【摘要】目的：确定大孔树脂用于消燥湿止带合剂除杂的工艺条件。方法:以连翘苷吸附容量、洗脱率为评价指标，通过静态吸附-洗脱试验筛选大孔树脂型号，通过正交试验研究优选上样液浓度、大孔树脂用量、乙醇洗脱剂浓度及用量对绿原酸得量的影响。结果：消燥湿止带合剂除杂的优化工艺条件：药液质量浓度为1.0g/mL，湿树脂量(g) 与上样量(mL) 比为4∶1，60%乙醇浓度，洗脱剂（ml)与上样量( mL) 比为8∶1。结论：该研究确定了大孔吸附树脂对消燥湿止带合剂的最佳除杂工艺。
【关键词】大孔树脂；燥湿止带合剂；连翘苷；正交试验
【中图分类号】R282 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）29-0222-02
燥湿止带合剂为我院治疗湿热带下妇女带下病有效方[1]，由延胡索、连翘等十味中药组成，方中各药配伍使用具有清热解毒、燥湿止带的功效。大孔树脂是由许多微观小球组成的多孔球状聚合物,可广泛用于中药提取液的除杂和有效成分的富集[1]。由于原制剂为水煎剂，工艺仅为煎煮后滤过包装，储存过程中沉淀较多，影响了患者服药的顺应性，为增加制剂稳定性，在有效成分充分保留的前提下，以君药指标成分连翘苷转移率为考察指标，目前有文献通过D101、AB-8树脂进行连翘药材中连翘苷的富集纯化研究报道[2-3]，尚无对多种树脂应用于连翘苷吸附特性进行系统研究，本文以连翘苷转移率为考察指标，通过静态吸附试验对六种不同型号大孔树脂考察，优选出最佳树脂，通过正交试验对除杂工艺进行研究与优选，为消燥湿止带合剂产业化生产提供依据。
1.仪器与材料
1.1 仪器
Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；KQ-250 型超声波清洗器( 昆山市超声仪器有限公司)；十万分子之一电子天平（METTTOLEDOXS205 ）。
1.2 试药
连翘苷对照品 (中国药品生物制品鉴定所，批号：110821-200609）；AB-8、HPD722、HPD500、HPD600、HP20、AB-8型大孔树脂（沧州宝恩吸附材料科技有限公司）；燥湿止带合剂（自制）；乙腈（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；水（超纯水）；其他试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 色谱条件
参照文献[4]，采用HPLC测定。色谱柱：DiamonsilTM (钻石) C18柱（4.6×250mm，5μm）；乙腈：甲醇（30∶70），检测波长：277nm，流速1.0ml/min，柱温25℃；进样量10μL。
2.2 标准曲线的制备
精密称取连翘苷对照品适量，用甲醇稀释成质量浓度为50、25、12.5、6.125、3.125、1.5625ug/mL，分别进样10 μL，按“2.1”项下色谱条件进行测定。以浓度（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程为 Y＝40.3X+36.58(r＝0.9999）。结果表明，连翘苷在1.5625～50ug/mL浓度范围内与峰面积积分值线性关系良好。分析方法的日内、日间精密度RSD＜3%（n＝5），加样回收率在99%～102%之间，均符合要求。
2.3 大孔树脂型号的筛选
取已处理的6种型号树脂，其中AB-8、HPD722弱极性树脂；HPD500、HPD600极性树脂；HP20、AB-8非极性树脂各10g,放置于100ml锥形瓶中，加入消炎止带合剂1ml，其中连翘苷含量为45.24ug/mL,计算各树脂不同时间点下连翘苷吸附量、总吸附量及吸附率，见表1。
结果表明，以连翘苷回收率作为考察指标，洗脱剂乙醇浓度对连翘苷回收率有显著影响，从表4中可知：A2＞A1＞A3,B3＞B1＞B2,C3＞C2＞C1,D2＞D3＞D1，故最佳树脂除杂工艺应为A2B3C3D2，
3.讨论
由实验结果得知：通过对三类型极性差异的大孔树脂进行消炎止带合剂除杂工艺的比较，大孔树脂AB-8效果最佳，最优化的大孔吸附树脂的纯化条件为：A2B3C3D即上样量为1g/mL药液，湿树脂量(g)与上样量(mL) 比为4∶1，洗脱剂乙醇浓度为60%，洗脱溶剂用量(mL) 与上样量(mL) 比为8∶1。
消燥湿止带合剂为水煎液，含有大量杂质成分，严重影响成品质量，实验过程中同时比较了传统醇沉法与絮凝剂壳聚糖除杂工艺的考察，结果显示水煎液经三种除杂工艺处理后，药液在留样观察中沉淀物均大大减少，均能有较好的澄清度，考虑到传统醇沉法与絮凝剂壳聚糖除杂在去除药液中杂质的同时，方剂中活性成分连翘苷的损失也较大，故推荐大孔树脂进行药液除杂，考虑树脂残留为课题后续研究的重点与难点。
【参考文献】
[1]董珂.大孔树脂技术在中药研究中的应用概况[J].药学实践杂志,2006,24(1):13-15.
[2]杨明，张中文，沈红，等.D101 大孔树脂分离连翘酯苷条件的优化及检测[J].中国药学杂志,2009,44(22):1686-1688.
[3]史秀峰，杨骏，黄孝春,等.连翘中连翘酯苷的大孔树脂纯化工艺[J].中国实验方剂学杂志,2011,17（15):14-16.
[4]蔡清宇，唐慧慧，康琛,等.HPLC测定柴银口服液中连翘苷含量[J].中国实验方剂学杂志,2011,17（16):94-96.
课题项目：宁夏医科大学面上项目 （XY2017074）
论文作者:白云凤,马辉
论文发表刊物:《医药前沿》2019年29期
论文发表时间:2019/11/20
标签：连翘论文; 树脂论文; 燥湿论文; 合剂论文; 杂工论文; 浓度论文; 药液论文; 《医药前沿》2019年29期论文;