精制何首乌粉对大鼠的亚慢性毒性研究论文_王燕 冯化飞 李江敏 王亚东 陈东方 高慧艳 徐冰 李立 张

精制何首乌粉对大鼠的亚慢性毒性研究论文_王燕 冯化飞 李江敏 王亚东 陈东方 高慧艳 徐冰 李立 张

王燕 冯化飞 李江敏 王亚东 陈东方 高慧艳 徐冰 李立 张焱 张聪恪(河南省疾病预防控制中心 郑州 450016)

【摘要】目的 观察精制何首乌粉亚慢性毒性,评价其毒理学安全性。 方法 依据食品安全性毒理学评价程序和方法进行90 天喂养试验。

80 只SD 大鼠随机分为四组,每组10 只雌性与10 只雄性大鼠。将精制何首乌粉掺入基础饲料中喂饲。结果 试验期间动物的活动、摄食、饮水、排便等一般状况未见明显异常。90d 喂养试验各剂量组中各项指标均未见异常。高剂量组动物肝、肾、胃肠、脾、卵巢(睾丸)的检查结果未见明显与摄入样品有关的组织学病理改变。结论 在本试验条件下,精制何首乌粉是安全的。

【关键词】精制何首乌粉 亚慢性毒性 安全性 大鼠【中图分类号】 R2 【文献标号】 A 【文章编号】 2095-9753(2016)4-0250-02

何首乌为蓼科植物何首乌(Poly gonum multiflorum Thunb)的干燥块茎,在药用上有生何首乌与制何首乌之分。精制何首乌粉是在传统加工炮制技艺的基础上,采用新的焖蒸工艺精制而成。制何首乌味苦、甘、涩、性温,具有补肝肾,益精血,壮筋骨,乌须发之效,主要用于肝肾精血亏、头昏目眩、须发早白、腰膝酸软等症。

何首乌用药历史悠久,广泛用在临床,减肥,美容美发,食品保健等领域. 以往研究主要集中在何首乌急性毒性及30 天喂养等试验,很少有报道何首乌亚慢性毒性研究。为了解其安全性,本文依据食品安全性毒理学评价程序和方法对精制何首乌粉进行亚慢性毒性研究。

1 材料和方法1.1 样品 精制何首乌粉由河南嵩山生物科技有限公司生产、送检,样品为粉末状,塑料瓶装,100g/ 瓶。人体推荐量为5 g/ 天。

1.2 动物 离乳SD 大鼠,雌雄各40 只,由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供,合格证号:0013963,SPF 级。实验动物房许可证号:SYXK(豫)2012-0005,屏障环境。观察4 天后,雌雄分别按体重随机分为4 组,每组10 只。

1.3 饲料 全价营养饲料,由河南省实验动物中心提供,合格证号:0003618。

1.4 剂量设计 设低、中、高三个剂量组,分别为人体推荐量的25 倍、50 倍、100 倍,即2.08 g/kgBW、4.15 g/kgBW、8.30 g/kgBW。将受试物以大鼠体重8% 的摄食量计算掺入饲料中给予, 称取145.6 g 样品加29.05 g 酪蛋白加粉料至7 kg 为2.08 g/kg BW 剂量组的饲料、称取290.5 g 样品加58.1 g 酪蛋白加粉料至7 kg 为4.15g/kg BW 剂量组的饲料、称取581.0 g 样品加116.2 g 酪蛋白加粉料至7 kg 为8.30 g/kg BW 剂量组的饲料。另设一个对照组给予全价营养粉饲料,连续给予90 天。

2 观察指标及测定2.1 动物一般状况 进食、饮水及活动等。

2.2 生长发育指标 自试验开始至结束,每周称一次体重和2 次食物摄入量,观察体重变化,计算每周食物利用率和总食物利用率。

2.3 血液学及血液生化学检查 试验中期和试验末期各测一次。

用雅培CD3700 血细胞计数仪测定血红蛋白(HB),红细胞(RBC)、血小板(PLT)、白细胞(WBC) 计数及分类(NEU、LYM、MON、EOS、BAS);用拜耳ADVIA1200 全自动生化分析仪测定血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酐、胆固醇、甘油三酯、总蛋白、白蛋白、尿素氮、血糖(试剂盒由上海科华生物工程股份有限公司产)。

2.4 脏器系数 于试验结束后,断头处死大鼠,称取体重及其肝、肾、脾、卵巢(睾丸)的重量,计算脏体比。

2.5 病理组织学检查 对动物做大体病变检查,并将各组大鼠的肝、肾、脾、胃肠、卵巢(睾丸)等置10% 的甲醛溶液中固定。石蜡包埋切片,HE 染色,普通光镜观察。

2.6 试验数据用SPSS10.0 for Windows 软件进行方差分析。

3 结果3.1 动物一般状况 试验期间动物的活动、摄食、饮水、排便等一般状况未见明显异常。

3.2 精制何首乌粉对大鼠体重的影响经实验观察,雌、雄各剂量组动物的体重与对照组比较差异无显著意义(p > 0.05),说明精制何首乌粉在本试验条件下对动物的体重无明显影响。

3.3 精制何首乌粉对大鼠进食量和食物利用率的影响经过十周的对比观察,雌、雄各剂量组动物的进食量和食物利用率与对照组比较差异无显著意义,说明精制何首乌粉在本试验条件下对动物的进食量和食物利用率无明显影响。

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3.4 血液学检查结果雌、雄各剂量组动物的中期、末期血常规指标与对照组比较差异无显著意义,说明精制何首乌粉在本试验条件下对动物的血常规指标无明显影响。

3.5 血清生化检验结果各剂量组动物的中期、末期血液生化指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酐、胆固醇、甘油三酯、总蛋白、白蛋白、尿素氮、血糖)与对照组比较差异无显著意义,说明精制何首乌粉在本试验条件下对动物的血液生化指标无明显影响。

3.6 精制何首乌粉对脏器重量和脏器系数的影响各剂量组动物的肝、肾、脾、性腺的重量和脏器系数与对照组比较差异无显著意义,说明精制何首乌粉在本试验条件下对动物的脏器重量和脏器系数均无明显影响。

3.7 病理组织学检查各组动物剖检后肉眼观察各脏器颜色、形状、大小等均未见明显病变。病理检查标本为对照组、高剂量组的肝、肾、胃、肠、脾、卵巢(睾丸)。标本系甲醛固定,经水洗、修块、脱水、石蜡包埋、切片、HE 染色。受试物高剂量组动物肝、肾、胃肠、脾、卵巢(睾丸)的检查结果未见明显与摄入样品有关的组织学病理改变。

4 讨论中国民间自古就有食用何首乌的记载, 其具有多项保健及药用功能。有文献报道何首乌及其复方提取物对血脂、抗心肌缺血, 抑制动脉粥样硬化等有显著的调节作用。何首乌提取物能显著增强机体内SOD的活性,并能增强GSH -Px活性,即通过增强机体的抗氧化能力,改善心肌缺血损伤。何首乌总苷可抑制或延缓 As的形成与发展, 其对高脂血症及冠心病和动脉粥样硬化发生有一定的预防作用生何首乌几乎没有补血功效,而制何首乌则能明显改善血虚大鼠模型的各项血细胞指标,其提取物可能通过刺激体内骨髓基质细胞的增殖,改善造血干细胞及巨核细胞周围的造血微环境,从而实现它对Plt 生成的调控。何首乌饮能上调ER α、LHR、FSHR的表达而起到调节调控性激素,从而达到延缓快速老化小鼠卵巢衰老的作用,可能是何首乌饮防止衰老的作用机制之一,对H202 和FeS04 引起的大鼠睾ShLeyclig 细胞衰老有一定的保护作用。

何首乌虽具有多种保健药用功能,但其毒性也不容忽视。有试验表明在给小鼠灌胃何首乌全组水提组分和醇提组分均可出现死亡,以上三种样品的MTD 值分别为20.0g/kg、98.4 g/kg、78.0 g/kg, 分别相当于临床70kg 人每公斤体重日用量的116.7 倍、574.0 倍、455.0 倍。通过急性毒性试验发现,何首乌不同组分均具有毒性。

何首乌炮制品的毒价随着炮制时间的增加而显著降低,从实验中生何首乌和制何首乌对比考察对大鼠肝脏影响来看,制何首乌的毒性作用显著低于生何首乌,与生何首乌组比较,制何首乌对大鼠造成的肝脏损伤表现出: 造成损伤需要的时间更长( 5 周后) ,造成肝脏损伤程度更轻。

精制何首乌粉作为新资源食品申报,其毒性研究必不可少,尤其是亚慢性毒性研究。本文通过对精制何首乌粉90 天喂养试验得出如下结果:雌、雄各剂量组动物的体重、进食量、食物利用率、血常规、血生化、脏器重与脏器系数与对照组比较差异无显著意义(p> 0.05),各组动物剖检后肉眼观察各脏器颜色、形状、大小等均未见明显病变。受试物高剂量组动物肝、肾、胃肠、脾、卵巢(睾丸)的检查结果未见明显与摄入样品有关的组织学病理改变。表明本样品作为新资源食品,在食用中是安全的。

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论文作者:王燕 冯化飞 李江敏 王亚东 陈东方 高慧艳 徐冰 李立 张

论文发表刊物:《中国医学人文》2016年第4期

论文发表时间:2016/6/30

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