彭娟敏[1]2017年在《静压力对牙周膜成纤维细胞p38 MAPK活性及炎性因子的影响》文中研究表明目的:通过构建体外人牙周膜成纤维细胞(Human periodontal ligament fibroblasts)静压力加载模型,探索静压力对p38MAPK磷酸蛋白和IL-17 A、IL-17R和IL-6表达的影响,并观察p38 MAPK特异性抑制剂SB203580预处理后,静压力对炎性因子表达的变化,为正畸力下牙周膜成纤维细胞生物力学的信号转导以及与炎症因子的关系提供新思路和实验基础。方法:1、收集健康前磨牙的根中1/3牙周膜,利用组织块培养法行原代培养。采用细胞免疫荧光对培养的细胞进行来源鉴定。采用CCK8法检测0-5g/cm2静压力和不同浓度的抑制剂SB203580刺激HPDLF后增殖活性的变化,从而构建体外HPDLF的静压力加载模型。2、采用Western blot(WB)法检测0-5g/cm2静压力对HPDLF内p38磷酸蛋白表达情况。3、ELISA和RT-PCR检测静压力对白介素17受体(IL-17R)、白介素17(IL-17A)、和白介素6(IL-6)蛋白和mRNA表达变化。经p38MAPK抑制剂SB203580预处理HPDLF后,检测IL-17A、IL-17R和IL-6的mRNA和蛋白表达。实验结果:1、经组织块原代培养5天后可以得到长条形的成纤维细胞。传至第四代的成纤维细胞以漩涡方式生长,此时生长状态良好。细胞免疫荧光鉴定结果显示细胞来源于中胚层,结合取材部位可鉴定为HPDLF。体外1-4 g/cm2的静压力值可以促进HPDLF生长,在2 g/cm2组细胞增殖能力最强,3-4 g/cm2组时细胞增殖变缓,并有少量下降。5g/cm2的力值作用下细胞受到明显抑制作用。体外低于8μmol/L浓度的SB2023580对细胞增殖有一定促进作用,其中在2μmol/L时增殖能力最强。而当浓度增大至16μmol/L后,细胞增殖则受到抑制。2、经WB检测发现,在0-1g/cm2组,HPDLF内p38磷酸蛋白表达无明显变化。当力值增加至2-5g/cm2时,HPDLF内p38磷酸蛋白表达增加,且随加力时间呈动态变化,其中10min时表达开始增加,刺激30min时磷酸蛋白表达量最高,至60min后磷酸蛋白表达下降。3、RT-PCR和ELISA结果发现,静压力刺激HPDLF能上调IL-6和IL-17R的mRNA及IL-6、IL-17R和IL-17A蛋白的表达。当抑制剂SB203580预处理HPDLF后,4g/cm2静压力刺激下IL-6的mRNA和蛋白表达受到抑制作用。SB203580对HPDLF表达IL-17A和IL-17R无明显抑制作用。结论:1、组织块原代细胞培养法能成功构建人牙周膜成纤维细胞系,传至第四代的细胞增殖活性增强,且生物学性状稳定。2、适宜的静压力和浓度的SB203580能促进HPDLF增殖,而过大的静压力和浓度的SB203580会抑制细胞的增殖,其中2g/cm2为HPDLF最适静压力,2μmol/L为最适浓度。3、p38 MAPK是静压力在HPDLF内转导信号分子,当静压力力值达到2g/cm2能激活HPDLF内p38 MAPK信号通路,静压力对HPDLF内p38MAPK活性呈动态变化。4、静压力能促进HPDLF对IL-17A、IL-17R和IL-6因子的表达。p38MAPK可能是静压力诱导HPDLF分泌IL-6的一条信号通路。但静压力对体外HPDLF调控IL-17可能并不是通过p38MAPK信号转导完成。
张惠[2]2001年在《压力对牙周膜成纤维细胞功能影响的研究》文中研究表明义齿修复后，由于设计或制作不当而常常造成基牙松动甚至脱落。基牙松动与基牙受压力过大引起牙周组织损伤有密切关系，但是，压力是怎样使牙周组织致伤的，其机理不详。 本实验通过建立HPLF细胞力学模型，即在体外环境下原代培养HPLF和用可控压力加载装置对HPLF施加间断性压力（50kPa，100kPa），研究了牙周膜成纤维细胞功能与压力的关系，获得以下主要结果： 1．应用MTT法测定压力培养环境下HPLF的MTT反应OD值，见实验组OD值显着小于对照组，压力值越大，OD值越小，证明间断性压力可显着抑制HPLF的增殖。 2．通过流式细胞仪测定HPLF的各期细胞数，发现实验组G1期细胞较对照组减少，G2期细胞较对照组增多，探明压力对HPLF细胞分裂活动有抑制作用。 3．用酶联免疫吸附法（ELISA），测定细胞培养液中白细胞介素-1β（IL-1β）的含量，观察到实验组IL-1β含量较对照组升高，明确了过大压力可使HPLF产生炎症性细胞因子而造成对牙周组织的损伤。 4．应用RT-PCR和斑点杂交技术，检测HPLF细胞内COX-2 mRNA变化，发现实验组牙周膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达水平明显高于对照组，从分子水平揭示压力使人牙周膜成纤维细胞产生大量的前列腺素PGE2而导致牙周组织骨吸收的机理。
黎敏[3]2015年在《IL-17对牙周膜成纤维细胞RANKL和OPG表达及对破骨样细胞形成的影响》文中研究指明目的:牙根吸收是正畸治疗过程中常见的并发症,而IL-17可能通过牙周膜参与介导破骨细胞的分化和活化从而引发牙根吸收。本实验拟探讨IL-17对HPDLF生物学行为的影响,检测不同浓度不同时间IL-17作用下,HPDLF中RANKL和OPG表达的影响,以及共培养体系下,观察破骨样细胞的形态与功能,探讨IL-17在正畸牙根吸收中可能的作用及其作用机制。方法:1.采用组织块培养法培养牙周膜组织,倒置显微镜观察细胞生长状态,采用免疫细胞化学(Immunocytochemistry,ICC)SP法对培养的细胞进行来源鉴定,建立HPDLF细胞系,并采用噻唑兰比色法(MTT)绘制HPDLF生长曲线;2.取第3-6代生长良好的HPDLF,接种于96孔板,分别加入己经配制的含IL-17浓度为0、5、10、20、40、60、80ng/ml的DMEM培养基作用24h,MTT法检测IL-17对HPDLF增殖活性的影响;3.以浓度为0、5、10、20、40ng/ml的IL-17分别作用于HPDLF24h,以及20ng/ml的IL-17作用于HPDLF0、12、24、48、72h,采用RT-PCR和ELISA法检测成纤维细胞RANKL、OPGmRNA和蛋白的表达水平;4.以Ong/ml、20ng/ml的IL-17作用于成纤维细胞后,和外周血单核细胞共培养14d,TRAP染色观察和计数破骨样细胞的形态、数目。结果:1.所培养细胞为长梭形,呈放射状或漩涡状生长,生长状态稳定,经细胞来源鉴定为中胚层来源细胞,结合取材部位可鉴定为HPDLF。HPDLF生长曲线呈“S”形,从接种第2天开始,细胞进入对数生长期,第6天细胞增殖速度变缓进入平台期;2.MTT结果显示:IL-17作用HPDLF24h后,除在80ng/ml组的OD值小于对照组外,其余各组的OD值均大于对照组(P<0.05),其中,以40ng/ml组的OD值最大(P<0.05);3.经RT-PCR及ELISA检测,与对照组相比,IL-17作用于HPDLF后,可上调RANKLmRNA和蛋白的表达,下调OPGmRNA和蛋白的表达,其中,以20ng/ml组和48h组的表达变化量最明显,组间差别有统计学意义(P<0.05);4.在共培养体系下,单核细胞能生成TRAP阳性多核细胞,IL-17(+)组与IL-17(-)组的TRAP阳性多核细胞数目相比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:1.采用组织块培养法,成功地建立了人牙周膜成纤维细胞模型,生物学性状稳定;适宜浓度的IL-17对HPDLF增殖活性有促进作用,但浓度过大时能抑制HPDLF增殖。2.IL-17能促进HPDLF对RANKL的表达和下调OPG的表达。3.在与人牙周膜成纤维细胞直接共培养的前提下,人外周血单个核细胞可分化为TRAP阳性的破骨样细胞。4.IL-17有促进破骨样细胞生成的作用,其作用机制可能是通过人牙周膜成纤维细胞间接作用于人外周血单个核细胞。
任大鹏[4]2016年在《ERK1/2-Runx2信号通路介导周期性张应力作用下牙周膜成纤维细胞成骨分化的机制研究》文中认为背景和目的正畸治疗过程中,牙齿在正畸力的作用下发生移动,其生物学基础在于牙周组织在应力刺激下发生改建。正畸力经牙齿传递到牙周组织,牙周膜在这一过程中发挥了桥梁作用。牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts, PDLFs)是牙周膜的主要构成细胞,在应力刺激下能合成细胞因子并通过胞内信号传递系统影响细胞行为(增殖,分化,凋亡等),从而介导牙周组织的改建,修复和再生。研究应力刺激在PDLF胞内的信号转导以及对PDLF行为的影响,对于阐明正畸力作用下牙周组织改建的分子机理,发现有利于促使牙齿移动的力学环境都具有重要意义。成骨细胞是促进骨基质分泌和矿化的主要细胞。核心结合因子a1 (core binding factor al, Cbfal),又称Runt相关转录因子2(]runt related transcription factor 2, Runx2),是学者们公认的最重要的成骨细胞特异性转录因子之一。Runx2蛋白能特异性结合许多成骨基因启动子上的顺式作用元件,并促进成骨靶基因的转录表达。虽然Runx2基因和蛋白的表达水平在矿化组织和成骨细胞系中远远高于一些非骨组织来源的细胞,但是目前越来越多的研究表明其基因和蛋白水平与成骨细胞的功能和分化并不是直接线性相关,而Runx2蛋白的活化状态也是其发挥功能的重要影响因素。目前,学者们一致认为Runx2是联系胞外成骨诱导因素和胞内影响成骨细胞功能分化的信号通路的枢纽。细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal regulated kinase 1/2, ERK1/2)是最先被发现并且最具有代表性的有丝分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedprotein kinase,MAPK)家族的成员。经胞外刺激因素活化后的ERK1/2可以进一步影响其下游转录因子的表达和活化。有研究表明Runx2是 ERK1/2众多下游靶基因中的一员,但是ERK1/2-Runx2通路是否可以在应力刺激下的PDLF中被激活还未知；如果其确实参与了应力刺激下PDLF的成骨分化,其具体的分子机理也有待深入研究。本研究首先通过携带Runx2基因的慢病毒载体转染原代培养的PDLF,探究Runx2对PDLF成骨分化的作用,然后构建了PDLF体外培养一应力刺激模型,观察Runx2和其他相关成骨基因在应力刺激下的表达变化,以及ERK1/2通路在应力刺激下的激活情况；最后通过比较对正常PDLF 和P Runx2过表达PDLF实施应力刺激,以及特异性阻断ERK1/2通路对应力刺激PDLF成骨分化的影响,研究ERK1/2 和 Runx2在介导应力刺激促进PDLF成骨分化过程中发挥的作用,对应力刺激,ERK1/2, Runx2,以及PDLF的成骨基因表达这几个因素之间的关系进行阐述,以明确ERK1/2-Runx2通路介导应力刺激调控PDLF成骨分化的分子机理,为临床正畸矫治提供新的分子生物学基础。主要实验方法及结果1牙周膜成纤维细胞的分离培养及鉴定采用组织块联合酶消化法对牙周膜成纤维细胞进行分离培养,并绘制细胞生长曲线。免疫细胞化学染色结果显示角蛋白染色为阴性,波形丝蛋白染色为阳性,HE染色胞浆伊红,胞核嗜碱性。成纤维细胞特异性表面蛋白1(FSP1)免疫荧光染色阳性。2稳定过表达Runx2基因的PDLF的构建及Runx2对PDLF的成骨诱导作用利用Ⅱ型Runx2基因以及LV5慢病毒载体构建LV5-Runx2慢病毒载体。有限稀释法测定病毒液滴度为6x105TU/ml。通过靶细胞侵染预实验对MOI值以及Puromycin筛选浓度进行摸索,最终获取稳定过表达Ⅱ型Runx2的牙周膜成纤维细胞。荧光定量PCR以及Western Blot证实稳定转染LV5-Runx2的牙周膜成纤维细胞中Runx2的nRNA和蛋白水平都升高显着。荧光定量PCR结果显示Ⅱ型Runx2过表达可以有效促进PDLF中成骨转录因子SP7,骨钙素(OCN)和骨涎蛋白(BSP)的转录表达,但对1型胶原(COL-1)和碱性磷酸酶(ALP)的表达无影响,并且轻微抑制转录激活因子4(ATF4)的表达。茜素红染色实验证实Ⅱ型Runx2过表达的PDL F体外培养3周后可以观察到钙结节。3周期性张应力刺激体外培养的牙周膜成纤维细胞模型构建使用多通道细胞体外牵张应力加载系统,对体外培养的牙周膜成纤维细胞施加振幅10%,频率0.5HZ的周期性牵张力,加力作用时间为1h,3h,6h,12h,18h,24h,以不加力组作为对照组,采用荧光定量PCR测定并绘制成骨基因Runx2, SP7, OCN, BSP和ATF4的mRNA随加力时间延长而变化的表达曲线；利用Western Blot和免疫沉淀法测定Runx2蛋白水平在不同加力时间点的表达,以及Runx2 和 ERK1/2在不同加力时间的激活情况。结果证实了周期性张应力可以促使牙周膜成纤维细胞中上述成骨基因的表达,并且在这一过程中同时伴随Runx2和ERK1/2通路的磷酸化。4ERK1/2-Runx2通路介导了周期性张应力刺激下牙周膜成纤维细胞的成骨分化对正常PDLF和过表达Runx2的PDLF分别进行应力刺激3h,荧光定量PCR结果显示周期性张应力刺激以及Lunx2过表达对牙周膜成纤维细胞中成骨基因SP7, OCN和BSP的mRNA表达有协同促进作用,即对Runx2过表达的PDLF同时施加应力刺激比不加力的Runx2过表达PDLF或者加力的正常PDLF对上述成骨基因的转录刺激作用更强。对加力组PDLF同时应用ERK1/2通路的特异性抑制剂U0126后,上述成骨基因的转录表达水平较单纯加力组有所下降。通过对正常PDLF和过表达Runx2的PDLF中Runx2的mRNA和蛋白水平的测定,发现应力刺激都可以诱导Runx2基因的转录和翻译,但ERK1/2通路被抑制后,Runx2的mRNA水平显着下降,而蛋白水平无明显变化,说明应力刺激对Runx2的转录表达可以通过ERK1/2介导,但ERK1/2对Runx2蛋白的翻译过程影响不大。通过测定Runx2的蛋白磷酸化水平(p-Runx2),发现p-Runx2的表达趋势与上述成骨基因的表达趋势高度一致,从而推测ERK1/2-Runx2通路介导应力刺激对牙周膜成纤维细胞的成骨分化的机制在于提高Runx2蛋白表达水平的同时对其进行磷酸化修饰以提高Runx2蛋白的转录激活功能。进一步研究发现ERK1/2蛋白主要存在于胞浆中,而Runx2蛋白则存在于胞核中；应力刺激激活ERK1/2后促使p-ERK1/2进入胞核并与Runx2形成蛋白复合体,推测这为p-ERK1/2对Runx2的磷酸化修饰提供了条件；U0126抑制了应力刺激下ERK1/2的活化,从而阻止p-ERK1/2进入细胞核并激活Runx2。结论1. Runx2对牙周膜成纤维细胞的成骨分化具有促进作用,可提高下游成骨靶基因SP7, OCN和BSP的转录水平的表达。2.周期性张应力刺激可以促进牙周膜成纤维细胞成骨基因SP7, OC N和BSP的转录表达；Runx2基因的mRNA和蛋白表达水平也同时升高,并伴随Runx2蛋白和ERK1/2通路的磷酸化。3. ERK1/2-Runx2通路介导周期性张应力刺激促进牙周膜成纤维细胞成骨分化的机制在于提高胞内Runx2蛋白的磷酸化水平(p-Runx2),从而促进Runx2下游成骨基因的转录表达；Runx2总蛋白水平与下游成骨基因转录表达无相关性。应力刺激激活ERK1/2进入细胞核中与Runx2形成蛋白复合体,猜测这为p-ERK1/2对Runx2的磷酸化提供了条件；阻断ERK1/2通路影响了应力刺激对ERK1/2的激活以及入核,从而影响了Runx2蛋白的磷酸化修饰和成骨基因的转录表达。创新和意义本课题从细胞分子水平证实了ERK1/2-Runx2通路参与了周期性张应力刺激下牙周膜成纤维细胞的成骨分化,并进一步探讨了其具体的机制,认为Runx2的磷酸化水平的而非总蛋白水平在调控下游成骨靶基因转录表达方面起到至关重要的作用；而应力刺激下活化的ERK1/2则在转录水平提高Runx2的表达并同时进入细胞核与RLunx2蛋白结合以促使Runx2蛋白的磷酸化。以上观点为临床正畸治疗过程中牙周组织的骨改建提供新的分子靶点和思路。
张晓东[5]2005年在《牵张应力对牙周膜成纤维细胞及细胞外基质代谢影响的研究》文中认为正畸治疗的基本过程是在矫治力的作用下,通过牙周组织细胞对机械应力的反应,伴随着牙周组织的有序改建,从而达到牙齿移动、矫治错殆畸形的目的。因此,机械应力是启动牙周膜成纤维细胞(Periodontal ligament fibroblast, PDLF)生理反应,导致正畸牙齿移动的前提和关键。在机械应力的作用下牙周组织的更新改建非常活跃,主要表现为牙周膜细胞外基质(Extracellularmatrix, ECM)的降解与合成。由于PDLF和ECM构成了牙周膜组织的主要成分,而PDLF是牙周膜中最重要的功能细胞,也是机械应力的直接效应细胞,所以应力状态下PDLF的增殖和功能活动以及对ECM新陈代谢的调节在维持生理环境下牙周组织的健康和正畸治疗中牙周组织的改建都有重要的影响。研究证明基质金属蛋白酶/金属蛋白酶组织抑制因子 (Matrixmetalloproteinases/Tissue inhibitor of metalloproteinases,MMPs/TIMPs)系统对ECM的代谢进行直接的调控。而MMP-1是与牙周膜ECM降解十分密切的蛋白水解酶,其主要作用底物为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)等,在牙周组织ECM代谢过程中发挥着关键性的调节作用。但目前对于牙周膜细胞在受到机械牵张应力作用后其生物学变化特性及其对ECM代谢调节机制并不清楚。 通过体外细胞培养技术、应用细胞力学加载装置进行对离体细胞的应力加载,成为细胞力学重要的研究手段。本研究自行研
党平, 施生根, 宋应亮[6]2003年在《机械压力对牙周膜成纤维细胞P38蛋白激酶激活及转位的影响》文中指出目的:研究P38蛋白激酶是否参与机械压力在牙周膜成纤维细胞的信号转导过程,初步探讨咬合创伤对牙周组织损伤机制。方法:本实验通过免疫组化法观察机械压力刺激后,牙周膜细胞内磷酸化P38蛋白激酶不同时间定位、强度的变化。结果:当压力大于200Kpa时,细胞内P38蛋白激酶磷酸化程度增强,且在30分钟时染色颗粒由胞浆转移至胞核,约60分钟后染色降至刺激前水平。结论:初步证明机械力信号可通过细胞跨膜转导,并激活胞浆内P38蛋白激酶转移至胞核。
陈曦[7]2009年在《人牙周膜成纤维细胞体外叁维立体培养的初步研究》文中研究说明[目的]对人牙周膜成纤维细胞进行体外藻酸盐支架叁维立体培养,并用碱性成纤维细胞生长因子及脂多糖进行干预观察细胞的增殖情况,为进一步了解诱导牙周组织修复的机制提供科学的依据。[方法]组织块培养法获取人牙周膜成纤维细胞,按1:2或1:3的比例进行传代,取4—7代的细胞进行实验。将第4代的细胞进行藻酸盐叁维支架培养,比较细胞在二维及叁维空间下的增殖情况。在藻酸盐支架叁维细胞培养第9天时,分别以1ng/ml、10ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml浓度组碱性成纤维细胞生长因子,作用于叁维生长状态下的人牙周膜成纤维细胞,用MTT法测定OD值,观察碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞的增殖的影响,并对实验数据进行统计学分析。在细胞培养第7天时,分别以10 ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml、1000ng/ml浓度组脂多糖,作用于叁维生长状态下的人牙周膜成纤维细胞,用MTT法观察脂多糖对人牙周膜成纤维细胞的增殖的影响,并对实验数据进行统计学分析。[结果]在本实验条件下第4代细胞在叁维培养下与二维培养下比较细胞增殖情况未见明显差异。与对照组比较,1ng/ml、10ng/ml、500ng/ml、1000ng/ml浓度的碱性成纤维细胞生长因子作用于叁维培养状态下的人牙周膜成纤维细胞,在10ng/ml浓度时(P＜0.05)促增殖作用最明显。与对照组比较,10ng/ml、100 ng/ml、500 ng/ml、1000ng/ml浓度的脂多糖作用于叁维培养状态下的人牙周膜成纤维细胞,在100ng/ml浓度时(P＜0.05)抑制作用最明显。[结论]在本实验条件下,在叁维二维空间培养中的HPDLFs增殖未见明显差异。10ng/ml浓度的碱性成纤维细胞生长因子能促进HPDLFs的增殖,100ng/ml浓度的脂多糖能抑制HPDLFs的增殖。
侯睿[8]2005年在《体外不同动态力学应变对人牙周膜成纤维细胞整合素α_5、α_6、β_1表达和细胞增殖、功能活性的影响的初步研究》文中研究说明在生理状况下的咀嚼运动或是咬合创伤期、正畸治疗或是各种修复体行使功能时,不同的机械力作用于牙体并传递到牙周组织,引起包括牙周膜和牙槽骨在内的牙周组织的改建。牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblast,PDLF)作为牙周膜中的主要感受性细胞和效应性细胞,对牙周组织的改建起着关键的调控作用,其增殖活性和功能状态的改变也直接反映了牙周组织改建的状态。因此,深入研究PDLF在机械应力作用下的生物应答及应答机制是十分必要的。 目的: 本课题旨在通过四点弯曲细胞力学加载装置对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast,HPDLF)进行加载,比较全面地探讨了HPDLF在不同作用方式、不同大小和不同作用时间的动态力学微应变范围内细胞增殖、功能活性及细胞膜表面整合素α5、α6、β1表达的变化。研究动态力学应变作用下HPDLF的生物学行为的改变,并初步探讨机械应力与整合素介导的信号转导的关系。
曹海萌[9]2012年在《P38MAPK信号通路在周期性张应力介导的牙周膜成纤维细胞增殖中的作用》文中进行了进一步梳理目的：牙周病是口腔中两大主要疾病类型之一,也是人类最古老最普遍的疾病之一,在当今世界范围内患病率依然很高,在我国牙周病的患病率及其危害远高于龋病。一般认为,因牙周炎拔牙占拔牙总数的30%-44%。对于牙周病的病因学研究是个古老而复杂的领域,近一个多世纪以来,世界各国的学者对此进行了大量而深入的研究,牙周炎发生的根本机制至今仍未完全明确。有研究证实咬合创伤参与了牙周炎的发生与发展,并且对牙周组织的改建产生了直接的影响。适当的咬合力可以使牙周膜中主要的感受性和效应性细胞——牙周膜成纤维细胞发生增殖、分化和凋亡,从而参与牙周组织的改建过程。本次实验拟在成功构建人牙周膜成纤维细胞体外培养—力学刺激模型的基础上,通过细胞计数试剂——8和RT-PCR等细胞检测技术,从分子和基因水平探讨周期性张应力对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响,初步阐述p38MAPK信号通路在此影响过程中的作用,明确p38MAPK信号通路、周期性张应力和成纤维细胞增殖叁者之间的关系,为进一步诠释咬合创伤在牙周炎发病过程中的作用提供新的思路,为探寻咬合创伤的干预治疗提供理论依据。方法：本实验以体外培养的人牙周膜成纤维细胞为研究对象,构建人牙周膜成纤维细胞体外培养—力学刺激模型,利用多通道细胞牵张应力加载系统,以静态组为对照,实验组分别加以1h,6h,12h,24h的张应力刺激,频率为0.1Hz,所加力值以加力板底部硅胶薄膜拉伸的形变率表示,形变率越大,则对细胞施加的张应力越大,本次实验的细胞形变率为10%。以细胞计数试剂—8检测细胞的增殖情况,采用RT-PCR技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达；同时设计加力+p38MAPK特异性抑制剂组(Oh,12h),加力前对细胞加以p38MAPK抑制剂SB203580,再对细胞施以张应力后,再次检测细胞增殖情况和PCNA的表达。通过SPSS17.0统计软件对实验所得数据进行统计分析。结果：1.体外培养稳定的人牙周膜成纤维细胞,成功地构建了人牙周膜成纤维细胞体外培养—力学刺激模型。2.在频率为0.1Hz,形变率为10%的条件下,同对照组比较,加力1h时细胞增殖减少,6h时细胞增殖开始上升,12h细胞增值达到高峰,24h细胞增殖受到抑制；加入抑制剂SB203580能够抑制细胞增殖和PCNA的表达。结论：1.成功的构建了人牙周膜成纤维细胞体外培养—力学刺激模型。2.在应力加载条件下,在一定时间内可促进成纤维细胞的增殖,加力时间过长会导致细胞增殖受到抑制。3. p38MAP信号通路参与了周期性张应力介导的人牙周膜成纤维细胞增殖的过程。4.除p38MAPK信号通路外,亦有其他信号通路参与了周期性张应力介导的成纤维细胞增殖的过程,可能与p38MAPK通路之间存在交叉作用。
廖文琴[10]2006年在《静压力对人牙周膜成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原表达的影响的体外实验研究》文中研究指明目的：观察体外培养的人牙周膜成纤维细胞在加载不同大小的持续性静压力后，该细胞增殖，及Ⅰ型胶原表达的变化。探讨静压力与人牙周膜成纤维细胞代谢之间的相关性，进一步了解在正畸牙移动牙周组织改建中人牙周膜细胞的应力-生物学效应。 材料和方法：取材自临床上10～14岁青少年需要拔除的健康的正畸牙，在体外分离、培养并纯化人牙周膜成纤维细胞，建立人牙周膜成纤维细胞有限细胞系。用静压力加载装置对第4代人牙周膜成纤维细胞分别施加OKP、15KP、30KP、45KP的持续性静压力，加力时间为1小时。加力后立即收集样本，用流式细胞术分析各组细胞的DNA含量和细胞周期，并计算细胞的增殖指数；用免疫细胞化学染色技术检测细胞内Ⅰ型胶原蛋白的表达情况，并用彩色病理图像分析仪分析各实验组细胞的阳性表达强度。 结果：①．OKP、15KP、30KP、45KP的持续性静压力，加力1小时后，体外培养的人牙周膜成纤维细胞增殖活性的变化为：0～15～30KP，增殖指数以及S期细胞DNA百分比都显着增高(P＜0.05)；45KP压力下，增殖指数及S期细胞DNA百分比明显降低。②．OKP、15KP、30KP、45KP的持续性静压力，加力1小时后，体外培养的人牙周膜成纤维细胞细胞内Ⅰ型胶原蛋白表达的变化为：0～15KP压力下，Ⅰ型胶原蛋白表达明显增多(P＜0.05)；30KP压力下Ⅰ型胶原蛋白表达有所减少但仍高于对照组；45KP压力下Ⅰ型胶原蛋白表达明显减少(P＜0.05)。 结论：①．适当大小的静压力能促进人牙周膜成纤维细胞的增殖及Ⅰ型胶原蛋白的表达(本实验中为15KP)；过分的静压力会抑制人牙周膜成纤维细胞的增殖及Ⅰ型胶原蛋白表达(本实验中为45KP)。②．人牙周膜成纤维细胞的增殖及Ⅰ型胶原蛋白的表达与静压力的大小可能存在一定规律。
参考文献：
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