内蒙古科技大学包头医学院
摘要：肿瘤是一种临床上常见、高发、难早诊断、难治愈、严重危害人类生命和健康的慢性疾病，现已成为全球重大的公共卫生问题。中国女性肿瘤发病第1位的是乳腺癌，转移性乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，全年约有120万妇女发生乳腺癌，其中有一半左右的患者在10年内死亡，国内转移性乳腺癌的发病率呈现递增的趋势，己成为部分城市妇女中占首位的恶性肿瘤，而且发病年龄越来越趋向于年轻化。本文试图通过免疫组实验来探究TRPM7与乳腺肿瘤之间的关系，为乳腺癌早期诊断、治疗评价及判断预后提供参考。
关键词：TRPM7；乳腺肿瘤；免疫组织化学
1 材料与方法
1.1 标本
乳腺癌旁组织及癌组织标本取自某某医院手术室，其来源为4例女性患者，年龄范围为25~56岁。30例标本均来自患者术前未接受化学治疗、放射治疗。每组配对的乳腺癌旁组织及癌组织标本来源于同一女性患者。
1.2 免疫组织化学实验原理
链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法，运用免疫基本原理即利用抗原和一抗抗体特异性结合，然后利用一抗与标记生物素、突光素等的二抗进行反应，再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性憐酸酶（AKP）等抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应来显示组织中成分，来达到对待测抗原的定位、定性及半定量研究的目的。阴性对照组以PBS代替一抗。
1.3 组织病理学检验
切除的标本立即使用10%中性福尔马林缓冲液固定；固定的标本依次经过75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、无水乙醇脱水后用石腊包埋成錯块；使用10%多聚赖氨酸浸泡处理载玻片然后后自然风干备用；包埋好的蜡块标本使用切片机制成4um匀厚的组织切片；切好的切片放在恒温烤箱中烤片；烤片后放入二甲基苯中脱錯x2次，每次l0min；脱錯后依次用无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇水化；最后使用H&E染色方法染色后，在光学显微镜下观察其病理特征。
1.4 免疫组织化学实验
使用Elivision工具包，用Elivision标准方法进行免疫组织化学染色。TRPM7抗体（一抗）用0.01M磷酸盐缓冲液（PBS）以1：100的比例稀释后滴加到经过处理的切片上。阴性对照组使用0.01MPBS替代以排除非特异性反应引起的假阳性。以阻断肽吸收实验来检测TRPM7抗体的特异性。
1.5 统计分析
本实验采用SPSS 19.0统计分析软件，对TRPM7分子的表达用卡方检验及Fisher’S确切概率法进行检验分析。当P<0.05时，认为差异显著，有统计学意义。
2 结果
免疫组织化学染色显示TRPM7主要表达于乳腺肿瘤细胞的胞浆并且在所收集标本的癌组织和相应癌旁组织中均有不同程度的表达。TRPM7在30例细胞组织中，高表达者20例（66.7%），低表达或无表达者10例（33.3%）。相应的癌旁组织中高表达者14例（46.7%），低表达或无表达者16例（53.3%），在乳腺肿瘤组织与癌旁组织TRPM7的高表达差异（P=0.011<0.05）有统计学意义。
表1 免疫组织化学实验中TRPM7分子在不同标本中的表达情况
3 讨论
TRPM7是TRPM超家族成员之一。TRPM7基因位于哺乳动物的第15号染色体上，包含39个外显子。TRPM7亚基包含1863个氨基酸残基，分子量为212kDa。TRPM7通道对单价和二价阳离子等具有大小不等通透性。TRPM7的通透性可以被体内外多种因素如细胞内Mg2+、PH等所调控。因此，TRPM7不仅是阳离子通道，它还具有蛋白激酶功能。可通过激活其下游的膜联蛋白-Ⅰ，肌动蛋白-Ⅱ和钙蛋白酶来参与抗炎反应、细胞的生长、收缩以及凋亡等。TRPM7广泛表达于多种哺乳动物心、肝、肾、肺、脑等多种器官和组织中，参与机体多种生理病理过程，例如机体Mg2+的体内平衡、交感神经元递质的释放、心肌的自律性、胃肠道的运动、脂肪肝与肝纤维化、缺血缺氧神经元的坏死、高血压等。随着对TRPM7蛋白研究的深入，其与肿瘤之间的关系越来越受到人们的关注。例如有文献报导TRPM7对多种肿瘤细胞的增殖都是必须的，其中包括白血病、眼癌、胰腺癌乳腺癌、胃癌、头颈部麟状上皮细胞癌等。
TRPM7蛋白作为哺乳动物最有代表性的双功能蛋白，其参与机体多种生理病理过程。在肿瘤方面，其既可能作为非选择性阳离子通道通过介导Mg2+的进入从而解除由于低Mg2+而引起的肿瘤细胞生长阻滞或肿瘤新血管形成障碍，促进肿瘤生长繁殖。还可能作为蛋白激酶，激活其下游的肌动蛋白II或钙调蛋白，进而影响肿瘤细胞的黏附和转移。甚至还可能通过其他尚未发现的机制发挥其作用。然而，不同的组织其研究结果也不全一致，其具体作用机制更是有多重说法。因此，要想全面了解TRPM7蛋白在乳腺肿中的功能及其作用机制，需要更进一步的研究。
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论文作者:张丛林,王培林,衣世明
论文发表刊物:《健康世界》2015年4期
论文发表时间:2015/10/26
标签：组织论文; 肿瘤论文; 蛋白论文; 标本论文; 乳腺癌论文; 乙醇论文; 免疫论文; 《健康世界》2015年4期论文;