聂林, 张洹[1]2001年在《三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞株凋亡的研究》文中研究指明目的 研究不同浓度的三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞株的影响。方法 采用细胞染色方法观察细胞凋亡的形态 ,原位末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞的DNA含量的形态 ,原位末端标记法 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,流式细胞仪检测细胞的DNA含量和bcl 2蛋白的表达。结果 0 5 μmol/L～ 2 0 μmol/L三氧化二砷抑制B淋巴瘤细胞株Raji细胞生长 ,出现细胞凋亡的形态学改变 ,流式细胞仪检测Raji细胞亚G1期细胞明显增多 ,bcl 2蛋白的表达明显降低 ,呈现剂量时间依赖效应。 0 5 μmol/L～ 4 0μmol/L三氧化二砷对T淋巴瘤细胞株Jurkat细胞无明显作用。结论 三氧化二砷有明显抑制恶性B淋巴瘤细胞生长和促进细胞凋亡的作用
王婷[2]2010年在《三氧化二砷对T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株作用的研究》文中提出目的:通过检测三氧化二砷(As_2O_3)对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株的增殖抑制,诱导凋亡作用及对细胞周期的影响,探讨As_2O_3对人皮肤T细胞淋巴瘤的作用及可能的作用机制。方法:本课题分别采用MTT,PI单标记流式细胞术和TUNEL方法检测不同时间组,作用浓度分别为2、5、10μmol/L的As_2O_3对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株的增殖抑制,诱导凋亡作用及其对细胞周期的影响;采用RT-PCR方法检测不同时间组,作用浓度分别为2、5、10μmol/L的As_2O_3对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株作用后凋亡相关基因bcl-2基因及内皮生长因子VEGF基因表达的变化。结果:1.在2-10μmol/L As_2O_3的浓度范围内,随药物浓度的增加及作用时间延长,Hut-78细胞的生长受抑制程度逐渐增加。作用浓度为2μmol/L时,各时间组抑制率均较低,作用浓度为10μmol/L,时间为72小时时,抑制率最高达到64.16±6.65%。2.流式细胞仪分析细胞DNA的含量结果显示,Hut-78细胞经As_2O_3作用后,各浓度梯度在24小时时亚二倍体峰均不明显,在48及72小时即有明显亚二倍体峰出现。3.以2-10μmol/L浓度的As_2O_3分别干预Hut-78细胞48、72小时,流式细胞仪分析各期细胞占细胞周期的比例,结果未经As_2O_3作用的细胞其细胞周期中G0-G1期的细胞占较高比例,As_2O_3干预后被阻滞在G2-M期的细胞随着As_2O_3时间及浓度的增加比例逐渐增大,10μmol/L作用72小时时G2-M期比例最高。4.以2-10μmol/L浓度As_2O_3分别干预Hut-78细胞48、72小时,采用Tunel方法检测,各加药组均出现棕褐色的凋亡细胞,随着浓度增加及作用时间延长作用强度也逐渐变化,48小时2μmol/L时凋亡率及坏死率最低,72小时10μmol/L时达最高。5.在As_2O_3 2、5、10μmol/L三组不同浓度的作用下,用RT-PCR方法观察不同作用时间下Hut-78细胞中BCl-2基因及VEGF基因的表达水平,结果显示随As_2O_3浓度的增高及作用时间的延长,BCl-2基因及VEGF基因的表达量呈逐渐下降趋势。结论:在一定的浓度范围内,As_2O_3对Hut-78细胞存在增殖抑制作用,其增殖抑制作用在一定程度上可能与下调VEGF基因的表达有关,同时还存在一定的细胞毒作用:As_2O_3可诱导Hut-78细胞发生凋亡,凋亡机制主要发生在G2-M期,其凋亡作用可能与下调bcl-2基因表达有关。As_2O_3对Hut-78细胞的增殖抑制及诱导凋亡的作用呈时间剂量依赖性。
宋小珍[3]2007年在《B淋巴瘤细胞syk表达变化与三氧化二砷对其抑瘤作用关系的实验研究》文中研究说明目的:Syk是一种广泛表达在造血细胞上的非受体型蛋白酪氨酸激酶,在淋巴细胞发展及活化过程中起着极为重要的作用。近年来的研究认为,Syk在多种恶性肿瘤的发病过程中发挥了重要作用,但其作用机制尚不明确。本研究从基因和蛋白水平检测了syk在B淋巴瘤细胞中的表达,分析了syk表达水平不同的细胞对三氧化二砷的药物敏感性,以及三氧化二砷对syk表达的影响,以探讨syk表达与三氧化二砷对B淋巴瘤细胞抑瘤作用的相互关系。方法:1 B淋巴瘤细胞中syk表达的检测采用免疫细胞化学法和Western blot方法检测Raji、Ramos和Namalwa淋巴瘤细胞中Syk蛋白的表达;通过RT-PCR法半定量检测3种细胞中syk基因水平的表达。2采用MTT法分析不同浓度的三氧化二砷作用不同时间后,对Raji、Ramos和Namalwa细胞增殖反应的抑制作用,从而选择适当的药物浓度和作用时间,用于分析syk对三氧化二砷抑瘤作用的影响。3应用流式细胞术分析不同浓度三氧化二砷(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L)作用于Raji、Ramos细胞72h后,对细胞周期的影响;并采用RT-PCR和流式细胞术从基因和蛋白水平检测syk及周期相关因子p21~(WAF1/CIP1)表达的变化。4应用流式细胞术分析不同浓度三氧化二砷(1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L)作用于Raji、Ramos细胞72h后,对细胞凋亡的影响;并采用RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2 mRNA表达的变化。5.采用RNAi技术,特异性沉默Raji细胞中syk的表达,采用RT-PCR及流式细胞术检测经RNAi后,三氧化二砷对Raji细胞周期相关基因p21~(WAF1/CIP1)表达的影响。结果:1不同B淋巴瘤细胞株中,Raji和Namalwa细胞syk mRNA(514bp)表达阳性,而Ramos细胞syk mRNA(514bp)表达阴性;免疫细胞化学结果显示,Raji和Namalwa细胞胞浆呈阳性染色,Ramos细胞胞浆未着色; Western blot印迹分析结果显示,Raji和Namalwa细胞检测到特异性Syk蛋白的表达,而Ramos细胞未检测到Syk蛋白的表达。2三氧化二砷能明显抑制Raji、Namalwa和Ramos细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性,4μmol/L三氧化二砷处理72h时,对三种B淋巴瘤细胞的抑瘤率分别达到(78.3±3.1)%、(69.6±3.9)%和(47.6±4.6)%,其中对Raji细胞的增殖抑制作用更明显(P<0.01)。3三氧化二砷作用Raji、Ramos细胞72h时,G0/G1期细胞明显增加,S和G2/M期细胞数明显减少,与对照组相比,差异有显著性(P<0.01);经三氧化二砷处理的Raji细胞中Syk、P21蛋白表达上调,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01); syk、p21~(WAF1/CIP1) mRNA的表达也明显增强,与对照组相比明显增高,均有显著性差异(P<0.01)。而经三氧化二砷处理后,Ramos细胞syk、p21~(WAF1/CIP1) mRNA仍呈阴性表达。4三氧化二砷可显著增加Raji和Ramos细胞的凋亡率,不同浓度三氧化二砷作用72h的细胞凋亡率与对照组相比均有显著性差异(P<0.01)。经三氧化二砷处理后,Ramos细胞的bcl-2 mRNA表达受抑,与对照组相比有显著性差异(P<0.01),而Raji细胞bcl-2 mRNA的表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。5 RNAi技术可有效沉默Raji细胞中syk mRNA和蛋白的表达。syk表达被RNAi沉默后,不同浓度三氧化二砷处理对Raji细胞p21 mRNA和蛋白的表达影响不明显,与对照组相比差异无显著性(P>0.05)。结论:1 Raji和Namalwa细胞syk在基因和蛋白水平均表达阳性,Ramos细胞syk基因和蛋白水平均表达阴性。2三氧化二砷可明显抑制Raji、Namalwa和Ramos细胞的增殖,对syk表达阳性的Raji细胞作用更显著。3三氧化二砷可使Raji、Ramos细胞发生G0/G1期阻滞,并可上调Raji细胞中syk和p21~(WAF1/CIP1)的表达,但对Ramos细胞syk和p21~(WAF1/CIP1)的表达无影响。提示三氧化二砷诱导Raji细胞周期阻滞可能与上调p21~(WAF1/CIP1)的表达有关。4三氧化二砷可诱导Raji和Ramos细胞凋亡,并下调Ramos细胞bcl-2 mRNA的表达,但不影响Raji细胞bcl-2 mRNA的表达,提示三氧化二砷诱导Ramos细胞发生凋亡可能与下调bcl-2的表达有关。5阻滞细胞周期发展和诱导细胞凋亡可能是三氧化二砷体外抗肿瘤的作用机制之一,三氧化二砷诱导Raji细胞p21~(WAF1/CIP1)表达上调可能与syk的表达上调有关。
黄德峰[4]2010年在《三氧化二砷诱导SGC7901细胞凋亡及bcl-2、cyclin D1表达的影响》文中进行了进一步梳理背景及目的三氧化二砷(Arsenic trioxide, ATO)是中药砒霜的主要有效成分,近年来大量的研究表明三氧化二砷除了能治疗血液系统疾病外,对包括胃癌在内的多种恶性实体瘤也有强大的抗癌作用。胃癌是我国常见的恶性肿瘤,其对放、化疗的敏感性均较低,死亡率高,晚期尚缺乏有效的治疗手段,因此寻找新的治疗药物和治疗手段乃当务之急。三氧化二砷可以诱导恶性肿瘤细胞凋亡进而抑制肿瘤生长从而发挥治疗作用,其分子机制涉及多个凋亡调控分子。细胞凋亡失常参与了肿瘤发病过程的多个环节。Bcl-2基因(B-cell lymphoma/leukemia-2 gene,B细胞淋巴瘤或白血病基因-2),是从滤泡性淋巴瘤中分离出的一种癌基因,也是细胞凋亡抑制因子,具有抑制细胞凋亡、延长细胞寿命的功能。目前认为,Bcl-2家族中促凋亡因子和抗凋亡因子的相对表达水平至少部分决定了细胞对凋亡信号的反应性。周期素D1(cyclin D1)基因是近年提出的重要的原癌基因,其蛋白产物在细胞周期关键限速点G1／S期转换中起重要正调控作用。Cyclin D1的异常调节将导致G1期缩短,细胞提前进入S期,使细胞增殖失控从而形成肿瘤。本研究应用三氧化二砷作用于胃腺癌SGC7901细胞,观察三氧化二砷对胃腺癌SGC7901细胞凋亡及细胞周期的影响,以及此过程中bcl-2、cyclinD1基因表达的改变,探讨三氧化二砷诱导胃腺癌SGC7901细胞凋亡的机制。材料和方法1.分别应用不同浓度的三氧化二砷作用于胃腺癌SGC7901细胞,作用不同时间后采用MTT检测法对细胞增殖活性进行检测；采用流式细胞仪(FCM)AnnexinV/PI双染法检测细胞周期及细胞凋亡率；应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测bcl-2、cyclinD1基因的转录水平；用免疫组织化学方法检测三氧化二砷对胃腺癌SGC7901细胞Bcl-2、CyclinD1蛋白表达的影响。2.统计学分析：实验数据应用SPSS13.0软件分析处理,连续型变量比较采用t检验,多样本均数比较采用单因素方差分析,分类变量比较采用卡方检验,相关性分析采用pearson相关分析。P<0.05作为有统计学意义的判定标准。结果1.稍高浓度(≥2μmol/L)的三氧化二砷可抑制胃腺癌SGC7901细胞增殖,并有剂量和时间依赖性。2.三氧化二砷可以诱导胃腺癌SGC7901细胞凋亡,随着三氧化二砷浓度的增高,细胞凋亡数逐渐增高,1μmol/L组与对照组比较细胞凋亡数差异无显著性(P>0.05),而较高浓度组与对照组相比较细胞凋亡数差异有统计学差异(P<0.05)。3.三氧化二砷处理48h后细胞周期有了显著的变化,G1期细胞百分比增加,S期细胞百分比下降,与对照组相比有统计学差异(P<0.01)。4.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测bcl-2、cyclin D1基因的转录水平,发现实验组bcl-2、cyclin D1基因的表达与对照组相比明显减低(P<0.01)。5.用三氧化二砷处理后,胃腺癌SGC-7901细胞Bcl-2、Cyclin D1蛋白的表达都下降,且两者之间有相关性,有统计学意义(r=0.948,P<0.01)。结论1.三氧化二砷可有效抑制胃腺癌SGC7901细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期,与作用剂量和作用时间呈正相关。这一过程可能与三氧化二砷抑制bcl-2、cyclin D1基因的表达有关。2.三氧化二砷可以抑制胃腺癌SGC7901中Bcl-2和Cyclin D1蛋白的表达,且Bcl-2和Cyclin D1的表达有相关性,这可能是三氧化二砷抑制肿瘤细胞凋亡的机制之一。
张继青, 钟雷, 李进娥[5]2015年在《三氧化二砷对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji凋亡的诱导作用及C-myc表达的影响》文中进行了进一步梳理目的探讨三氧化二砷(As2O3)对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji凋亡的诱导作用及C-myc表达的影响。方法通过噻唑蓝比色法检测观察As2O3对Raji细胞增殖的影响,流式细胞仪观察As2O3对Raji细胞凋亡的诱导作用,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测As2O3对C-myc mRNA表达的影响。结果 As2O3对Raji细胞生长有抑制作用,呈剂量和时间依赖关系(P<0.01);As2O3对Raji细胞有诱导凋亡作用,呈剂量和时间依赖关系(P<0.01);随着As2O3浓度升高,C-myc的表达水平明显下降(P<0.01)。结论 As2O3对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji具有增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能与C-myc表达水平明显下降有关。
孙启鑫[6]2007年在《硼替佐米联合三尖杉酯碱或三氧化二砷对急性髓系白血病细胞增殖、凋亡的研究》文中研究表明背景与目的：急性白血病是一类起源于造血干细胞病变的恶性克隆性疾病，虽然近年来以大剂量化疗为主的综合疗法的广泛应用，使其治疗效果有了明显提高，但仍然有相当一部分患者因疾病复发或耐药而转变成难治，因此积极寻求新的治疗方法，在当前仍然显得尤为必要。目前受格列卫治疗慢性粒细胞白血病(CML)巨大成功的影响，分子靶向药物的研究正成为肿瘤治疗的领域的新热点，而这其中又以蛋白酶体抑制剂的研究更为引人注目。近年研究发现，蛋白酶体是一类广泛存在于所有真核细胞内具有多种催化功能的酶复合体，其在细胞内蛋白质降解、MHC-Ⅰ类抗原呈递、细胞内部错误折叠蛋白的修复上发挥着重要功能。多种与细胞周期调控、信号转导、细胞凋亡相关蛋白的正常代谢，都与其功能的正确执行密切相关。特异性阻断蛋白酶体功能将显著改变此类蛋白在细胞内的表达水平，导致细胞内蛋白质代谢发生紊乱，从而诱导细胞凋亡发生。目前作为第一个被FDA批准的蛋白酶体抑制剂类药物——硼替佐米(bortezomib，Bor)已经进入临床，并且在难治、复发性多发性骨髓瘤(MM)的治疗中显示出良好疗效。此外，在其他恶性血液系统疾病以及实体瘤方面，亦有初步结果报道：bortezomib单独或联合其它药物对非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、成人T细胞白血病、肺癌、卵巢癌等具有良好疗效。目前，除MM外国际上对硼替佐米的研究较多局限于淋巴瘤、CLL，对于国内高发的急性髓系白血病方面的研究至今报道很少，为此我们探讨bortezomib对急性髓系白血病细胞增殖和凋亡影响，特别是与国内常用白血病化疗药物三尖杉酯碱(harringtonine，HT)、三氧化二砷(Arsenic trioxide，As_2O_3)联合应用的效果，旨在为今后白血病治疗探索新的方法。方法：选取HL60白血病细胞为研究对象，细胞培养体系为含10％小牛血清RPMI-1640培养基。为确定bortezomib对HL60白血病细胞的最佳处理浓度和时间，先用0～1000nM剂量体外处理HL60白血病细胞0～48h，依据台盼兰拒染计数法检测各浓度处理后细胞增殖状况，确定0～50nM剂量为后续实验浓度。bortezomib单独应用后细胞增殖活力变化采用MTT比色法检测，细胞凋亡采用DNA凝胶电泳、Hoechst33342荧光染色、流式细胞仪法检测。确定bortezomib作用24h为最佳处理时间。选择7.5～75nM HT和5～50μM As_2O_3处理HL60白血病细胞24h，分别确定其对细胞的IC_(50)值。选择此剂量HT或As_2O_3与bortezomib联合处理HL60白血病细胞和8例AML患者骨髓单个核细胞(白血病细胞比例(56～95％)，并用相同的方法检测各联合组细胞增殖、凋亡变化，统计分析各组间细胞增殖、凋亡之差异。结果：1．bortezomib对HL60白血病细胞增殖、凋亡的影响台盼兰拒染计数法显示：0、10、20、30、40nM bortezomib处理HL60白血病细胞6h，各浓度间活细胞数差异无显著性意义(P=0.461)，延长作用时间到12小时，各浓度对HL60白血病细胞生长抑制效应逐渐显现，随时间延长和浓度增加，各处理组活细胞数逐渐减少，其中30nM剂量处理24h，可基本抑制HL60细胞增殖。MTT比色法显示：10～50nM bortezomib处理HL60细胞12～48h，各剂量组细胞增殖活性均出现下降。其中12h时，各组细胞活性分别降至对照组的82％、75％、60％、50％和44％。24h时，各剂量组细胞活性下降为对照的77％、46％、31％、24％和23％。与12h结果比较，差异均有显著性意义(P均＜0.05)。但与48h比，各组细胞活性未见明显下降，(P均＞0.05)。琼脂糖凝胶电泳显示：10～50nM bortezomib处理HL60细胞12h，电泳均可见DNA Ladder出现，其中10nM剂量组细胞凋亡不完全，可见正常基因组条带与DNA Ladder共存；处理24h时各剂量组仍可见DNA Ladder出现，但10nM组正常基因组条带消失。Hoechst33342荧光染色显示：10～50nM bortezomib均可诱导HL60白血病细胞凋亡，且每视野下高剂量组凋亡细胞数量明显多于低剂量组。流式细胞仪检测显示：培养12h对照组亚G_1期细胞比例为1.9％，而10nM、30nMbortezomib处理组则分别为5.9％和59％，与对照组相比差异具有显著性意义(P均＜0.05)。延长处理时间至24h，对照组亚G_1期细胞比例无明显变化，而10nM、30nM bortezomib处理组亚G_1期细胞比例分别增加至19％和62％。与12h结果相比较，10nM组两处理时间之间结果具有显著性差异(P均＜0.05)，但30nM组处理效果不受时间影响(59％：62％)。2．bortezomib联合三尖杉酯碱或三氧化二砷对HL60白血病细胞增殖、凋亡的影响MTT比色法显示：HT与As_2O_3单独应用对HL60白血病细胞同样具有浓度依赖性的抑制增殖作用。其对HL60白血病细胞24h的IC_(50)剂量分别为30nM和15μM。选择此剂量HT、As_2O_3分别与10～50nM bortezomib联合处理HL60白血病细胞，在达到药物最大抑制效果前，10nM bortezomib联合HT或As_2O_3处理组细胞活性显著降至40％和33％，与同剂量单药组相比，差异均具有显著性意义(P均＜0.05)。Hoechst33342荧光染色显示：HT、As_2O_3单独应用均可诱导HL60白血病细胞凋亡，分别与bortezomib联合后，凋亡细胞数量显著多于药物各自单独处理时效果。流式细胞仪分析显示：30nM HT和15μM As_2O_3处理HL60白血病细胞24h，其凋亡亚G_1期细胞比例分别为11％和19％，与对照组2％相比差异均具有显著性意义(P均＜0.05)。相同条件下，同剂量HT、As_2O_3与10nM bortezomib联合后，凋亡亚G_1期细胞比例分别增至44％和47％，与各单药组效果相比差异同样具有显著性意义(P均＜0.05)。3．bortezomib联合三尖杉酯碱或三氧化二砷对急性髓系原代白血病细胞增殖的影响8例治疗前AML患者骨髓单个核细胞处理后显示：10～500nM bortezomib体外对急性髓系原代白血病细胞同样具有浓度依赖性的抑制增殖作用，随bortezomib剂量增加，各患者原代白血病细胞活力逐渐下降，但除500nM外，10～100nM剂量组之间细胞活力差异无统计学意义(P均＞0.05)。HT与As_2O_3单药对急性髓系原代白血病细胞同样具有浓度依赖性的抑制增殖作用，但与HL60白血病细胞株相比，同剂量HT(30nM)处理后，原代细胞增殖活力显著高于HL60白血病细胞株结果，而As_2O_3(15μM)处理后两者间无明显差异。20nM bortezomib联合30nM HT或15μM As_2O_3处理急性髓系原代白血病细胞后，其细胞活力均比单药时降低，但无统计学差异，(P＞0.05)。但是，bortezomib联合As_2O_3组与As_2O_3单药组细胞活性差异接近临界值(0.51：0.61，P=0.07)。结论：1．bortezomib单药对急性髓系HL60白血病细胞具有时间-浓度依赖性的抑制增殖和诱导凋亡作用，随时间延长和剂量增加作用显著增强。2．HT与As_2O_3单药对急性髓系HL60白血病细胞均具有剂量依赖性的抑制增殖作用，选其各自的IC_(50)剂量分别与bortezomib联合处理后，对HL60白血病细胞的作用比各自单独应用时明显增强。3．bortezomib、HT、As_2O_3单药对急性髓系原代白血病细胞同样具有剂量依赖性的抑制增殖作用，但与HL60白血病细胞株结果相比，bortezomib、HT对原代白血病细胞敏感性弱，而As_2O_3敏感性无显著变化。4．bortezomib与HT或As_2O_3联合作用原代白血病细胞均具有抑制增殖作用，但与各自单用时比，联合HT的增殖抑制率无明显提高，而联合As_2O_3时很有可能优于单药As_2O_3处理的效果(P=0.07)。
聂林[7]2000年在《三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞凋亡的研究》文中研究表明目的：观察不同浓度的三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞株和原代淋巴瘤细胞的影响，方法：采用Gimsa染色法观察细胞凋亡的形态，原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞，流式细胞仪检测细胞的DNA含量和bcl-2蛋白的表达。结果：0.5-2.0μmol/L三氧化二砷抑制B淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖的同时，观察到凋亡的形态学改变，染色质浓缩，核碎裂，细胞膜完整，流式细胞仪检测Raji细胞亚G_1期细胞明显增多，bcl-2蛋白的表达明显降低，呈现剂量时间依赖效应。0.5-4.0μmol/L三氧化二砷不能抑制T淋巴瘤细胞株Jurkat细胞增殖，也不诱导凋亡。0.5-2.0μmol/L三氧化二砷能抑制原代淋巴瘤细胞的活力，诱导凋亡。结论：三氧化二砷可以抑制恶性B淋巴瘤细胞株和原代淋巴瘤细胞的活力、增殖，诱导细胞凋亡，为临床治疗恶性淋巴瘤提供依据。
刘英慧[8]2006年在《三氧化二砷对白血病HL-60细胞株体外作用研究》文中进行了进一步梳理目的:三氧化二砷(As_2O_3)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)疗效显著,缓解率高达85%以上,不少研究发现三氧化二砷在体外可以抑制多种白血病细胞的增殖,促进凋亡,也可抑制多种实体瘤细胞株的增殖。临床上三氧化二砷除了可以治疗APL外,已经作为治疗多发性骨髓瘤的二线药物。不少研究表明三氧化二砷可通过降解PML/RARa蛋白的表达来诱导含有t(15:17)基因的APL白血病的凋亡来达到治疗目的。为研究三氧化二砷对人白血病细胞株HL-60细胞的作用,本研究观察了三氧化二砷对HL-60细胞的抑制增殖、诱导凋亡和促进分化作用并初步探讨了其作用的可能机制。 方法:1、用MTT法测定了三氧化二砷对HL-60细胞增殖抑制的IC50值;台盼蓝拒染实验测定三氧化二砷作用下HL-60细胞生长曲线的变化。2、用流式细胞仪检测细胞膜上的CD11b的表达和细胞凋亡率。3、琼脂糖电泳检测DNA条带。4、Hoecst33258染色后荧光显微镜观察细胞核的变化。5、用RT-PCR方法检测c-myc基因在mRNA水平上的表达。6、免疫印迹法测定bcl-2、bcl-XL、Ki-67、bax、p21、1927蛋白的表达。实验结果用SPSS10.0软件进行统计学分析。 结果:三氧化二砷抑制HL-60细胞增殖,呈时间和剂量效应;三氧化二砷处理HL-60细胞24小时,48小时和72小时的IC50值分别为13.21μM、6.4μM和1.9μM。在细胞增殖受抑制的同时有ki-67基因在蛋白水平上明显下降而抑制增殖蛋白p21和p27明显升高。10μM三氧化二砷处理处理HL-60细胞24小时到48小时可见到DNA出现梯形条带;处理24-48小时HL-60细胞核呈现细胞核浓缩和核碎裂现象。流式细胞仪测定12,24和48小时的细胞凋亡率分别为(8.5±2.1)%,(12.8±3.4)%及(21.4±5.8)%,而培养48小时的HL-60细胞自然凋亡率仅为(1.5±0.5)%(P<0.05)。三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡同时有caspase-3活化和PARP的断裂,同时抗凋亡蛋白bcl-2和bcl-XL表达下调,而促凋亡蛋白bax明显上调。2.5μM三氧化二砷处理HL-60细胞90小时后,细胞分化的标志性细胞膜抗原CD11b表达明显升高,由(14.5±2.1)%升高
陈德福, 李睿, 梁彦, 杜德奎, 魏熙胤[9]2003年在《三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞株的作用及临床研究初探》文中提出目的 :研究不同浓度的三氧化二砷 (As2O3)对恶性淋巴瘤细胞系和淋巴瘤患者活体淋巴瘤细胞作用及其初步临床应用效果。方法 :用MTT法检测不同浓度的As2O3 对Daudi,Raji及活体细胞株生长的影响 ,用电镜及流式细胞仪检测As2O3 诱导淋巴瘤细胞凋亡情况。12例III～IV期的非霍奇金淋巴瘤患者 ,给予0 1%As2O310mL/d ,30d为1个疗程 ,缓解后巩固治疗采用原方案每月连用7d。结果 :1 0～2.0μmol/L的As2O3 可明显降低Daudi,Raji及活体细胞株活力 ,可见明显凋亡小体 ;用流式细胞仪检测出现DNA含量低于G1 期的亚G1 期细胞 ,在G1/G0 期前出现凋亡峰 ,其数量与药物作用时间呈正相关。12例患者单用As2O3 治疗1个疗程 ,完全缓解1例 ,部分缓解2例 ,稳定6例 ,均无骨髓抑制及其它副作用等。结论 :一定浓度的As2O3 显著抑制3株淋巴瘤细胞的生长 ,诱导凋亡。As2O3 对一般化疗无效者 ,仍有一定疗效。
张学美, 王婷, 李晓进, 赵亮, 李惠民[10]2011年在《一定浓度下三氧化二砷对T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株增殖的影响》文中研究指明背景:近年来有将三氧化二砷试用于T细胞肿瘤的有效报道,但未见其治疗机制的相关研究。目的:检测三氧化二砷对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞的抑制增殖、诱导凋亡及细胞周期的影响。方法:分别采用MTT、PI单标记流式细胞术和TUNEL法检测2,5,10μmol/L的三氧化二砷干预24,48,72h,对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株抑制增殖、诱导凋亡和细胞周期的影响,及其凋亡相关基因bcl-2及血管内皮细胞生长因子基因表达的变化。结果与结论:在一定的浓度范围内,三氧化二砷对Hut-78细胞存在增殖抑制作用,其增殖抑制作用在一定程度上可能与下调血管内皮细胞生长因子基因的表达有关,同时还存在一定的细胞毒作用;三氧化二砷可诱导Hut-78细胞发生凋亡,凋亡机制主要发生在G2～M期,其凋亡作用可能与下调bcl-2基因表达有关。三氧化二砷对Hut-78细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用呈时间剂量依赖性。
参考文献：
[1]. 三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞株凋亡的研究[J]. 聂林, 张洹. 肿瘤. 2001
[2]. 三氧化二砷对T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株作用的研究[D]. 王婷. 昆明医学院. 2010
[3]. B淋巴瘤细胞syk表达变化与三氧化二砷对其抑瘤作用关系的实验研究[D]. 宋小珍. 河北医科大学. 2007
[4]. 三氧化二砷诱导SGC7901细胞凋亡及bcl-2、cyclin D1表达的影响[D]. 黄德峰. 郑州大学. 2010
[5]. 三氧化二砷对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji凋亡的诱导作用及C-myc表达的影响[J]. 张继青, 钟雷, 李进娥. 临床荟萃. 2015
[6]. 硼替佐米联合三尖杉酯碱或三氧化二砷对急性髓系白血病细胞增殖、凋亡的研究[D]. 孙启鑫. 南方医科大学. 2007
[7]. 三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞凋亡的研究[D]. 聂林. 暨南大学. 2000
[8]. 三氧化二砷对白血病HL-60细胞株体外作用研究[D]. 刘英慧. 青岛大学. 2006
[9]. 三氧化二砷对恶性淋巴瘤细胞株的作用及临床研究初探[J]. 陈德福, 李睿, 梁彦, 杜德奎, 魏熙胤. 天津医药. 2003
[10]. 一定浓度下三氧化二砷对T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株增殖的影响[J]. 张学美, 王婷, 李晓进, 赵亮, 李惠民. 中国组织工程研究与临床康复. 2011
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