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摘要：将分散液相微萃取与高效液相色谱技术相结合，建立了水果样品中除虫脲、灭幼脲和氟铃脲残留农药分析的新方法。对影响萃取和富集效率的因素进行优化。萃取条件选定为：在5.0 mL水果样品溶液中迅速加入60.0 μL萃取剂四氯化碳和1.0mL乙腈分散剂，分散均匀后以3200 r min-1 离心5 min，四氯化碳沉积到试管底部，取尽吹干用流动相复溶后高效液相色谱测定。3种杀虫剂的检出限在0.5 ~ 1.5 μg·kg -1（S / N = 3：1）之间；线性范围为10 ~ 160 μg·kg -1；相关系数在0.9981 ~ 0.9988之间；平均添加回收率在83.0 % ~ 94.7 % 之间；相对标准偏差小于6.1 %。本方法已成功应用于实际水果样品中3种残留农药的测定，方法的准确度、精密度和灵敏度均达到农残分析要求。
关键词：分散液相微萃取；高效液相色谱；苯甲酰脲类农药
1 引言
除虫脲、灭幼脲、氟铃脲属于苯酰基脲类农药，具有杀虫、杀螨、杀线虫等生物活性，广泛用于粮食、蔬菜和水果的有害生物防治。对人畜毒性相对较低，是我国农业部推荐的无公害农药品种，但其残留对人体有潜在危险。因此，建立水果中这类残留农药测定方法具有十分重要的意义。
苯甲酰脲类农药残留的样品前处理方法主要有液液萃取[1]、固相萃取[2]、基质分散固相萃取[3]等。这些前处理方法操作繁琐、灵敏度、准确度和重现性差，且样品用量较大；需要使用大量对人体和环境有毒或有害的有机溶剂。2006年，Rezaee等首次提出了分散液相微萃取技术（DLLME）[4]，该技术集采样、萃取和浓缩于一体，操作简单、快速、成本低，有机溶剂用量少，对环境友好，灵敏度和富集效率高。分散液相微萃取技术大多应用于环境和水样中痕量物质残留的分析。目前将分散液相微萃取高效液相色谱法应用于水果苯甲酰脲类残留农药的检测还未见报道，本实验建立了苹果样品中3种农药的分散液相微萃取高效液相色谱的分析方法，取得了满意的结果。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
Agilent 1100 高效液相色谱仪、G1315B DAD 检测器；农药对照品（购于农业部环境保护科研监测所）；二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、四氯乙烷、甲醇、丙酮、四氢呋喃、乙腈和无水乙醇等有机溶剂均为色谱纯；
2.2 高效液相色谱条件
色谱柱：Kromasil C18 柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；线性梯度洗脱方式：流动相A为水，流动相B为甲醇，洗脱程序为B从80%线性增加至100；分析时间：25min。检测波长：254nm；流速：1.0 mL·min-1；柱温：25 °C。进样量：20.0 μL。
2.3 样品前处理
将水果样品在组织捣碎匀浆机中捣碎后，称取20.0 g分装于5 mL离心试管中，振荡摇匀后，12000 r ·min-1离心10 min，0.45 μm滤膜过滤，用水定容到25 mL量瓶中。得到的水果样品溶液按“2.4实验方法”进行萃取、测定。
2.4 实验方法
精密移取5.0 mL水果样品溶液，置10 mL带塞尖底离心管中，加入0.25 g NaCl，将含有60.0 μL四氯化碳的1.0 mL乙腈溶液快速注入离心管中，轻轻振荡30 s，混合液则形成一个水/乙腈/四氯化碳的乳浊液体系，四氯化碳均匀地分散在水相中。室温放置5.0 min，以3200 r ·min-1 离心5 min，四氯化碳沉积到试管底部，用微量进样器吸尽萃取溶剂并转移到0.5 mL离心管中，室温下吹干，用100.0 μL流动相溶解，取20.0 μL进行色谱分析。
3 实验结果与讨论
3.1 萃取剂种类和体积的选择
萃取剂需满足一定的要求：①密度必须大于样品溶液和分散剂；②对待测物有较高的萃取能力；③不易溶于样品溶液易溶于分散剂。本试验分别考察了二氯甲烷、二氯乙烷、氯仿、四氯化碳、四氯乙烷对农药的萃取能力，结果表明四氯化碳有较高的萃取效率。为了评价萃取剂体积对萃取效率的影响，在分散剂体积不变的条件下，依次分别加入40.0，60.0，80.0和100.0 μL四氯化碳，结果表明：当四氯化碳体积为60.0 μL时，萃取效率最高。
3.2 分散剂种类和体积的选择
分散液相微萃取方法要求分散剂必须与水和萃取剂有良好的溶解能力。这样可以使萃取溶剂在水相中均匀的分散成细小的液滴，使溶液形成一个水/分散剂/萃取剂的乳浊液体系，增大萃取溶剂与待测物的接触面积，从而提高萃取效率。本实验以乙腈、丙酮、四氢呋喃、甲醇为考察对象。结果表明：乙腈的萃取效率最高。分散剂的体积直接影响乳浊液体系的形成，它会通过影响萃取剂在水中的分散程度来影响萃取效率。乙腈体积小时，萃取剂不能均匀的分散在水相中，体积较大时，待测物在水中的溶解度加大不易被四氯化碳萃取。考察了乙腈体积（0.3，0.5，0.8，1.0和1.2 mL）对萃取效率的影响。结果显示：乙腈体积为1.0 mL时萃取效率最高。
3.3 萃取时间的选择
在分散液相微萃取中，萃取时间是指在水相中注入了含有四氯化碳的乙腈混合液后到开始离心之前这段时间。将萃取时间分别设置为5.0，10.0，15.0，20.0和30.0 min。实验结果表明：萃取时间对萃取效率没有显著地影响。故实验选取萃取时间为5.0 min。
3.4 盐浓度的影响
由于盐析效应，在样品基质中加入盐能降低待测物在基质中的溶解度，使更多的待测物转移到有机相中，从而提高萃取效率。分别考察了NaCl浓度在0 %，1 %，3 %，5 %和10 %（w/v）时对5种农药萃取效率的影响。结果表明：当样品中加入NaCl浓度为5 %时，5种农药的萃取效率最高。
3.5 方法的线性关系和检出限
分别准确称取20.0 g已经匀浆的空白水果样品分装于5 mL带塞离心试管中，加入适量除虫脲、灭幼脲、氟铃脲、氟虫脲的混合标准溶液，然后按“2.3 样品前处理”方法进行处理，得到系列混合标准溶液。按“2.4 实验方法”萃取，以待测物的峰面积Y对浓度X（μg·kg -1）作标准曲线进行测定。3种农药的线性关系良好，结果见表1。检出限（S/N=3）在 0.5～1.5 μg·kg -1 之间，可满足实际样品的测定。
表 1 苹果样品中DLLME-HPLC方法的分析数据
4 结论
本实验建立了分散液相微萃取高效液相色谱技术快速、灵敏的分析苹果样品中3种杀虫剂残留的新方法。实验结果表明，与传统的萃取方法相比，本方法具有操作简单、快速、准确、低成本、环境友好等优点。目前分散液液微萃取技术主要用于水样中痕量成分的测定，而本实验将该技术用于复杂基质的水果样品的测定，取得满意的结果，这对于拓宽分散液相微萃取技术的应用范围具有指导意义。
参考文献：
[1] LI Jing（李晶），DONG Feng-Shou（董丰收），LIU Xin-Gang（刘新刚），YAO Jian-Ren（姚建仁），DU Chuan-Yu（杜传玉），ZHENG Yong-Xin（郑永权）.Pesticide Science and Administration，（农药科学与管理），2008，29（2）：19～22
[2] ZHANG Qing-Ming（张清明），HUA Ri-Mao（花日茂），TANG Feng（汤 锋），LI Xue-De（李学德），CAO Hai-Qun（操海群）.AGROCHEMICALS，（农药），2008，47（7）：519～520
[3] DING Hui-Ying（丁慧瑛），XIE Wen（谢文），ZHOU Zhao-Qian（周召千），LI BO（李铂），JIANG Qin-Ting（蒋沁婷）.Journal of Instrumental Analysis，（分析测试学报），2009，28（8）：970～974
[4] RezaeeM，Assadi Y，Milani HosseiniM R，Aghaee E，Ahmadi F，Berijani S.J.Chrom atogr.A，2006，1116：1～
论文作者:霍鑫
论文发表刊物:《健康世界》2019年4期
论文发表时间:2019/6/6
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