（1青海省第四人民医院 青海 西宁 810001）
（2西宁市第一人民医院 青海 西宁 810000）
【摘要】目的：探讨Gene-xpert快速检测系统在青南地区（玉树、果洛、黄南）耐多药结核病诊断中的价值。方法：对青海省第四人民医院住院的355例结核病患者（藏族347例、汉族5例、回族3例）的痰、脑脊液、支冲液、胸腹水等标本进行Gene-xpert MRT/RIF系统结核分枝杆菌DNA及利福平耐药性检测。结果：初治患者利福平耐药率4.6%（15/327），复治患者利福平耐药率7.1%（2/28）。结论：Gene-xpert MRT/RIF在青海三南地区耐多药结核病诊断中应用具有较高的临床应用价值，且方法简便、快速。
【关键词】Gene-xpert MRT/RIF；利福平耐药；耐多药结核病
【中图分类号】R51 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）22-0078-02
结核病是由结核分枝杆菌主要经呼吸道传播引起的全身慢性传染病，人群普遍易感。近年来由于初始耐药率增加及人为不规范抗痨治疗，使耐药结核病成为一个严重的全球性公共卫生问题。
随着分子生物学诊断技术的发展，新型的分子检测方法利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术（Gene-xpert MRT/RIF）试验逐步受到国内外广泛关注。本文探讨基因x-pert MRT/RIF系统在在青南地区（玉树、果洛、黄南）耐药结核病诊断及利福平耐药性检测中的价值 。
1.资料与材料
1.1 样本来源
收集2015年1月～2015年12月在我院住院的355例结核病患者（藏族347例、汉族5例、回族3例）的痰、脑脊液、支冲液、胸腹水等标本。患者年龄在11至84岁之间，男198例、女157例。
1.2 仪器与试剂
仪器由美国Cepheid公司生产，全名：全自动医用PCR分析系统，型号：GX-XVIR2。试剂名称：Gene-xpert试剂盒。
2.实验方法
2.1 标本留取
痰：患者清晨漱口后用力可出深部的痰液送检；
脑脊液：患者入院后抗痨治疗前行腰椎穿刺术送检；
支气管灌洗液：对于无痰或者局部有肺不张患者行支气管检查术，灌洗肺泡液送检；
胸腹水：对于存在胸水、腹水患者，入院后行胸腹腔穿刺术送检胸腹水。
2.2 检测
将上述留取标本与含氢氧化钠及异丙醇处理液常规按1:2比例混合，室温静止15分钟，这一操作过程可使样本中的结核分枝杆菌的活性降低106倍，从而使操作的生物危险度降低，再将混合液移至一次性多室样品匣中，置于Gene-Xpert仪器进行全自动检测，约2小时即可读取结果。此外，此反应体系中还包含有1个球芽孢杆菌特异探针作为内对照，以判断DNA扩增效率及检测效率。
3.实验结果
355例标本中，阳性的130例患者，X-pert检测的敏感度为36.7％（130/355），利福平耐药17例。其中玉树患者敏感度为35.9%（56/156）、利福平耐药7例，果洛患者敏感度42.9%（39/91）、利福平耐药6例，黄南患者敏感度32.4%（35/108）、利福平耐药4例。355例患者中初治患者327例、复治28例。初治患者x-pert检测敏感度35.5%（116/327），利福平耐药15例，复治患者敏感度50%（14/28），利福平耐药2例。对于17例利福平检测阳性患者，按照MDR-TB给予耐药方案抗痨治疗（详见下表）。
表 患者检测Gene-xpert MRT/RIF数据汇总
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4.讨论
本组绝大多数是世居青南地区藏族患者，平均海3000米以上，中青年为主。青海每年约有活动性肺结核患者1.5万，有80%患者分布在农牧区，以青南地区为主，由于化学药物的不合理应用及HIV感染等原因，在基因Xpert检测方法应用之前，我院对于考虑耐药结核病患者，先进行经验性抗痨治疗，根据药敏结果制定抗痨方案，但结核杆菌的培养需要很长时间，且要求标本中含有活菌，目前的药敏试验需要2月左右的时间，不能及时治疗结核感染者。
Gene-xpert MRT/RIF系统采用实时荧光PCR技术，以利福平耐药相关rpoB基因，可在2h之内同时检测MRT和RIF耐药，大大缩短了检测时间，使耐多药结核病患者得到及时救治。特别是在一些偏远地区，易于开展，具有明显优势。
为何Gene-xpert MRT/RIF检测为利福平耐药，一般可以判断耐多药结核病呢？根据唐神结等主编的《耐药结核病学》，目前单纯对利福平耐药的结核分枝杆菌非常少见，如果x-pert检测到利福平耐药，因此基因X-pert可以作为MDR-TB的一个预筛措施[1-3]。Gene-xpert法在一个完全封闭的检测盒中自动进行ＤＮＡ提取、扩增和检测，污染机会少，样本处理简单。因此该方法成为基层医院和疾病控制部门经济有效的结核分枝杆菌及其耐药性检测方法。
不足：（1）根据多个国家参比实验室的数据，0.5%～11.6%的耐利福平菌株对异烟肼敏感，有可能导致患者被误诊为MDR-TB而使疗程延长，因此有其局限性，最终结果仍需结核菌药敏结果证实。（2）对儿童结核病、肺外结核病的诊断价值尚无统一结论。（3）在检测利福平耐药时可出现假阳性结果。（4）只能检测到有结核分枝杆菌的DNA，因此对疗效判定的价值有限。（5）该方法成本较为昂贵，很难在中低收入国家推广应用。
【参考文献】
[1]唐神结等.耐药结核病学.北京：人民卫生出版社，2014:103-109.
[2]WHO.Rapid implementation of the Xpert MTE／RIF diagnostic test.WHO／HTM／TB／2011(WHO∕HTM∕TB∕2011;373)
[3]伊惠霞，Xpert MTE／RIF系统快速检测结核分枝杆菌及利福平耐药性研究.新疆医科大学学报，2014.10.
基金项目：青海省科技支撑计划项目：青南地区耐药结核病耐药普水平研究及推广（2014-NS-122）
论文作者:戴景涛1, 卓玛1, 张燕2
论文发表刊物:《医药前沿》2016年8月第22期
论文发表时间:2016/8/4
标签：利福平论文; 患者论文; 结核论文; 结核病论文; 分枝论文; 杆菌论文; 敏感度论文; 《医药前沿》2016年8月第22期论文;