【摘 要】目的：探讨体外干预多重耐药性铜绿假单胞菌时采用扶正透邪方联合抗生素的模式。方法：选择院内保留的铜绿假单胞菌标本进行实验，采用二倍稀释法获得具有多重耐药性的铜绿假单胞菌株。同时对已经产生耐药性的抗生素进行挑选，分别选择头孢他啶、头孢哌酮-舒巴坦钠、亚胺培南-西司他丁钠，将其与含有扶正透邪方药剂的血清和单纯血清进行混合，记录病菌的最低抑菌浓度和最低灭菌浓度。结果：菌株对头孢他啶、亚胺培南-西司他丁钠均具有耐药性，对头孢哌酮-舒巴坦钠具有一般耐药性。将抗生素与扶正透邪方联合使用后可以看出，与亚胺培南-西司他丁钠联合的最低抑菌浓度和最低灭菌浓度均最低。结论：将中药方剂和抗生素联合使用，可有效提升对铜绿假单胞菌的体外抑制和杀灭作用。
【关键词】铜绿假单胞菌；多重耐药性；扶正透邪方；抗生素
铜绿假单胞菌是自然界当中分布数量较广的细菌之一，其对环境的适应能力较强，在人体中通常见于呼吸道和消化道，会引发很多典型的慢性细菌性炎症病变。而随着当前临床上对抗生素应用的进一步扩展，使得该类病菌对于β-内酰胺酶类抗菌剂的耐药性明显提升，甚至出现了多重耐药性的菌株，给治疗工作带来了巨大的影响。根据现代中药药理学研究显示，很多中药有效成分对铜绿假单胞菌有抑制作用，而且由于其能够对病菌的多个代谢过程产生作用，因此不易出现耐药性问题。本文即是研究铜绿假单胞菌体体外抑菌干预中应用中药方剂联合抗生素的效果，如下为具体研究方法和内容：
1、资料及方法
1.1一般资料
选择医院内保留的铜绿假单胞菌样本进行实验，其均为感染患者菌株微生物培养后样本，其中包括血液、痰液样本，采用多种抗生素接种方式筛选出一种具有多重耐药性的菌株，标记后作为研究对象开展实验。
1.2方法
1.2.1药物制备方法
抗生素药剂主要包括头孢他啶、头孢哌酮-舒巴坦钠、亚胺培南-西司他丁钠3种，扶正透邪方采用水煎汤剂，浓度为2g/ml，所有药物均利用无菌生理盐水溶液（浓度为0.9%）制备。
1.2.2检验菌液的制备方法
将菌株接种在含有牛血清的琼脂培养皿上，放置在温度为37℃的恒温培养箱内继续培养，约培养24h后取出，此时挑取菌株进行电镜下观察，保证菌株均处于对数生长期后进行标记；如仍有未处于该时期的菌株则继续培养。提取菌株放入含有无菌蒸馏水的试管当中，并加入头孢他啶、头孢哌酮-舒巴坦钠、亚胺培南-西司他丁钠，混合后将其接种在新的培养基上。再以相同的环境对菌株进行培养，从中筛选出具有多重耐药性的铜绿假单胞菌株，标记后单独存放[2]。
1.2.3抗生素联合干预方法
将抗生素溶液的浓度调整到1024μg/ml，并采用二倍稀释法共制备7个不同浓度的剂量。分别在24孔培养板中加入肉汤培养基1ml，选择空白对比组、三个单纯抗生素组、三个抗生素联合扶正透邪方汤剂组，分别将相应的药剂滴入培养板的孔洞内，空白组滴入无菌蒸馏水。在滴入药物后，将24孔培养板放入匀速振荡器内进行孵化，震荡速率为每分钟30次，将药剂与菌液进行充分的混合，约孵化30min后取出。将混匀的24孔培养板放置在恒温培养箱内孵化，稳定设定为37℃，孵化时间为1d；孵化完成后将菌液接种在M-H琼脂培养皿上，再以相同的温度孵化1d[3]。
2、结果
2.1铜绿假单胞菌耐药性
分别使用头孢他啶、头孢哌酮-舒巴坦钠、亚胺培南-西司他丁钠检验铜绿假单胞菌的耐药性，整理具体数据，并制成如下表格：
表一 铜绿假单胞菌耐药性对比表
从上表中可以看出，空白组联合抗生素对铜绿假单胞菌的体外抑制情况较差，与单纯使用抗生素治疗时的耐药性基本一致。但方剂组联合抗生素治疗时均未发生耐药性的情况，且利用方剂组联合亚胺培南-西司他丁钠的方式最低抑菌浓度和最低灭菌浓度均最低，其中最低抑菌浓度达到16μg/ml。
3、讨论
铜绿假单胞菌是自然界当中分布数量较广的病菌之一，其自身具有较强的适应性，而且随着抗生素临床应用的增加，使得其多重抗药性的病例逐渐增多。目前医学界对铜绿假单胞菌的耐药性形成机制还未统一解释，以为其是由多种机制协同发挥作用后导致的，例如基因变异、生物被膜保护、纯化酶、DNA修复等均可产生多重耐药性[4]。
因此，当前临床治疗铜绿假单胞菌时均严格控制药物的使用频率和剂量，这样虽然可避免耐药性的产生，但却大大影响了治疗效果。根据我国中药现代研究显示，很多中药材对于铜绿假单胞菌均由明显的抑制作用，其中如白芍药、当归、防风、五倍子等均能够发挥广谱抗生素的作用。其中五倍子的有效物质可以有效地对铜绿假单胞菌发挥作用，可抑制其细胞内葡萄糖基转移酶的活性，从而降低了细胞内葡萄糖的合成量，防止铜绿假单胞菌形成生物被膜。而白芍药、当归等则可以逐渐恢复铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素的敏感性，使其耐药性降低。以这些药物配伍制备的扶正透邪方可以起到调理人体阴阳失衡、清热散瘀、化痰通络的作用[5]。根据临床研究显示，利用中药方剂联合抗生素治疗，不仅可以降低抗生素本身的使用量，降低最低抑菌浓度，而且还可以对因病菌引发的慢性炎症进行治疗，增强患者的免疫能力，降低不良反应的发生几率。
从本次研究结果当中可以看出，所挑选的单株多重耐药性铜绿假单胞菌对于头孢他啶、头孢哌酮-舒巴坦钠、亚胺培南-西司他丁钠均具有不同程度的耐药性，而将其与扶正透邪方联合使用后，病菌对抗生素的敏感性均提升，除头孢他啶以外，其余两种抗生素均具有不同的最低灭菌浓度，其中以亚胺培南-西司他丁钠联合扶正透邪方的最低抑菌浓度和最低灭菌浓度最低。
参考文献：
[1]孔令博，刘清泉，吴珺，等.扶正透邪方体外干预多重耐药铜绿假单胞菌研究[J] 环球中医药，2012，05（02）：81-84.
[2]王铮，王昱.伏邪理论在老年患者多重耐药铜绿假单胞菌肺炎治疗中的意义[J].中国中医急症，2016，25（11）：2075-2077.
[3]孔令博，刘清泉，杨琦，等.芪归银方对抗生素体外抑制多重耐药铜绿假单胞菌作用的影响[J].世界中医药，2014（03）：288-290.
[4]孔令博，郭玉红，付跃峰，等.芪归银方对多重耐药铜绿假单胞菌感染大鼠血清IL-1β水平的影响[J].世界中医药，2016，11（10）：1966-1969.
[5]赵峰，杨静超.基于伏邪理论的清透法对铜绿假单胞菌耐药性的实验研究[J].医药卫生：文摘版，2016（04）：162.
论文作者:黄量
论文发表刊物:《航空军医》2017年第3期
论文发表时间:2017/4/11
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