刘陆楠 闫赵娣 芮丽娜
河南省漯河市中医院药剂科 462000
摘要：目的：探讨建立鉴别中药决明子的高效液相色谱法（HLPC）方法，对中药决明子具有药理活性的化学成分（大黄素、大黄酚、大黄素甲醚）的含量进行测定。方法：利用HLPC鉴别中药决明子，对照品为橙黄决明素；利用HLPC测定中药决明子具有药理活性的化学成分（大黄素、大黄酚、大黄素甲醚）的含量；色谱条件：采用Waters Symmetry C18 液相色谱柱（150×4.6mm，5?m），流动相为甲醇：醋酸：水（10：10：80）进行梯度洗脱，流速为1.2ml/min，柱温为30 ℃，检测波长为260nm，进样量为15?l。结果：中药决明子中橙黄决明素与峰面积线性关系良好（r=0.9998）的范围0.0250-0.1550?g，精密度试验中RSD为0.78%、重现性试验中RSD为0.69%；中药决明子中大黄素含量为0.0700mg/g（RSD=0.78）、大黄酚含量为0.0700mg/g（RSD=0.78）、大黄素甲醚含量为0.0700mg/g（RSD=0.78）。结论：以橙黄决明素作为对照品的HLPC鉴别中药决明子的方法精密度、重现性良好，操作简便、快捷，利用HLPC测量中药决明子化学成分大黄素、大黄酚、大黄素甲醚均有可行性，准确性高。
关键词：决明子；HLPC；化学成分
中药决明子作为豆科、决明属，以决明成熟种子入药，中医性味为微寒，味甘、苦，主归肝经及大肠经，具有清肝明目、润肠通便的药效，用于治疗肝火目赤、眩晕目暗及大便不畅[1]。由于中药决明子的化学成分对于维持中药决明子的药效，通过对其化学成分含量进行控制，有利于提高药效、降低毒副作用及进一步提高药品质量标准。现代研究表明，中药决明子的主要化学成分分类为蒽醌类、萘并吡喃酮类、脂脂酸类及多糖药；但发挥抗病原菌、降低血压、抑制血小板聚集、降低血脂、保肝泻下等药理活性的主要化学成分为大黄素、大黄酚、大黄素甲醚[2]。随着中药决明子的化学成分研究不断深入，应用中药决明子制成的中成药广泛用于治疗眼疾、心脑血管疾病及消化系统疾病。为进一步提高对中药决明子的研究水平，本研究旨在探讨建立鉴别中药决明子的高效液相色谱法（HLPC）方法，对中药决明子具有药理活性的化学成分（大黄素、大黄酚、大黄素甲醚）的含量进行测定。
1.仪器与试剂
Satorius电子分析天平；Sk8200lh超声波清洗机；DHG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱；SY21-Ni4 型一列二孔电热恒温水浴锅；LC-3000A（双泵）液相色谱仪，N2000色谱工作站；决明子、橙黄决明素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚，甲醇、醋酸、水均为色谱纯。
2.方法与结果
2.1色谱条件
采用Waters Symmetry C18 液相色谱柱（150×4.6mm，5?m），流动相为甲醇：醋酸：水（10：10：80）进行梯度洗脱，流速为1.2ml/min，柱温为30 ℃，检测波长为260nm，进样量为15?l[3]。在此色谱条件下，橙黄决明素与其它成分分离效果显著，分离度R＞1.5（图1）。
图1 橙黄决明素对照品（A）、供试品（B）和阴性对照品（C）的HLPC图
2.2实验步骤
2.2.1对照品及供试品试剂制备
精密称取对照品0.7302mg，置于50ml离心管，加入50ml的20%甲醇溶液，稀释至140?g/ml，作为对照品试剂；精密称取1.0368g决明子，置于100ml离心管，加入50%甲醇溶液，精密称取重量，超声处理15min，补足损失重量，过滤，取滤液作为供试品试剂。
2.2.2线性关系考查
精密吸取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4、2.8、3.2、4.8、5.2ml橙黄决明素对照品试液，置10ml定量瓶中，用20%甲醇溶液，稀释至刻度，按照“2.1项”的色谱条件进行测定。结果：橙黄决明素在0.0250-0.1550?g范围内，进样量（X）与峰面积（Y）的回归方程：Y =2.968×106 X-3.0026×104（r=0.9998）。
2.2.3精密度试验
精密吸取橙黄决明素对照品试液15?l，连续进样6次，按照“2.1项”的色谱条件进行测定，峰面试分别为302361，302478，302368，302471，302468，302369，RSD=0.78%；结果表明，HLPC检测方法精密度良好。
2.2.4重现性试验
精称橙黄决明素供试液15?l，连续进样6次，按照“2.1项”的色谱条件进行测定，峰面试分别为246123，246235，246368，246297，246301，246309，RSD=0.69%；结果表明，HLPC检测方法重复性良好。
2.2.5腺苷含量测定
精称供试液及大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照液各15?l，按照“2.1项”的色谱条件进行测定峰面积及计算各供试品浓度；详情见表1。
表1：决明子大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的测定结果
3.讨论
本研究，对决明子化学成分进行特异性鉴别及含量测量。橙黄决明素及黄素、大黄酚、大黄素甲醚均含有水溶性羟基，易溶于水及甲醇等极性溶剂，提供完全且简便，以甲醇：醋酸：水（10：10：80）为流动相进行梯度洗脱，可以显著分离橙黄决明素。利用HLPC标准对照法，可以准确检测决明子化学成分大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量。
4.结论
以橙黄决明素作为对照品的HLPC鉴别中药决明子的方法精密度、重现性良好，操作简便、快捷，利用HLPC测量中药决明子化学成分大黄素、大黄酚、大黄素甲醚均有可行性，准确性高。
参考文献：
[1]董晓强，尹占芳.决明子的化学成分及药理作用研究[J].中国当代医药，2013，20（7）：18-19，23.
[2]金利思，翁金月.决明子的研究与开发进展[J].海峡药学，2012，24（3）：42-44.
[3]焦素芳，韩海东.决明子的化学成分与药理作用[J].临床合理用药杂志，2010，03（14）：81-82.
论文作者:刘陆楠,闫赵娣,芮丽娜
论文发表刊物:《健康世界》2015年13期供稿
论文发表时间:2015/11/13
标签：决明子论文; 黄素论文; 甲醚论文; 中药论文; 橙黄论文; 大黄论文; 色谱论文; 《健康世界》2015年13期供稿论文;