杨爱景
【摘 要】 目的 探讨男性不育患者解脲支原体（UU）、沙眼衣原体（CT）感染情况及其对精液质量的影响。方法 采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）对330例男性不育患者（不育组）、148例正常生育男性(生育组)的精液进行UU、CT检测及精液常规分析。结果 不育组UU、CT总检出率为 49.39 %，显著高于对照组 14.86 %（x2= 49.26, p<0.01）；其中单纯UU检出率为39.09% 、单纯CT检出率为16.36 %，明显高于生育组12.16 %、3.38%（x2= 34.79，p<0.01； x2=13.92，p<0.01）；不育组UU、CT两者同时感染20例，检出率为6.06%，不育组UU检出率显著高于CT（x2= 42.53，p<0.01 ）。而感染UU和/CT阳性的患者精子的密度、、活动率、活力明显低于阴性组，精子的畸形率、液化时间、白细胞数明显高于阴性组，差异有统计学意义（Ｐ＜0.05）。结论 UU和CT感染对精子多项指标有影响，精液质量下降，是引起男性不育的重要因素之一，对男性不育患者应常规检测UU和CT。
【关键词】 解脲支原体； 沙眼衣原体； 精子质量； 男性不育； 荧光定量聚合酶链反应；
Male infertility patients with Mycoplasma urealyticum, Chlamydia trachomatis infection and its effect on semen quality. Yang Aijing.The Clinical Laboratory of Shandong Heze Municipal,Hospital,Heze 274000 China.
【Abstract】 Objective Study of male infertility Ureaplasma urealyticum (UU), Chlamydia trachomatis (CT) infection and its effects on semen quality. Methods 330 cases of male infertility (infertility group) were detected by fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR), UU, CT and semen routine analysis were performed in 148 normal fertile men (Group). Results The total detection rate of UU and CT was 49.39% in sterility group,it was significantly higher than 14.86% in control group(x2=49.26,p<0.01);The detection rate of UU、CT was 39.09%、16.36% respectively in sterility group and they were significantly higher than 12.16%、3.3800% in control group(x2=34.79,p<0.01; x2=13.92,p<0.01);17 sterile men were infected with UU and CT at the same time,the positive rate was 6.06%. The detection rate of UU was sighificantly higher than that of CT(x2=42.53,p<0.01) in sterility group. And infected UU and / CT positive patients with sperm density, activity rate, vitality was significantly lower than the negative group, the abnormal rate of sperm, liquefaction time, the number of white blood cells was significantly higher than the negative group, the difference was statistically significant (P < 0.05). Conclusion UU and CT infection had an impact on the number of sperm, sperm quality decline, is one of the important factors that cause male infertility, male infertility patients should be routinely detected UU and CT.
【Key words】 Ureaplasma urealyticum； Chlamydia trachomatis; sperm quality； Male infertility； FQ-PCR.
近年来，男性不育症的发病率居高不下，主要由感染因素和免疫因素引起尿路感染后，未经过有效的治疗，进而引起慢性生殖系统感染。其中解脲支原体(ureaplasma urealyticum ,UU)和沙眼衣原体(chlamydia tracomatis,CT)是人类泌尿生殖系统感染的常见的病原体，可引起泌尿生殖道炎症和男性不育[1]，有研究发现，１５％的男性不育与生殖道感染有关[2]，: UU 和CT在不育患者精液中感染率较高, 可降低精液质量, 精子密度和精子活动力均明显降低[3]为了解本地区男性不育症患者UU、CT的感染情况及其对精液质量的影响，我们对在本院门诊就诊的330例男性不育症患者及148例已生育男性的精液标本，采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术进行UU、CT检测并对精液常规进行分析，现报告如下。
材料与方法
1.材料
1.1病例资料 自2014年5 月至2015年12 月，来我院不孕不育中心就诊的 330例不育男性患者，年龄20 ～ 43 岁，平均(28..6 ± 2..7)岁，均为婚后2年以上不育者，性生活规律，无性功能障碍，不育时间为2～22年，其配偶经妇科检查基础体温双相、月经周期正常、输卵管通畅、排除子宫发育不良及内分泌等因素造成的不孕。正常对照组：为已婚生育能力正常、排除各种感染性疾病的健康男性，共148例，年龄在22～40岁。
1.2试剂与设备 UU﹑CT荧光定量PCR检测试剂盒与PCR仪，采用美国罗氏公司实时自动荧光DNA 扩增仪及配套试剂。采用奥林巴斯CX31型生物显微镜及清华同方彩色精子自动分析系统，按参考文献[3]分析精子存活率、密度、、活动率、活力、精子的畸形率、液化时间、白细胞数量进行测量。
2.方法
2.1标本采集 被检测者采样前2周内未使用过任何抗生素，并禁欲3 ～ 5d，事先排空尿液并清洁双手和阴茎，手淫法将一次射出的精液完整收集，立即放置于37℃水浴箱中，精液液化后，取一部进行常规精液分析，另一部分3000i/min离心10min，取上清液置-200C冰存备检。
2.2荧光定量PCR检测方法：取精浆150?l,12000r/min 离心10min，沉淀加50?l标本处理液，950C 10min,10000r/min 离心10min。取上清液10?l做模板，补加20?l稀释液混悬后进行荧光PCR扩增，扩增条件：950C 2min;然后950C 15S，520C 40S，40个循环。严格按照试剂盒说明书进行操作和判断结果。
2.3 统计学分析 采用SPSS17.0软件进行相关数据处理，计量资料采用( ±s)表示，组间比较采用t检验,计数资料比较采用x2检验，以p<0.05为差异有统计学意义。
结 果
1.不育组与生育组UU、CT感染情况比较 不育组330例和生育组148例男性精液进行FQ﹣PCR扩增，其结果可知：不育组总检出率为 49.39 %，显著高于生育组 14.86%（x2= 49.26 p<0.01），见表1；其中单纯UU检出率为39.09% 、单纯CT检出率为16.36%，明显高于生育组12.16 %、3.38%（x2= 34.79，p<0.01； x2=13.92，p<0.01）；不育组UU、CT两者同时感染20例，检出率为6.06 %，生育组无1例双重感染；不育组UU检出率显著高于CT（x2= 42.53，p<0.01），见表2。
2.不育组与生育组UU、CT感染对精液质量影响分析 通过对不育组UU、CT阳性、UU＋CT阳性的患者及生育组精液各项指标进行比较，其结果可知：其阳性组精液的质量明显生育组。见表3。
讨 论
许多研究表明，泌尿生殖道感染与男性不育关系密切，周欢群 等[4]报道如果精液中存在UU感染可显著地降低精子数量和精子存活率，精子正常形态显著降低，畸形精子数目增多。UU感染可引起男性不育等许多疾病[5]。CT感染导致精子HYD活性及阳性率降低是沙眼衣原体感染引起男性不育的重要机制之一[6]。UU和CT感染后, 男性不育患者精液容量, 精子密度下降, 精子活动力降低及畸形率上升, 引起精液质量异常, 可导致男性不育, 并且UU和CT感染对精液参数的影响基本一致[7]。CT感染可造成精液质量参数异常并可造成男性不育，通过抗菌治疗可有效地根除CT，提高精子质量[8]。文献报道在男性不育的精液中，UU的阳性率为15.6%～51.9%，一般在35%左右[9]。本组研究发现不育男性精液中UU感染率为39.09%，同样明显高于生育组的12.16%，比张志强等[10]、刘鹏等[11]报道的不育男性精液UU的阳性率为22.5%、27.22%，正常生育男性9.5%稍高；比黄长武等 [1] 、陆锋彪[12]不育男性精液Uu的阳性率为41.2%、65 %低。本组研究发现不育男性精液中CT感染率为16.36%，同样明显高于生育组的3.38%，比谢虹雯等[7] CT的阳性率为5.75%稍高；比李会平等[13]、黄长武等[1]报道的不育男性精液CT的阳性率为24.2%、21.6%低。本组研究表明Uu的感染率39.09%明显高于CT的16.36%，说明本地区UU的感染率高。从整体来说不育组UU、C T总感染率明显高于生育组，两者之间有明显差异，这足以说明了UU、CT感染是造成男性不育的重要原因。
对于男性不育症患者，精液分析是一项重要的检查项目，据报道近半个世纪以来世界范围内男性精液质量在逐渐下降；而在我国精液质量也呈现下降趋势 [13] ，精液异常表现为精子存活率低、精子活力下降、精子畸形率增加[14]。研究表明，男性不育原因与一项或多项精液特性异常及精子形态异常有关[15－16]。本组研究中男性不育组UU、CT感染阳性的患者精子中的各项指标均低于生育组，有显著差异。与文献报道一致[7]。
UU、CT感染造成男性不育的机制如下：UU感染引起的附睾炎和慢性前列腺炎将会影响精子的正常功能，大量UU吸附于精子上，使精子变得臃肿，使精子前进阻力增大[13]；CT感染精子后, 不仅吸附于精子表面, 还可进入精子内部造成精子膜和顶体的破坏。对精子的发生、成熟和精子的受精能力具有重要影响。CT还可使精子发生氧化损伤, 使凋亡率升高, 附性腺功能和精浆生化成分发生改变, 导致不育[7]。黄长武等 [1] 、李戬等[17] 、在张文玲等[18]研究UU、CT感染对男性不育精液质量的研究发现，感染组的精子量、PH值、精子密度、精子总活率、畸形率、液化时间、白细胞数、精子向前运动显著低于正常组，两组相比有统计学差异。
男性生殖道致病微物UU与人精子存在共同抗原，可出现交叉反应，使机体产生AsAb[18] 。衣原体主要侵犯生殖系统生殖道的上皮细胞，使精子发生自身免疫反应，从而影响精子的正常功能造成男性不育[16] 。当有UU、CT感染时，炎症使生精小管屏障遭到破坏，病原体可以直接侵入生精细胞曲细精管基底膜屏障，使精子可溶性 抗原外溢，而导致AsAb产生[1] 。UU的特征是生长时需要尿素，其胞浆内尿素酶能分解尿素产NH3，碱性环境具有致病性；UU感染可UU感染可影响精子代谢，UU可通过破坏精子细胞膜损害精子，蓄积的毒性产物H2O2直接破坏精子膜和顶体[17] 。CT寄生过程中产生大量的磷脂酶A2，对精液中的花生四烯酸有分解作用，生成前列腺素引起炎症反应。衣原体进入精子内部后，在精子内部形成网状结构，使精子结构遭到破坏受到损伤，精子活率下降，使男性不育[16]。
综上所述，UU、CT均可影响不育男性精液的质量和功能，可影响精子的各项参数, 能够降低男性的生育能力，因此在治疗不育男性少精、死精、弱精、畸形精子时，不可忽视对UU、CT的检测和治疗，而且UU、CT可通过性生活传播，导致重复感染，对检出阳性的患者，其配偶也应同时检测，发现UU、CT感染要及时治疗，可减少男性不育的发生。
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论文作者:杨爱景
论文发表刊物:《中华临床医师杂志》(电子版)2016年4月第7期
论文发表时间:2016/7/19
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