（1江苏省如皋市人民医院门诊药房 江苏 如皋 226500）（2江苏省第二中医院药学部 江苏 南京 210000）
【摘要】目的：探讨中药中赭曲霉毒素A(OTA)的有效检测方法。方法：对部分中药饮片进行抽样、甲醇提取，再经免疫亲和柱滤过后应用高效液相一荧光检测法进行测定并统计分析检测结果。结果：按拟定检测方法测定后表明，OTA标准样本及供试样本的质量浓度（0.5～20ng/ml）与色谱峰面积线性关系良好，且r大于0.9999；加样回收率为65%～108%，该方法的检出限为0.235ug/kg，定量限为2ug/kg。结论：应用该检测方法测定中药材中赭曲霉毒素A含量，具有操作相对简单、结果准确可靠等优点，可推广使用。
【关键词】中药；赭曲霉毒素A；检测
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2017）15-0353-01
在临床工作中，中药的疗效独特，副作用相对较小，目前已经受到了世界各国的高度重视与认可。由于中药材在种植、采收及储存当中都有可能受到赭曲霉菌及其它真菌的污染而产生毒素，对药材质量及临床用药的安全性造成了极大影响[1]。随着中药的应用越来越广泛，中药中OTA的实际含量问题的受关注程度也在不断的加大。因而建立快速而有效的OTA检测方法，对保障药材质量及用药安全性有着积极促进作用[2]。本研究将重点探讨中药材中OTA的有效检测方法；报告如下。
1.仪器与试药
1.1 仪器
高速均质器(德国IKA)；OTA免疫亲和柱(USA- VICAM)；USA-Agilent 1100高效液相色谱仪及荧光检测器，OTA标准样本(Sigma公司提供，批号：126K4026)，超声振动仪、天平秤、纯净水、80%甲醇、磷酸盐缓冲液。
1.2 试药
试验样本为产自江西、湖南、宁夏、内蒙等4个不同地区的麦芽、白术、甘草及黄芪等4种原药材100g，采用微尘粉碎机分别打成末状包装备用。
2.方法
2.1 色谱条件及溶液配制
（1）色谱条件：SB—C18色谱柱；柱温30摄氏度；样品温度1O 摄氏度；流动相：乙酸一水一乙腈(1.0：49:5：49.5)；流速:2ml／分；荧光检测器：激发波长 333am，发射波长470am。
（2）溶液配制：采用乙腈溶解OTA标准样本浓度为100ug/ml溶液10ml备用。然后取试验药材样本粉末5g+氯化钠2g置入100ml刻度容器中，倒入80%甲醇溶液，超声振动15min，采用滤过纸进行过滤后取滤过液10ml，倒入25ml刻度容器中，以5%吐温溶液稀释至25ml，再次滤过后取滤过液10ml，以2ml/min流速过免疫亲后柱，用缓冲液15ml洗柱后，取80%甲醇溶液1ml以流速0.5ml/min洗脱免疫亲和柱，收集洗脱液并以甲醇容定至1ml，该溶液即为供试样本溶液；以同样的方法分别取得其它三种药材供试样本溶液。
（3）测定方法：分别吸取OTA标准样本及供试样本溶液20ul并注入高效液相色谱仪，监测其峰面积，以外标法计算供试样本中OTA含量；公式为：X(ng/g)=(Ai*Cs*V)/(As*m)；然后根据线性回归分析，得出回归方程进而计算出色谱峰面积良性度。而后采用OTA标准样本溶液再次连续检测5次，并计算其峰面积，如连续5次均测得RSD=0.7%,则表明仪器准确度良好。之后行重复性检测：取供试样本溶液5份计100ul，依上述方法进行再次测定，如RSD=3.7%，表示方法重复性良好；最后行加样回收检测以测定此次检测方法的可靠性与可行性。
3.结果
按拟定检测方法测定后表明，OTA标准样本及供试样本的质量浓度（0.5～20ng/ml）与色谱峰面积线性关系良好，且r大于0.9999；加样回收率为65%-108%，该方法的最低检出限为0.235ug/kg，定量限为2ug/kg。麦芽、白术、甘草及黄芪等4种原药材色谱峰面积及检出OTA含量如表1所示。
4.讨论
赭曲霉毒素是碳黑霉、纯绿青霉及赭曲霉这三种真菌属的次代谢产物。据相关研究表明，OTA对人体伤害的靶器官主要表现对肾脏的毒性作用。因而，食品及药材中OTA含量过大将对人们的身体健康造成严重威胁[3]。
目前，可用于检测OTA的方法较多，常用的方法有化学分析法、仪器分析法及免疫分析法。化学分析法检测OTA含量技术已使用多年，也是最为经典的OTA检测方法，但其不足之处为检测所耗费的时间过长且检测过程极为繁琐。仪器分析法操作简单、快速检测及自动化的特点，可有效提高检测工作效率，但不足之处是易受多因素影响而出现误判现象。本研究检测结果中，OTA标准样本及供试样本的质量浓度（0.5～20ng/ml）与色谱峰面积线性关系良好，且r大于0.9999；加样回收率为65%～108%，该方法的检出限为0.235ug/kg，定量限为2ug/kg。表明免疫亲各柱滤过联合高效液相一荧光检测法用于中药材中OTA含量检测时，结果准确可靠；同时还具有快速及高度统一的特点。免疫亲和柱技术是近年新起的OTA检测方法，其原理是通过利用真菌毒素的特异性抗体进而制成的净化柱，当供试样本溶液通过净化柱是，特异性抗体将有选择性地与O真菌毒素结合，然后用缓冲液冲洗干扰物，以甲醇再次洗柱得到洗脱液，而后采用高效液相一荧光检测法测定OTA含量；与学者郑荣等[4]人的研究结果相仿。综上所述，该检测方法在测定中药材中赭曲霉毒素A含量时，其具有操作相对简单、结果准确可靠等优点，可推广使用。
【参考文献】
[1]匡莹，仇峰，杨美华.枸杞果酒中赭曲霉毒素A液相质谱串联法测定[J].中国公共卫生，2012，11:1520-1522.
[2]李浩.免疫亲和柱层析净化-高效液相色谱法检测中药材中赭曲霉毒素A[J].中国药业，2015，12:62-64.
[3]刘海波，刘建利，贾沙.ICA-HPLC检测枸杞中赭曲霉毒素A提取方法的比较[J].江苏农业科学，2016，07:347-349.
[4]郑荣，简龙海，毛丹，王少敏，王柯，季申.中药中赭曲霉毒素A的测定[J].中成药，2011，10:1757-1760.
论文作者:季宜芳1,姚冬娟（通讯作者）2
论文发表刊物:《医药前沿》2017年5月第15期
论文发表时间:2017/5/31
标签：曲霉论文; 溶液论文; 毒素论文; 试样论文; 色谱论文; 检测方法论文; 样本论文; 《医药前沿》2017年5月第15期论文;