HPLC来分析测定。其仪器结构和流程多种多样。高效液相色谱仪一般都具备贮液器、高压泵、梯度洗提装置（用双泵）、进样器、色谱柱、检测器、恒温器、记录仪等主要部件。高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂，抗氧化剂、杀虫剂等物质的分析。
高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达29.4MPa）；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。
高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的 75%～80%）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。
参考文献：
[1]刘伟芬，李禄辉.三七皂甙类成分分析方法研究进展[J].中国中医药现代远程教育，2014，12（3）：162-163.
[2]陈朝.三七及其制剂中皂苷类成分含量测定方法研究概述[J].中医药导报，2017，（5）：49-53.
[3]姜涛，陈林明，林岱滨.超高效液相色谱法测定三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的方法研究[J].中国现代药物应用，2014，（20）：15-16.
[4]李晓波，杨紫刚，沈勇，孟珍贵，陈军文，张广辉，杨生超.HPLC法同时测定野三七中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1、Rd的含量[J].中国药师，2012，15（10）：1383-1385.
[5]郭建华，刘佳乐，黄亮，张利萍.高效液相色谱法同时测定三七提取物中三七皂苷R1与人参皂苷Rg1、Rb1含量[J].广东化工，2014，41（19）.
论文作者:曹本男
论文发表刊物:《健康世界》2018年21期
论文发表时间:2018/11/30
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